李小平 邱俊銘

摘要 [目的]通過(guò)對(duì)荔枝草的生藥學(xué)研究，為荔枝草的開(kāi)發(fā)利用、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定和生藥學(xué)研究提供依據(jù)。[方法]采用性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定的方法進(jìn)行研究，并對(duì)其主要成分黃酮進(jìn)行含量測(cè)定。[結(jié)果]荔枝草莖的橫切面和葉的橫切面顯微特征較為明顯，可作為荔枝草鑒別特征。方法學(xué)考察表明，蘆丁在0.005～0.105 mg/mL線(xiàn)性關(guān)系良好（r=0.999 9），平均加樣回收率為93.38%（RSD=2.8%）。[結(jié)論]該研究結(jié)果可為荔枝草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

關(guān)鍵詞 荔枝草；生藥學(xué)；黃酮含量

中圖分類(lèi)號(hào) R282.5文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A文章編號(hào) 0517-6611（2018）15-0158-02

Abstract [Objective] The research aimed to provide the basis for the development and utilization of Sebastiania herba， the establishment of quality standards and the research of pharmacognosy through the pharmacogenetic study of Sebastiania herba. [Method]The plants were identified by the methods of trait identification， microscopic identification and physicochemical identification，and its main component flavonoid content was determined.[Result]The microscopic features of the stem cross-sections and leaf cross-sections of Sebastiania herba were obvious， which could be used as the identification characteristics of Sebastiania herba.The methodological investigation showed that rutin had a good linear relationship between 0.005 and 0.105 mg/mL （r=0.999 9）， and the average recovery was 93.38% （RSD=2.8%）.[Conclusion]The results of this study can provide a basis for the quality standard of Sebastiania herba.

Key words Sebastiania herba；Pharmacognosy；Flavonoids content

荔枝草為大戟科地楊桃屬植物地楊桃[Sebastiania chamaelea（L.）Muell.-Arg]的干燥全草，又名地楊桃、坡荔枝[1]，主要分布于廣東、廣西和海南等熱帶和亞熱帶省區(qū)。該植物生于山坡、草地、溪旁，海南各地常見(jiàn)[2]，根據(jù)《廣西藥用植物名錄》記載，性味咸，寒，入肝經(jīng)，民間廣泛用全草入藥[3]，治療眩暈和頭痛，尤其治療美尼爾氏綜合癥效果明顯，其汁液具有收斂、強(qiáng)壯之功效[4]。目前，關(guān)于荔枝草的報(bào)道有地楊桃酯類(lèi)化學(xué)成分分析[5]和地楊桃中游離氨基酸分析[6]，而關(guān)于荔枝草相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。為了更好地開(kāi)發(fā)應(yīng)用，筆者對(duì)荔枝草進(jìn)行生藥學(xué)的研究，并對(duì)其主要有效成分之一黃酮的測(cè)定方法進(jìn)行考察，為荔枝草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象。荔枝草采自海南省三亞地區(qū)，共3批，分別編號(hào)120301、120401、120501，經(jīng)海南大學(xué)黃世滿(mǎn)教授鑒定為大戟科地楊桃屬植物地楊桃[Sebastiania chamaelea（L.）Muell.-Arg]的全草。分別于3、4、5月初采摘，清洗干凈，陰干，粉碎，過(guò)篩，備用。以3月份采摘的荔枝草全草（編號(hào)120301）為主要對(duì)象進(jìn)行研究。

1.1.2 主要儀器。粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）；BP211D電子天平（德國(guó)Sartorious）；數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州澳華儀器有限公司）；OLYMPUS光學(xué)顯微鏡（奧林巴斯中國(guó)有限公司）；DHG-9071A電熱恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；箱式電阻爐（上海華聯(lián)環(huán)境試驗(yàn)設(shè)備公司恒昌儀器廠(chǎng)）；紫外分光光度計(jì)（島津UV-2401PC）。

1.1.3 主要試劑。蘆丁對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)10080-200707）；乙醇（分析純，廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；亞硝酸鈉（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；硝酸鋁（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）；氫氧化鈉（西隴化工股份有限公司）；水合氯醛試劑（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；甘油（廣州化學(xué)試劑廠(chǎng)）。

