徐茂紅 趙克霞 許應(yīng)生 薛曉輝 屠后為 陳莉莉 趙學(xué)群 吳茂林

摘要 [目的]分析安徽大別山區(qū)金寨人工種植靈芝的質(zhì)量。[方法]依據(jù)2015版《中國(guó)藥典》，采用薄層色譜法（TLC法）鑒別靈芝子實(shí)體，采用灰分測(cè)定法、浸出物測(cè)定法分別測(cè)定其灰分、浸出物含量，采用紫外分光光度法（UV法）測(cè)定其中多糖、三萜及甾醇含量。[結(jié)果]靈芝子實(shí)體供試品與對(duì)照品在色譜相應(yīng)位置顯現(xiàn)相同顏色熒光斑點(diǎn)；灰分和浸出物含量分別小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分別大于0.90%、0.50%。[結(jié)論]安徽大別山區(qū)金寨人工種植靈芝質(zhì)量符合2015版《中國(guó)藥典》要求，可用于開發(fā)保健品或疾病輔助治療藥物。

關(guān)鍵詞 靈芝子實(shí)體；質(zhì)量分析；安徽大別山區(qū)金寨

中圖分類號(hào) S567.3+1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2018）15-0160-03

Abstract [Objective]The research aimed to study the quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area.[Method ]According to the Chinese Pharmacopoeia 2015， using TLC method to determine Ganoderma lucidum fruit body， the contents of ash and extract were measured by ash determination and extract determination， and the contents of Ganoderma lucidum polysaccharides and triterpenes were measured by UV method. [Result] Ganoderma lucidum fruit body for the test product and the reference substance in the corresponding position of the chromatogram showed the same color fluorescent spots.The contents of ash and extract were less than 3.2% and greater than 3.0%， andpolysaccharides and triterpenes were greater than 0.90% and 0.50%. [Conclusion]The quality of cultivated Ganoderma lucidum in Anhui Jinzhai Dabie Mountain area was satisfied with the Chinese Pharmacopoeia 2015， and it can be uesd to health care products and adjuvant treatments.

Key words Ganoderma lucidum fruit body；Quality analysis；Anhui Jinzhai Dabie Mountain area

大別山區(qū)是目前國(guó)家11個(gè)集中連片特殊困難地區(qū)之一[1]，位于大別山區(qū)的金寨縣地處安徽省西部（115°22′19″～116°11′52″E、31°06′41″～31°48′51″N），大別山主脈北坡，屬亞熱帶濕潤(rùn)性季風(fēng)氣候，該地氣候條件較適合靈芝的人工種植。為促進(jìn)地方經(jīng)濟(jì)發(fā)展，當(dāng)?shù)卣e極給予政策和資金支持，引導(dǎo)企業(yè)和農(nóng)戶大力種植靈芝。目前，該地靈芝產(chǎn)品的種植、加工、研發(fā)及銷售已成為當(dāng)?shù)亟?jīng)濟(jì)發(fā)展的重要支柱之一[2]。

靈芝（Ganoderma lucidum）是擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬真菌，《中國(guó)藥典》2015年版一部中將赤芝[Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.]或紫芝（Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang）的干燥子實(shí)體作為藥材來(lái)源。長(zhǎng)期以來(lái)我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)一直視其為滋補(bǔ)強(qiáng)壯、固本扶正的名貴中藥。現(xiàn)代研究表明，靈芝多糖、三萜類等主要活性成分具有抗腫瘤[3]、抗氧化[4-5]、調(diào)節(jié)免疫功能[6]等生物活性。筆者對(duì)安徽大別山區(qū)金寨產(chǎn)靈芝子實(shí)體粗粉進(jìn)行鑒別，并對(duì)其總灰分、浸出物、多糖和三萜含量等進(jìn)行測(cè)定和研究，以期為靈芝產(chǎn)品的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器

Xiangyi L-550離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀儀器有限公司）；AB135-S分析天平（瑞士梅特勒公司）；ZMT型數(shù)顯馬弗爐（長(zhǎng)沙市秋龍儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 材料

靈芝子實(shí)體，安徽利民生物科技股份有限公司提供；葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品（上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司）；甘露糖標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr.Ehrenslorfer公司）；木糖標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr.Ehrenslorfer公司）；半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品（德國(guó)Dr.Ehrenslorfer公司）；三氟乙酸（EU公司）。

1.3 方法

1.3.1 灰分測(cè)定法。測(cè)定用的供試品粉碎，通過(guò)二號(hào)篩，混均勻后，取供試品2～3 g（如測(cè)定酸不溶性灰分，可取供試品 3～5 g），置熾灼至恒重的坩堝中，稱定重量（準(zhǔn)確至0.01 g），緩緩熾熱，注意避免燃燒，至完全炭化時(shí)，逐漸升高溫度至500～600 ℃，使完全灰化并至恒重。根據(jù)殘重，計(jì)算供試品中灰分含量（%）。

1.3.2 浸出物測(cè)定法。取供試品2～4 g，精密稱定，置100～250 mL的錐形瓶中，加水50～100 mL，密塞，稱定重量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定重量，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用干燥濾器濾過(guò)，精密量取濾液25 mL，置于已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥 3 h，置干燥器中冷卻30 min，迅速精密稱定重量。除另有規(guī)定外，以干燥品計(jì)算供試品中水溶性浸出物的含量（%）。

