王紅平 趙璐 楊雯

（四川省食品藥品檢驗檢測院安全評價中心 四川 成都 611731）

金芪片是由成都復興醫(yī)院研制提供的院內制劑，主藥為黃芪、白茅根等，具有清熱解毒，涼血止血，托毒排膿功效，用于治療乳腺癌、子宮癌等婦科腫瘤。本研究具體分析經(jīng)口灌服不同劑量金芪片對大鼠血液生化學的影響，尋找臨床安全劑量。

1.材料及方法

1.1 實驗動物

雌性SD大鼠120只，SPF級，購入時體重為80～100g。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（渝）2012-0005，實驗動物質量合格證號：NO.0000055，由第三軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所實驗動物中心提供。

1.2 實驗儀器

儀器：COBAS INTEGRA 400 Plus型全自動生化分析儀，瑞士Roche公司；。

試劑：主要為血液生化學試劑，均購自德國羅氏診斷有限公司。

1.3 方法

1.3.1 劑量確定[1]高劑量組：通過SD大鼠經(jīng)口灌服金芪片14天多次給藥毒性實驗預試實驗結果：最大給藥量8.25g生藥粉/kg·bw無動物死亡，未見明顯毒性反應。因此將8.25g生藥粉/kg·bw，設為高劑量，相當于41.25倍人用劑量。

低劑量組：金芪片的臨床用量為成人（按60kg體重計）6片/次×4次/日，相當于0.2g生藥粉/kg·bw/日，折算成大鼠的等效劑量為1.26g生藥粉/kg.bw/日。為了便于配制藥液，分析藥物的劑量與毒性關系，因此將低劑量設為1.375g生藥粉/kg·bw（是高劑量的1/6）。

中劑量組：中劑量設計選擇在1.375g生藥粉/kg·bw和8.25g生藥粉/kg·bw之間，為了便于配制藥液，分析藥物的劑量與毒性關系，中劑量設為高劑量的1/2.5,低劑量的2.4倍，為3.3g生藥/kg·bw。

另外設置溶媒對照組（蒸餾水）。

1.3.2 分組給藥[2]大鼠經(jīng)適應性飼養(yǎng)并檢疫后，按體重隨機均分成4組，連續(xù)經(jīng)口灌胃給藥3個月（按13周計），給藥容積15ml/kg·bw，每周連續(xù)給藥6天每天1次，星期天停藥1天。連續(xù)給藥13周后停藥恢復1個月（按4周計）。

1.4 觀察指標

在給藥末期13周和恢復期17周各測一次血液生化學指標，檢測項目包括：白蛋白(ALB)、堿性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、肌酸激酶(CK)、肌酐(CREA)、尿素氮(BUN)、總膽固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、總膽紅素(TBIL)、總蛋白(TP)、血糖(GLU)、鉀離子濃度(K+)、鈉離子濃度(Na+)和氯離子濃度(Cl-)。

1.5 統(tǒng)計方法[3]

用SPSS16.0軟件對各項檢查的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示。血液生化指標按計量資料統(tǒng)計，首先選用SPSS16.0軟件下的Decriptives統(tǒng)計數(shù)據(jù)，計算其均值、標準差、標準誤、均值95%的可信區(qū)間、最大值和最小值；其次采用單因素方差分析，方差齊者，采用LSD多重比較檢驗；方差不齊者，采用Tamhane T2多重比較檢驗。

2.結果

2.1 給藥末期血液生化學水平

表1、表2結果顯示：給藥末期，與對照組比較，高劑量組ALP降低（P＜0.05）；低、中、高劑量組ALT降低（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01）；中劑量組CREA降低（P＜0.05）；高劑量組Glu升高（P＜0.01）；高劑量組K+濃度升高（P＜0.01）；中、高劑量組Na+濃度升高（P＜0.01）。

表1 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（末期）（±s）

表1 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（末期）（±s）

注：與溶媒對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。

組別 ALB(g/L) ALP(U/L) ALT(U/L) AST(U/L) CREA(umol/L) CHOL(mmol/L) CK(U/L)空白對照組 47.41±3.46 56.84±23.58 34.56±6.04 104.95±23.42 37.47±5.37 1.432±0.262 587.19±235.51低劑量組 47.85±2.62 50.45±13.30 30.95±6.28* 103.52±22.49 40.28±4.90 1.456±0.302 530.62±203.48中劑量組 47.37±3.66 43.76±8.66 24.00±4.14** 91.50±28.10 33.36±4.39* 1.528±0.365 517.33±250.07高劑量組 47.39±3.01 39.88±12.06* 25.12±4.96** 94.10±19.18 37.06±6.09 1.446±0.309 460.13±137.63

