袁海英　葉利明

摘要：建立強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸含量測(cè)定方法。采用HPLC法，色譜柱為sepax Aumthyst C18-H（4.6mm×250mm，5μm）；流動(dòng)相為乙腈一甲醇-0.5%乙酸銨溶液（體積比67：12：21）；流量為1.0mL/min；柱溫為30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm。齊墩果酸的進(jìn)樣量在0.05～1.59μg呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=-1.0000），精密度RSD=1.23%，平均加樣回收率為93.7%，RSD=1.40%；熊果酸的進(jìn)樣量在0.19～6.20μg呈良好的線(xiàn)性關(guān)系（r=1.0000），精密度RSD=0.20%，平均加樣回收率為98.6%，RSD=1.96%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：強(qiáng)力枇杷露；齊墩果酸；熊果酸；高效液相色譜法

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1674-5124（2018）05-0063-04

0引言

強(qiáng)力枇杷露具有養(yǎng)陰斂肺，鎮(zhèn)咳祛痰的功效。臨床用于久咳勞嗽，支氣管炎等。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第二冊(cè)》第272頁(yè)，該處方由枇杷葉、罌粟殼、百部、白前、桑白皮、桔梗、薄荷腦組成。標(biāo)準(zhǔn)中僅有兩項(xiàng)顏色反應(yīng)鑒別項(xiàng)，既無(wú)薄層鑒別也無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)。目前已有較多文獻(xiàn)對(duì)強(qiáng)力枇杷露中罌粟殼的有效成分含量測(cè)定進(jìn)行了研究，但對(duì)于處方中的君藥枇杷葉中的有效成分含量測(cè)定研究幾乎沒(méi)有；故本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定了強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量，結(jié)果表明本方法結(jié)果準(zhǔn)確、可靠、重復(fù)性好，可用于強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的含量控制。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent）；電子天平（梅特勒，XA205）；電子天平（YP402N）；UPT-1-40L優(yōu)普超純水器。乙腈、甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為超純水。齊墩果酸對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110709-201206，純度94.9%：熊果酸對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110742-201421，純度93.8%。強(qiáng)力枇杷露，由華潤(rùn)三九（雅安）藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為160825、160850、160852、160854、160901、160904、160905、160906、160913、160915。

1.2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

1.2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

采用Sepax Aurethyst C18-H色譜柱（4.6 BBX250mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈-甲醇-0.5%7，酸銨溶液（體積比67：12：21），流量1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，柱溫30℃，進(jìn)樣量20μL，取對(duì)照品、陰性樣品和供試品溶液分別進(jìn)樣，齊墩果酸和熊果酸的保留時(shí)間分別為20.5min和21.6min，主峰與雜質(zhì)峰的分離良好，無(wú)陰性干擾，拖尾因子分別為1.01和1.14，分離度分別為16.7和1.9，理論板數(shù)以熊果酸峰計(jì)算大于5000（見(jiàn)圖1）。

1.2.2溶液的制備

精密稱(chēng)取齊墩果酸對(duì)照品13.17 mg于10 mL容量瓶中，加乙醇定容制成對(duì)照儲(chǔ)備液。另精密稱(chēng)取熊果酸對(duì)照品10.65 mg于50mL容量瓶中，再精密吸取齊墩果酸對(duì)照儲(chǔ)備液2 mL置該量瓶中，加乙醇溶解并定容，搖勻得齊墩果酸質(zhì)量濃度為49.99 μg/mL、熊果酸質(zhì)量濃度為199.8 μg/mL的混合對(duì)照溶液。精密量取強(qiáng)力枇杷露樣品25mL，用正丁醇一甲醇（體積比10：1，水飽和）混合溶液振搖提取4次（25，25，25，20mL），合并正丁醇一甲醇（10：1，水飽和）溶液，用正丁醇飽和的水20mL洗滌，棄去水液，分取正丁醇液，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至亥0度，搖勻，過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取處方比例的各藥材，按工藝制備方法制備缺枇杷葉的陰性樣品，照供試品處理方法制備陰性樣品溶液。