1.3.3 靈芝子實(shí)體多糖溶液制備。

1.3.3.1 對(duì)照品溶液制備。取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成0.12 mg/mL的溶液，即得。

1.3.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密量取“1.3.3.1”中對(duì)照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2 mL，各加水至2.0 mL，迅速精密加入硫酸蔥酮溶液（精密稱取蔥酮0.1 g，加硫酸100 mL使溶解，搖勻）6 mL，立即搖勻，放置15 min后，立即置冰浴中冷卻15 min，取出，以相應(yīng)的試劑為空白，用紫外-可見(jiàn)分光光度法在625 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3.3 供試品溶液的制備。取本品粉末約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水60 mL靜置1 h，加熱固流4 h，趁熱濾過(guò)，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水60 mL，加熱回流3 h，趁熱濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)盟? mL溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇75 mL，搖勻，在4 ℃放置12 h，離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，離心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.3.4 靈芝子實(shí)體三萜溶液制備。

1.3.4.1 對(duì)照品溶液制備。取齊墩果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成0.2 mg/mL的溶液，即得。

1.3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。精密量取“1.3.4.1”中對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分別置15 mL具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液（精密稱取香草醛0.5 g，加冰醋酸使溶解成10 mL，即得）0.2 mL、高氯酸0.8 mL，搖勻，在70 ℃水浴中加熱15 min，立即置冰浴中冷卻5 min，取出，精密加入乙酸乙酯4 mL，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，按照紫外-可見(jiàn)分光光度法在546 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4.3 供試品溶液的制備。取本品粉末約2 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水60 mL靜置1 h，加熱固流4 h，趁熱濾過(guò)，用少量熱水洗滌濾器和濾渣，將濾渣及濾紙置燒瓶中，加水60 mL，加熱回流3 h，趁熱濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)盟? mL溶解，邊攪拌邊緩慢滴加乙醇75 mL，搖勻，在4 ℃放置12 h，離心，棄去上清液，沉淀物用熱水溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，取溶液適量，離心，精密量取上清液3 mL，置25 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

1.3.5 樣品含量測(cè)定。分別精密稱取6份靈芝子實(shí)體粉末，按照“1.3.1”和“1.3.2”方法，計(jì)算總灰分和浸出物含量。按照“1.3.3.3”和“1.3.4.3”方法制備供試品溶液，分別計(jì)算多糖和三萜含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 靈芝子實(shí)體的鑒別

按照2015年版《中國(guó)藥典》第一部靈芝【鑒別】項(xiàng)（2）法進(jìn)行，結(jié)果見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，供試品薄層色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，比移值（Rf）相同，且出現(xiàn)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

2.2 靈芝子實(shí)體的總灰分含量

取供試品能通過(guò)二號(hào)篩的粉末2～3 g，精密稱定，平行6份，按照2015年版《中國(guó)藥典》第四部【通則2302】法進(jìn)行。根據(jù)殘?jiān)亓?，?jì)算供試品中總灰分的含量，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。檢測(cè)結(jié)果顯示，重復(fù)性較好，且符合2015年版《中國(guó)藥典》不超過(guò)3.2%的限量要求。

2.3 靈芝子實(shí)體的浸出物含量

取供試品粉末2～4 g，精密稱定，平行6份，按照2015年版《中國(guó)藥典》第四部【通則2201浸出物測(cè)定法】項(xiàng)熱浸法進(jìn)行。根據(jù)浸出物重量，計(jì)算供試品中浸出物的含量，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。檢測(cè)結(jié)果顯示，重復(fù)性較好，且符合2015年版《中國(guó)藥典》不得少于3.0%的要求。

2.4 靈芝子實(shí)體的多糖含量

精密量取供試品溶液2 mL，置10 mL具塞試管中，按照“1.3.3.2”標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“迅速精密加入硫酸蔥酮溶液6 mL”起，同法操作，測(cè)定吸光度為0.027 2。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），得出回歸方程y=0.573 8x+0.014 1，再根據(jù)回歸方程計(jì)算得出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的含量為2.28%，滿足2015版《中國(guó)藥典》不得少于0.90%的限量要求。

2.5 靈芝子實(shí)體的三萜含量

精密量取供試品溶液0.2 mL，置15 mL具塞試管中，按照“1.3.4.2”標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“揮干”起，同法操作，測(cè)定吸光度為0.013 0。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖3），得出回歸方程y=1.573 7x-0.001 1，再根據(jù)回歸方程計(jì)算得出供試品溶液中齊墩果酸的含量為0.89%，滿足2015版《中國(guó)藥典》不得少于0.50%的限量要求。

3 結(jié)論與討論

已有研究表明，靈芝及其提取物抗氧化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等藥理作用與其靈芝多糖、三萜含量密切相關(guān)[7-8]。該研究采用蒸餾水、乙醇溶液浸提，應(yīng)用UV法測(cè)定靈芝多糖、三萜含量，結(jié)果表明，靈芝子實(shí)體供試品與對(duì)照品在色譜相應(yīng)位置顯現(xiàn)相同顏色熒光斑點(diǎn)；灰分和浸出物含量分別小于3.2%、大于3.0%；多糖、三萜含量分別大于0.90%、0.50%?？梢?jiàn)，安徽大別山區(qū)金寨人工種植靈芝質(zhì)量符合2015版《中國(guó)藥典》限量要求，可為靈芝系列產(chǎn)品開發(fā)提供試驗(yàn)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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