孫思佳,翟 磊,白飛榮,于學(xué)健,馮慧軍,姚 粟*

(中國(guó)食品發(fā)酵工業(yè)研究院 中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心,北京 100015)

芝麻香型白酒是我國(guó)傳統(tǒng)白酒的創(chuàng)新香型［1］,也是魯酒的代表香型,其介于濃香、清香、醬香之間,兼具多種香型白酒的風(fēng)味特色［2-4］,既有濃香型白酒的綿柔濃郁,醬香型白酒的幽雅細(xì)膩,清香型白酒的清凈爽冽,同時(shí)還具有馥郁的芝麻香氣,風(fēng)格獨(dú)特,自成一格［5］,深受廣大消費(fèi)者的喜愛(ài),具有廣闊的市場(chǎng)發(fā)展前景。

芝麻香型白酒的生產(chǎn)離不開(kāi)高溫大曲,品質(zhì)優(yōu)級(jí)的高溫大曲具有多菌系、多酶系的特點(diǎn),能夠維持芝麻香型白酒“芝麻香突出,諸味協(xié)調(diào),豐滿細(xì)膩,回味悠長(zhǎng)”的風(fēng)格特征［6-7］。淀粉酶在高溫大曲的制備過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用,該酶能將淀粉分解成小分子糖,不僅能夠供微生物生長(zhǎng)利用,形成復(fù)雜的微生物群落結(jié)構(gòu),還能夠參與美拉德反應(yīng),形成白酒風(fēng)味成分或前體物質(zhì),對(duì)白酒品質(zhì)具有重要影響［8］。目前對(duì)大曲中產(chǎn)淀粉酶菌株的研究多集中于細(xì)菌和霉菌,而對(duì)高產(chǎn)淀粉酵母進(jìn)行系統(tǒng)研究的較少［9-12］。

因此,本研究對(duì)分離于扳倒井芝麻香型白酒高溫大曲中的一株高產(chǎn)淀粉酶的酵母菌株CICC 33077進(jìn)行多相鑒定學(xué)分析,通過(guò)響應(yīng)面法［13］對(duì)其培養(yǎng)基組分進(jìn)行優(yōu)化,并測(cè)定該菌株的最適生長(zhǎng)溫度與生長(zhǎng)pH,旨在確定該菌株的分類(lèi)學(xué)地位和最佳的培養(yǎng)條件,為后續(xù)該菌株的近一步研究和開(kāi)發(fā)奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 試驗(yàn)菌株

菌株CICC 33077分離于扳倒井芝麻香型白酒高溫大曲,保藏于中國(guó)工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(Chinacenter of industrial culturecollection,CICC)。

1.1.2 培養(yǎng)基

麥芽浸粉瓊脂(malt extract agar,MEA)培養(yǎng)基、麥芽浸粉肉湯(malt extract broth,MEB)培養(yǎng)基：北京陸橋技術(shù)有限公司；C培養(yǎng)基：生物梅里埃公司。

1.1.3 化學(xué)試劑

硝酸銨、磷酸氫二鉀、硫酸鎂、氯化鈉(均為分析純)：北京化學(xué)試劑公司；酵母菌基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)提取試劑盒：美國(guó)OMEGA公司；溶壁酶(40 mg/mL)：美國(guó)Sigma公司；蛋白酶(20 mg/mL)：德國(guó)Merck公司；Taq DNA聚合酶、脫氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate,dNTP)和DL2 000 Marker：北京天根生物有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Olympus BH-2光學(xué)顯微鏡：奧林巴斯有限公司；FE20型pH計(jì)：梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；TProfessional standard 96 Gradient聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechain reaction,PCR)儀：德國(guó)Biometra公司；BHG-8082型恒溫培養(yǎng)箱、THZ-98C恒溫振蕩培養(yǎng)箱：上海一恒科學(xué)儀器有限公司；Multiskan FC型酶標(biāo)儀：賽默飛世爾(上海)儀器有限公司；BAL-TECCPD 030臨界冷凍干燥儀、BAL-TECSCD005噴金-離子濺射儀：瑞士BAL-TEC公司；Hitachi SU8010掃描電鏡：日本HITACHI公司；紫外分光光度計(jì)7200：尤尼科(上海)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 菌株CICC 33077多相分類(lèi)學(xué)鑒定

采用多相分類(lèi)學(xué)技術(shù),從菌株的形態(tài)學(xué)、生理生化特征和分子生物學(xué)特性方面對(duì)菌株CICC 33077進(jìn)行鑒定。