表2 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（末期）（±s）

表2 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（末期）（±s）

注：與溶媒對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。

組別 Glu(mmol/L) TBIL(umol/L) TP(g/L) TG(mmol/L) Bun(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L)空白對照組 8.293±0.738 0.610±1.024 64.56±3.64 0.534±0.287 5.945±1.080 4.404±0.286 141.50±1.36 102.74±1.95低劑量組 8.740±0.901 0.540±0.964 64.34±3.66 0.377±0.080 5.924±0.953 4.448±0.370 141.90±1.17 103.69±1.32中劑量組 8.714±0.677 0.175±0.783 64.52±4.20 0.408±0.124 6.064±0.912 4.559±0.348 143.70±1.26** 103.31±1.45高劑量組 9.174±0.653** 0.600±2.073 64.19±3.60 0.440±0.124 6.396±1.218 4.855±0.272** 143.30±1.22** 102.98±1.78

2.2 恢復期血液生化學水平

表3、表4結果顯示，恢復期，與對照組比較，高劑量組AST降低（P＜0.01）；中、高劑量組CK降低（P＜0.05）、Glu升高（P＜0.05）；高劑量組K+濃度降低（P＜0.01）。

表3 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（恢復期）（±s）

表3 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（恢復期）（±s）

注：與溶媒對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。

組別 ALB(g/L) ALP(U/L) ALT(U/L) AST(U/L) CREA(umol/L) CHOL(mmol/L) CK(U/L)空白對照組 44.06±8.28 36.46±14.61 33.76±7.24 108.27±16.91 43.05±14.17 1.429±0.247 658.05±371.46低劑量組 41.99±7.54 49.82±21.50 38.08±7.10 102.46±20.80 42.58±11.32 1.259±0.325 609.68±220.90中劑量組 46.38±6.46 33.68±13.93 33.90±5.21 91.85±29.37 44.08±5.82 1.520±0.393 313.94±185.30*高劑量組 50.06±2.41 34.00±11.17 31.00±6.93 78.50±14.88** 49.68±8.58 1.366±0.244 351.31±392.47*

表4 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（恢復期）（±s）

表4 連續(xù)3個月經(jīng)口灌服金芪片對大鼠血液生化學的影響（恢復期）（±s）

注：與溶媒對照組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。

組別 Glu(mmol/L) TBIL(umol/L) TP(g/L) TG(mmol/L) Bun(mmol/L) K+(mmol/L) Na+(mmol/L) Cl-(mmol/L)空白對照組 7.426±0.918 0.000±0.000 64.50±3.42 0.588±0.198 8.137±1.153 6.127±0.519 167.70±12.08 122.58±9.60低劑量組 8.098±0.819 0.060±0.190 63.98±6.23 0.543±0.182 7.637±1.165 5.572±0.453 161.80±10.56 116.85±8.91中劑量組 8.576±1.234* 0.230±0.727 63.09±10.15 0.542±0.154 8.260±0.775 5.884±0.852 156.90±3.90 112.84±3.03高劑量組 8.523±1.223* 0.000±0.000 64.81±2.63 0.449±0.126 7.415±1.127 5.271±0.610** 158.70±3.56 115.81±3.56

3.討論

金芪片對大鼠長期毒性血液生化學檢驗結果顯示及分析，未見受試物的血液生化學方面的毒性反應。低、中、高三個劑量組給藥末期以及恢復期的血液生化學檢測值，與對照組比較，雖然部分結果顯示有統(tǒng)計學意義，但是，除血糖指標外，涉及到肝功能的指標ALP和ALT在給藥末期均為顯著降低，恢復期恢復正常；涉及到腎臟功能的指標肌酐，在給藥末期中劑量組低于對照組，而恢復期均有所恢復，病理檢查也未見肝臟和腎臟有病變發(fā)生，且以上數(shù)據(jù)均在本實驗室背景數(shù)據(jù)范圍內波動，其降低不具有毒理學意義，故該樣品對SD大鼠肝腎功能無明顯影響[4-7]。血糖在給藥末期高劑量組顯著高于對照組，恢復期中、高劑量組血糖都有所降低但相對于對照組仍偏高，提示在臨床用藥時需關注患者血糖變化。

綜上所述，在本試驗條件下，大鼠連續(xù)3個月灌服金芪片1.375、3.3和8.25g生藥粉/kg·bw三個劑量（分別為人臨床日用劑量的6.875、16.5、41.25倍），無動物死亡，未見嚴重的毒性反應，低劑量組，即1.375g生藥粉/kg·bw為安全劑量。

【參考文獻】

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[4]蔡鐵全,李雪梅,胡宇馳,等.靈芝孢子膠囊大鼠重復給藥26周長期毒性試驗[J].毒理學雜志,2017,31(5)：410-413.

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[7]夏兆飛.獸醫(yī)臨床病理學[M].北京：中國農業(yè)大學出版社,2014.