魏文強(qiáng) 王翠艷

摘 要 目的：HPLC測定在液氮條件研磨以及在自然風(fēng)干條件下研磨不同種肉蓯蓉中松果菊苷的含量，比較野生肉蓯蓉和人工培養(yǎng)的肉蓯蓉中松果菊苷含量。方法：采用日本島津LC-20A高效液相色譜儀測定。色譜柱為YMC-Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，5μm；YMC Co Ltd，Japan）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）；檢測波長334 nm；流速0.7 mg·mL-1。柱溫30 ℃。結(jié)果：處理?xiàng)l件的不同對松果菊苷含量有非常明顯影響，液氮條件下研磨的肉蓯蓉中松果菊苷的含量普遍高于自然風(fēng)干條件下研磨的肉蓯蓉；野生肉蓯蓉的有效成分含量要遠(yuǎn)高于人工培養(yǎng)。

關(guān)鍵詞 肉蓯蓉；松果菊苷；高效液相色譜法

中圖分類號(hào)：R284 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2018.29.066

肉蓯蓉（Herba Cistanches Y.C.Ma）又稱紅柳、大蕓，屬于瀕危物種，是一種寄生在沙漠樹木梭梭、紅柳根部的寄生植物。在我國主要分布于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅和新疆[1]，素有“沙漠人參”之美譽(yù)，具有極高的藥用價(jià)值。中國藥典規(guī)定，以列當(dāng)科植物肉蓯蓉的干燥帶鱗片肉質(zhì)莖入藥[2]，其主要藥用成分有苯乙醇苷類，根據(jù)其取代基的不同可分為松果菊苷、類葉升麻苷、肉蓯蓉苷等[3]。其中，松果菊苷（Echinacoside）具有改善性功能、抗氧化和清除自由基作用，而且具有一定的抗凋亡作用[4]。20世紀(jì)80年代以來，高速液相色譜技術(shù)（HPLC）廣泛應(yīng)用于天然產(chǎn)物的分離中，這種技術(shù)為苯乙醇苷類化合物的分離提供了一種簡單快速的方法[5-6]。選擇采用HPLC法，分析不同生長時(shí)期野生肉蓯蓉和人工栽培肉蓯蓉主要有效成分松果菊苷的含量，為合理開發(fā)和利用肉蓯蓉及有效評(píng)價(jià)肉蓯蓉的質(zhì)量提供一定科

學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

日本島津LC-20A高效液相色譜儀，LC-20AT串聯(lián)雙柱塞泵，CTO-20A柱溫箱，SPDA-20A紫外可見雙波長檢測器；昆山KQ-100型超聲波清洗器；乙腈（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；甲醇（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；甲酸（色譜純，天津光復(fù)化工研究所）；水（屈臣氏蒸餾水）。

對照品：松果菊苷，含量≥98.43%（上海原葉生物科技有限公司）。

肉蓯蓉樣品5種：人工鮮一年期以下（未出頭）肉蓯蓉，人工鮮（出頭）肉蓯蓉，人工干肉蓯蓉，野生鮮肉蓯蓉，野生三年期以上干肉蓯蓉。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的確定

為使所測松果菊苷在液相色譜圖中的峰與其他物質(zhì)分離，以及控制泵壓、時(shí)間能在合適的范圍內(nèi)，對色譜的條件進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)改進(jìn)，經(jīng)流動(dòng)相的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論：溫度越高，液相的保留時(shí)間越短，濃度越低，泵壓越小且保留時(shí)間變短，但峰高變低，不利于測量。根據(jù)室溫、泵的最大承壓等客觀狀況，最終確定以流動(dòng)相為乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75）、檢測波長334 nm、流速0.7 mL/min、柱溫30 ℃的條件進(jìn)行分析，得到的信息較為豐富，各成分峰形尖銳而且分離度良好。