1.2 方法

1.2.1 顯微鑒定方法。取荔枝草干燥藥材在水中浸軟后進(jìn)行徒手切片，滴加水合氯醛透化，再滴加幾滴甘油酒精，蓋上蓋玻片，制成臨時(shí)切片，對(duì)莖和葉的橫切面進(jìn)行顯微觀(guān)察、描述、拍照。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備。精密稱(chēng)取蘆丁對(duì)照品20 mg，置100 mL容量瓶中，加70%甲醇適量，超聲微熱溶解，冷卻后加70%甲醇至刻度，搖勻，即得0.2 mg/mL蘆丁，作為對(duì)照品溶液。

1.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液的制備。精密量取對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，各加70%甲醇至10 mL，加5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 mL，搖勻，放置6 min；再加4%氫氧化鈉溶液10 mL，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min待用。

1.2.4 供試品溶液的制備。取本品粉末（過(guò)四號(hào)篩）約1 g，精密測(cè)定，加70%甲醇30 mL，稱(chēng)定重量，加熱回流提取1 h，放冷，補(bǔ)重，過(guò)濾，收集續(xù)濾液，精密量取續(xù)濾液1 mL至25 mL容量瓶中，按照“1.2.3”標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備項(xiàng)下的方法，自“各加70%甲醇稀釋至10 mL”起，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出供試品溶液中含蘆丁的重量，計(jì)算，即得。

1.2.5 紫外光譜測(cè)定波長(zhǎng)。取蘆丁對(duì)照品溶液，置紫外掃描儀中，在400～800 nm進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)為508 nm（圖1）。

1.2.6 方法學(xué)考察。

1.2.6.1 線(xiàn)性關(guān)系的考察。以相應(yīng)的試劑為空白，取“1.2.3”項(xiàng)下的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)溶液，按照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在508 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.2.6.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)。取同一供試樣品溶液，分別在0、5、10、20、30、40 min測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定6次，計(jì)算RSD。

1.2.6.3 精密度試驗(yàn)。取按“1.2.4”方法制備的供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算吸光度的RSD值。

1.2.6.4 重復(fù)性試驗(yàn)。取同一批號(hào)的樣品，按“1.2.4”方法制備供試品溶液6份（樣品批號(hào)為120301），按“1.2.5”項(xiàng)下的條件測(cè)定吸光度，計(jì)算平均含量和RSD。

1.2.6.5 加樣回收試驗(yàn)。取同一批號(hào)樣品6份（樣品批號(hào)為120301），精密加入分別與樣品中黃酮含量相等的對(duì)照品，按“1.2.4”方法制備供試品溶液，再按“1.2.5”項(xiàng)下的條件測(cè)定吸光度，計(jì)算平均回收率和RSD。

1.2.7 樣品的含量測(cè)定。按“1.2.4”方法分別精密稱(chēng)取3批不同時(shí)間段采集的藥材進(jìn)行含量測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥材性狀

本品?；ケС蓤F(tuán)。根細(xì)長(zhǎng)，為10～20 cm，稍彎曲，紅褐色，質(zhì)輕脆，易折斷，斷面黃白色。莖細(xì)圓形，長(zhǎng)15～70 cm，直立或傾斜，多分枝，黃綠色。枝葉彎曲互抱呈團(tuán)，葉片細(xì)長(zhǎng)，呈披針形，干燥葉略皺縮或易破碎。氣微，味淡。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖的橫切面。直徑約2 mm，具四棱。表皮細(xì)胞1裂，長(zhǎng)方形，外壁常具乳突突起，有腺毛和非腺毛。莖四棱處表皮內(nèi)側(cè)有厚角組織。皮層為數(shù)列橢圓形薄細(xì)胞。內(nèi)皮層不明顯，中柱鞘纖維成束或散在，壁微木化，斷續(xù)排列成環(huán)。韌部細(xì)胞較小。形成層不明顯。木質(zhì)部在四棱處發(fā)達(dá)，導(dǎo)管圓形，木纖維多角，射線(xiàn)寬狹不一。髓部由大型薄壁細(xì)胞組成，莖中央常有裂隙。