1.2.3線(xiàn)性關(guān)系考察

配制齊墩果酸為79.344，39.672，19.826，9.918，4.959，2.480 I～g/mL，熊果酸為310.016，155.008，77.504，38.752，19.376，9.688μg/mL的齊墩果酸和熊果酸混合對(duì)照品溶液，分別精密吸取上述不同濃度的混合對(duì)照品溶液各20μL注入液相色譜儀，按上述色譜條件測(cè)定其峰面積，并以峰面積為縱坐標(biāo)y，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)x（μg），進(jìn)行線(xiàn)性回歸。齊墩果酸的回歸方程為：y=485.4903x-1.0791，r=1.0000，結(jié)果表明齊墩果酸在0.05-1.59μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。熊果酸的回歸方程為：7=437.8244x+2.115 1，r=1.0000，結(jié)果表明熊果酸在0.19-6.20μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。結(jié)果如圖2所示。

1.2.4儀器精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)得齊墩果酸峰面積RSD=1.23%（n=6），熊果酸峰面積RSD=0.20%（n=6），結(jié)果見(jiàn)表1。表明儀器的精密度良好。

1.2.5重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)的強(qiáng)力枇杷露樣品，按1.2.2項(xiàng)方法平行制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣，計(jì)算得齊墩果酸平均含量為1.95 μg/mL，RSD=1.56%（n=6），熊果酸平均含量為9.82μg/mL，RSD=0.49%（n=6），結(jié)果見(jiàn)表2。表明本方法的重復(fù)性良好。

1.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于室溫下放置0，2，4，8，12，24h后進(jìn)樣10μL，計(jì)算得24h內(nèi)齊墩果酸峰面積RSD=0.47%，熊果酸峰面積RSD=0.40%，結(jié)果見(jiàn)表3。表明齊墩果酸和熊果酸在24h內(nèi)穩(wěn)定。

1.2.7加樣回收率試驗(yàn)

精密量取25 mL已知含量的強(qiáng)力枇杷露樣品共9份，分別精密加入低、中、高濃度的對(duì)照品溶液，混勻后按1.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按1.2.1項(xiàng)下方法進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算得齊墩果酸和熊果酸的平均回收率分別為93.7%（RSD=1.40%）、98.6%（RSD=1.96%），結(jié)果見(jiàn)表4。表明本方法回收率良好。

1.2.8樣品測(cè)定

取10個(gè)批號(hào)的強(qiáng)力枇杷露樣品，按1.2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，并按1.2.1項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣，每批樣品采用雙樣雙針測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算10批樣品中齊墩果酸和熊果酸的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。10批強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的總含量在7.3～12.0μg/mL之間，批間精密度RSD約16%，表明成品含量批間波動(dòng)較大。

2結(jié)束語(yǔ)

在篩選色譜柱時(shí)曾對(duì)不同廠(chǎng)家的c18柱進(jìn)行了考察，最終選擇了1.2.1項(xiàng)下的色譜柱，該色譜柱能使樣品中齊墩果酸和熊果酸的對(duì)稱(chēng)因子和分離度較好。此外在供試品萃取時(shí)曾考慮使用水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，但乳化現(xiàn)象較嚴(yán)重，故在正丁醇中加入一定量的甲醇并用水飽和后，萃取時(shí)乳化現(xiàn)象可得到明顯改善。

現(xiàn)代藥物化學(xué)研究表明：枇杷葉中的主要有效成分即為三萜酸類(lèi)化合物，其中主要是烏索酸（uA，即熊果酸）、齊墩果酸（OA）和委陵菜酸（TA）等母體的衍生物，具有抗炎止咳、降血糖、抗病毒、抗氧化、抗腫瘤等藥理作用。通過(guò)10批樣品的含量測(cè)定結(jié)果表明：強(qiáng)力枇杷露中齊墩果酸和熊果酸的總含量在10μg/mL左右，而枇杷葉原料中齊墩果酸和熊果酸的總量約為7～12mg/g，其轉(zhuǎn)移率僅2%左右，提示需對(duì)強(qiáng)力枇杷露的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化以提高齊墩果酸和熊果酸的轉(zhuǎn)移率，另外也表明了枇杷葉中可能還有其他水溶性成分具有抗炎止咳的功效。

（編輯：莫婕）