蘇曉玉

（山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院 山東 濟南 250013）

肺癌的癌前病變非典型腺瘤樣增生（AAH）組織具有以下發(fā)展規(guī)律，由非侵潤性原位腺癌（AIS）到微浸潤性腺癌（MIA）進而成為廣泛侵潤性癌。

Noguchi分型有A-F六種不同肺腺癌病理類型。其中A和B型均為細支氣管肺泡癌并包含AAH和AIS兩種非侵潤型組織，為早期肺癌組織。C型含活躍成纖維細胞增殖，包含AIS和MIA。而D-F型則為廣泛侵潤性肺腺癌組織[1]。由于C型中包含侵潤型和非侵潤型組織，因此本實驗提出早期肺癌惡性轉(zhuǎn)變的驅(qū)動基因存在于C型。

1.材料與方法

1.1 病理組織切片收集

本實驗從臨床中收集T1a期肺腺癌病理切片（未經(jīng)治療）共246例，以Noguchi分型為標準進行A-F分類。

1.2 Noguchi C型子分類

本實驗對Noguchi C大量觀察與總結(jié)發(fā)現(xiàn)了其可能存在兩種不同病理細胞組織形態(tài)學(xué)差異。如圖1，其棕紅色區(qū)域可看作侵潤型區(qū)域而粉色覆蓋區(qū)域可看作非侵潤型區(qū)域。C1分類（圖1左）為不對稱性侵潤型組織增生，無原位非侵潤型半影增生且侵潤型區(qū)域核級較大。C2分類（圖1右）則呈現(xiàn)勻稱性侵潤型組織增生并伴有原位非侵潤型組織半影增生且兩區(qū)域核級大小均一致。

圖1 Noguchi C子分類模擬圖

1.3 基因測序

在下一代基因測序中，每個樣品采用Ionampliseq Library 96LV Kit2.0和結(jié)腸癌和肺癌研究 panelv2V2建立各自信息庫。92條擴增子覆蓋于此面板22個基因（表1）所含的504個突變熱點區(qū)域上。應(yīng)用Ion Sphere QC試劑盒及添加引物和聚合酶對其DNA模板進行微乳液PCR擴增，并加載到測試芯片上最終使用生命技術(shù)人類基因組設(shè)備對樣本進行測序。

表1 測序基因

1.4 數(shù)據(jù)分析

采用Hg19人類參考基因組配比，應(yīng)用離子記錄軟件分析測序數(shù)據(jù)。應(yīng)用Excel軟件對整體實驗數(shù)據(jù)進行分析比較并制作圖表。

表2 下一代測序結(jié)果

2.結(jié)論

本實驗中共有25個樣本參與下一代基因測序，其中有22例為Noguchi C型其包含17例C1型與5例C2型，但C1型中有一案例未發(fā)現(xiàn)任何共同突變基因。如表2所示，綠色區(qū)域顯示了原位癌與侵潤型腫瘤區(qū)域存在共同的基因突變而紅色區(qū)域則表明基因突變僅存在于侵潤型腫瘤區(qū)域（單獨突變）。

C1樣本中有12例樣本出現(xiàn)單獨基因突變其突變位點共有27個，其中SMAD4、ERBB2、AKT、DDR2、PTEN、FGFR1基因只存在單獨突變且SMAD4、ERBB2突變率最高，各占總體25.9%。其次為TP53及AKT1基因。見表3。

C1病變最常見的共同突變基因為EGFR基因，它占總體突變頻次的36.3%。KRAS、TP53、BRAF基因也同樣顯示了較高的突變比率。通過對比C2下一代基因測序檢測結(jié)果，我們同樣也發(fā)現(xiàn)其KRAS及TP53基因突變頻率最高。從而通過整體分析我們可以推斷在整體C型病變中KRAS和TP53基因突變頻率最為顯著。見表4。

表3 C1樣本中僅在浸潤型腫瘤區(qū)域含有基因突變的頻次

表4 C1樣本中原位癌和侵潤性腫瘤區(qū)域共有突變基因的頻次

3.討論

通過實驗可發(fā)現(xiàn)C1型病變在早期肺腺癌侵潤型和非侵潤型病理組織區(qū)域存在基因突變的轉(zhuǎn)化而C2型病變則顯示出其基因突變的一致性，因此此結(jié)果印證了本實驗中對Noguchi C型病理組織的C1和C2病變分類且同樣證實了C1型病變中應(yīng)該存在從肺原位腺癌到肺侵潤型腺癌轉(zhuǎn)變的驅(qū)動基因，其為ERBB2，SMAD4，AKT1和TP53基因。因此我們認為在肺腺癌C1型病變中若可以針對其不同的驅(qū)動基因提前檢測并應(yīng)用靶向藥物或其他相應(yīng)的輔助方法進行治療，從理論上可有效的緩解早期肺腺癌患者的肺腺癌病理組織惡性進展從而提高此類患者的生存率與治愈率。

ERBB2基因即Her-2基因，對于判斷乳腺癌預(yù)后具有重要意義。針對此靶點的曲妥珠單抗類藥物現(xiàn)如今已在乳腺癌早期及晚期臨床治療中被廣泛應(yīng)用。隨著現(xiàn)今分子醫(yī)學(xué)學(xué)科的深入發(fā)展及應(yīng)用，有關(guān)抗Her-2類的藥物如曲妥珠單抗、帕妥珠單抗和拉帕替尼目前也被允許用于治療其他癌癥。因此我們認為若可以對早期肺腺癌患者在早期進行Her-2基因突變與否進行篩查，再針對此類患者及時應(yīng)用現(xiàn)今已研究比較成熟的抗Her-2類相關(guān)藥物，將有益于提高患者的無進展生存率。

【參考文獻】

[1]翟浩然.浸潤性肺腺癌的病理形態(tài)學(xué)及其基因異質(zhì)性研究[D].南方醫(yī)科大學(xué),2017.

[2]陳相猛,郝以秀,李榮崗,黃列彬,張朝桐,龍晚生.T1a期肺腺癌CT征象與病理對照研究[J].臨床放射學(xué)雜志 ,2016,35(10)：1502-1506.

[3]許春偉.非小細胞肺癌患者腫瘤組織中驅(qū)動基因的分子病理檢測分析[A].中國癌癥基金會、中國抗癌協(xié)會腫瘤臨床化療專業(yè)委員會、中國醫(yī)師協(xié)會腫瘤醫(yī)師分會.第九屆中國腫瘤內(nèi)科大會、第四屆中國腫瘤醫(yī)師大會、中國抗癌協(xié)會腫瘤臨床化療專業(yè)委員會2015年學(xué)術(shù)年會論文集[C].中國癌癥基金會、中國抗癌協(xié)會腫瘤臨床化療專業(yè)委員會、中國醫(yī)師協(xié)會腫瘤醫(yī)師分會：,2015：1.

[4]張丹,黃艷,王紅陽.非小細胞肺癌驅(qū)動基因突變及靶向治療的研究進展[J].中國肺癌雜志,2014,17(10)：750-754.

[5]郝騰.非小細胞肺癌驅(qū)動基因的篩查及其與臨床資料的相關(guān)性研究[D].大連醫(yī)科大學(xué),2014.

[6]莊囡.小型肺腺癌Noguchi分類和高分辨率CT[J].國外醫(yī)學(xué)(臨床放射學(xué)分冊),2000(02)：114-116.