2.2.2 葉的橫切面。下表皮細(xì)胞垂圍壁，波狀彎曲；氣孔直軸式（圖2）；非腺毛1～3個(gè)細(xì)胞，長(zhǎng)32～282 μm，基部細(xì)胞較大，直徑約64 μm，壁厚5～11 μm，有疣狀突起（圖3）；小腺毛頭部單細(xì)胞，偶見(jiàn)多細(xì)胞；腺鱗頭部為4細(xì)胞，直徑40～64 μm，柄短，單細(xì)胞。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線(xiàn)性關(guān)系的考察。按“1.2.6.1”方法操作，吸光度分別為0.057、0.122、0.249、0.494、0.985、1.233，以對(duì)照品濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得線(xiàn)性回歸方程Y=11.766 0X-0.002 2（R2=0.999 9），表明蘆丁在0.005～0.105 mg/mL線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.3.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)。按“1.2.6.2”方法操作，計(jì)算吸光度的RSD為2.9%（n=6），表明樣品在40 min內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.3 精密度試驗(yàn)。按“1.2.6.3”方法操作，計(jì)算吸光度的RSD為0.20%，表明在此試驗(yàn)條件下精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)。按“1.2.6.4”方法操作，計(jì)算得平均含量為3.28%，RSD為2.40%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收試驗(yàn)。按“1.2.6.5”方法操作，6組樣品的平均回收率為93.38%，RSD為2.8%（n=6），表明該方法準(zhǔn)確、可靠，可用于荔枝草藥材中黃酮的含量測(cè)定。

2.4 含量測(cè)定

經(jīng)測(cè)定，采集的3批荔枝草中黃酮含量分別為3.28%、3.46%、3.44%，平均值為3.39%。

3 結(jié)論與討論

該研究對(duì)荔枝草的性狀、莖的橫切面、葉的橫切面進(jìn)行觀(guān)察描述，因荔枝草莖的橫切面和葉的橫切面顯微特征較為明顯，如莖四棱處表皮內(nèi)側(cè)有厚角組織；皮層為數(shù)列橢圓形薄細(xì)胞；內(nèi)皮層不明顯，中柱鞘纖維成束或散在，壁微木化，斷續(xù)排列成環(huán)；導(dǎo)管圓形，木纖維多角，射線(xiàn)寬狹不一；髓部由大型薄壁細(xì)胞組成，莖中央常有裂隙；葉橫切面有氣孔和非腺毛等，可作為荔枝草鑒別特征。

參考落地生根中黃酮物質(zhì)的測(cè)定方法[7-8]，通過(guò)方法學(xué)考察，測(cè)定3個(gè)批次荔枝草中黃酮含量，最高含量為3.46%，最低含量為3.28%，按最低值的15%的規(guī)定下限浮度，規(guī)定本品按干燥品計(jì)算，含總黃酮以蘆?。–27H30O16）計(jì)不得少于2.80%。

參考文獻(xiàn)

[1] 中國(guó)科學(xué)院華南植物研究所.海南植物志：第3卷[M].北京：科學(xué)出版社，1965：179.

[2] 中國(guó)科學(xué)院“中國(guó)植物志”編輯委員會(huì).中國(guó)植物志：第44卷 第3分冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社，1997.

[3] 廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].南寧：廣西人民出版社，1986.

[4] 中國(guó)中醫(yī)研究院中藥研究所.全國(guó)中草藥名鑒：上冊(cè)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：387.

[5] 郭玲，何萌，林連波.地楊桃酯類(lèi)化學(xué)成分的GC-MS分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5（6）：1205-1206.

[6] 艾朝輝，郭玲，何萌.地楊桃中游離氨基酸的分析[J].中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5（7）：1440-1441.

[7] 劉德勝，韓景田，呂志華，等.落地生根黃酮類(lèi)成分分析及抗氧化活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（32）：19747-19750.

[8] 慶偉霞，王勇，姚素梅，等.三波長(zhǎng)-分光光度法測(cè)定大葉落地生根中總黃酮的含量[J].分析試驗(yàn)室，2010，29（10）：90-92.