2.2 色譜柱的確定

色譜柱：YMC-Inertsil ODS-SP（4.6 mm×150 mm，

5 μm；YMC Co Ltd，Japan）。

2.3 實(shí)驗(yàn)溶液制備

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加流動(dòng)相乙腈-甲醇-1%甲酸（10∶15∶75），分別制成0.06 mg·mL-1、

0.05 mg·mL-1、0.04 mg·mL-1、0.03 mg·mL-1、

0.02 mg·mL-1、0.01 mg·mL-1和0.005 mg·mL-1的松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3.2 供試品溶液的制備

取適量的人工一年期以下（未出頭）鮮肉蓯蓉、人工鮮肉蓯蓉、野生鮮肉蓯蓉用研缽在液氮下研磨成粉末；同樣再取適量的上述3種肉蓯蓉切成塊狀，在陰涼通風(fēng)處自然風(fēng)干，干燥后，將其粉碎研磨成粉末狀。人工干肉蓯蓉及野生三年期以上干肉蓯蓉直接粉碎研磨成粉末狀。取上述制的肉蓯蓉粉末（過100目篩）0.5 g，置于離心管中，加入流動(dòng)相25 mL，稱重后浸泡30 min，超聲處理40 min，冷卻后再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足缺失的重量，搖勻后離心，取上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.4 松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)樣品回歸曲線的繪制

將配制好的松果菊苷標(biāo)準(zhǔn)樣品分別注入液相色譜儀，以對照品的濃度（mg·L-1）為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖，得到回歸方程為

Y=66 867 100X-46 360.83，R2=0.986 37，顯示松果菊苷在0.1～1.2μg內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.5 樣品測定

按照2.3所示方法，制備樣品液，然后在色譜條件項(xiàng)下測定，標(biāo)樣及樣品的HPLC圖譜見圖1。各樣品中松果菊苷的含量見表1。

3 討論

松果菊苷是肉蓯蓉主要的有效成分之一，松果菊苷能夠很好地代表肉蓯蓉藥理作用的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，使藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)和其藥理作用相對應(yīng)，提高肉蓯蓉質(zhì)量評(píng)價(jià)的針對性。

處理?xiàng)l件的不同對松果菊苷含量有明顯的影響，在液氮條件下研磨的肉蓯蓉要比在自然風(fēng)干條件下研磨的肉蓯蓉中松果菊苷的含量普遍都高。普通的風(fēng)干會(huì)降低松果菊苷的含量，可能是在風(fēng)干過程中損耗或是松果菊苷發(fā)生了轉(zhuǎn)化。為防止有效成分含量減少、保證肉蓯蓉藥效，應(yīng)選取合適的處理方法。

一直以來，大部分人認(rèn)為肉蓯蓉的人工栽培環(huán)境以及生長習(xí)性與野生品沒有明顯區(qū)別，質(zhì)量也相差無幾，往往只重視產(chǎn)量，并未對質(zhì)量進(jìn)行分析。本研究表明，人工栽培的肉蓯蓉松果菊苷的含量低于野生肉蓯蓉松果菊苷的含量。最高的為野生鮮肉蓯蓉0.336 0%，含量最低的是人工鮮肉蓯蓉0.007 0%。因此在栽培技術(shù)上仍需研究，提高有效成分的含量。

肉蓯蓉質(zhì)量的好壞取決于其有效成分松果菊苷含量的多少，而有效成分又與采收的季節(jié)、時(shí)間、方法有很大的關(guān)系，所以肉蓯蓉的采收應(yīng)該考慮有效成分的積累狀態(tài)和生長發(fā)育階段。既考慮質(zhì)量，又考慮產(chǎn)量。

本方法測定松果菊苷的含量，簡便、精密度高、重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。可用于肉蓯蓉藥材的含量測定。

參考文獻(xiàn)：

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[6] Li L， Tsao R， Liu Z， et al. Isolation and Purification of Actcoside and lsoacteoside from Plantago Psyllium L，by High-speed Counter-current Chromatography[J].J. Chromatogr. A.，2005，1063（1）：161-169.

（責(zé)任編輯：劉昀）