形態(tài)學(xué)鑒定：接種菌株CICC 33077于MEA固體培養(yǎng)基中,25℃培養(yǎng)48 h后,觀察菌落形態(tài)特征；并挑取少許菌體置于載玻片蒸餾水中,蓋好蓋玻片,利用光學(xué)顯微鏡觀察菌株顯微形態(tài)。收集新鮮菌體,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的戊二醛于4℃條件下固定過(guò)夜,并離心收集菌體,使用pH 7.2、濃度為100 mmol/L磷酸鹽緩沖液漂洗3次。分別使用體積分?jǐn)?shù)為50%、70%、85%、95%乙醇溶液梯度脫水,無(wú)水乙醇脫水3次后,利用臨界冷凍干燥儀進(jìn)行二氧化碳臨界點(diǎn)干燥,再通過(guò)噴金-離子濺射儀進(jìn)行噴金后,使用Hitachi SU8010掃描電鏡進(jìn)行菌體形態(tài)觀察。

生理生化試驗(yàn)：使用API20CAUX試劑條對(duì)菌株CICC 33077碳源底物利用特征進(jìn)行測(cè)定［14］。具體操作過(guò)程：首先將新鮮培養(yǎng)的菌體加到0.85%NaCl中,制備成2 McFarland菌懸液。準(zhǔn)確吸取100μL上述菌懸液,加到C培養(yǎng)基中混勻后,滴加到API20CAUX試劑條中,30℃培養(yǎng)72h后讀取結(jié)果,O孔為陰性對(duì)照,出現(xiàn)渾濁即為陽(yáng)性結(jié)果,說(shuō)明菌株能夠以該碳源作為生長(zhǎng)的碳源。

分子生物學(xué)鑒定：利用酵母菌基因組DNA提取試劑盒提取菌株CICC 33077基因組DNA,利用引物NL1(5′-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3′)和NL4(5′-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3′)對(duì)26SrRNAD1/D2區(qū)基因進(jìn)行擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系：10×PCRbuffer 5μL、dNTP(2.5mmol/L)4μL、模板2μL、Taq DNA聚合酶1μL、引物各1μL,補(bǔ)充雙蒸水至50μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性1 min；循環(huán)：94℃變性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸90 s,36個(gè)循環(huán)；72℃后再延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖進(jìn)行檢測(cè)后,送至北京諾賽基因組研究中心有限公司進(jìn)行測(cè)序。將所得的26SrRNA D1/D2區(qū)基因序列測(cè)序結(jié)果用基本本地隊(duì)列搜索工具(basic local alignment search tool,BLAST)軟件與美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(national center for biotechnology information,NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相似性比對(duì),使用MEGA 5.0軟件中的鄰接法(neighbor-joining,NJ)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)［15］。

1.3.2 菌株CICC 33077培養(yǎng)基優(yōu)化

(1)培養(yǎng)方法

菌種活化：將甘油保藏的菌株CICC 33077接種到MEA斜面培養(yǎng)基,于28℃培養(yǎng)24 h進(jìn)行活化。

種子培養(yǎng)：挑取一環(huán)活化好的菌株接種到MEB液體培養(yǎng)基中,于30℃、200 r/min條件下培養(yǎng)24 h,制備成種子液。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基：按照2%接種量將種子液接種于裝液量為50 mL/250 mLMEB液體培養(yǎng)基中,于30℃、200 r/min條件下培養(yǎng)24 h后于波長(zhǎng)600 nm處測(cè)定吸光度值。

(2)Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選取麥芽浸粉(A)、可溶性淀粉(B)、大豆蛋白胨(C)、硝酸銨(D)、蛋白胨(E)、磷酸氫二鉀(F)、氯化鈉(G)和硫酸鎂(H)8個(gè)因素制備液體培養(yǎng)基,根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,每個(gè)因素設(shè)置兩個(gè)水平,各因素及水平取值見(jiàn)表1。以菌株生物量(OD600nm值)為響應(yīng)值,運(yùn)用N=12的Plackett-Burman(PB)試驗(yàn)設(shè)計(jì)快速篩選對(duì)菌株CICC 33077生長(zhǎng)影響顯著的因素。

表1 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 1 Factors and levels of Plackett-Burman experiments design

(3)最陡爬坡試驗(yàn)

根據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果篩選出的顯著因素設(shè)計(jì)最陡爬坡試驗(yàn),確定各因素水平變化的方向和梯度,并以此確定響應(yīng)面設(shè)計(jì)的中心點(diǎn)［16］。

(4)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)由PB試驗(yàn)篩選出的麥芽浸粉(A)、大豆蛋白胨(B)、蛋白胨(C)、磷酸氫二鉀(D)4個(gè)顯著因素進(jìn)行優(yōu)化,以最陡爬坡試驗(yàn)中最大響應(yīng)值所對(duì)應(yīng)的各因素水平為參考,設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)的中心點(diǎn),并利用Design Expert 10.0.3軟件對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行回歸分析,試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素與水平Table 2 Factors and levels of Box-Behnken experiments design

1.3.3 菌株CICC 33077生長(zhǎng)pH及溫度的測(cè)定

在250 mL三角瓶中配制50 mL優(yōu)化后的液體培養(yǎng)基,使用HCl和NaOH調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0,培養(yǎng)溫度分別于20 ℃、25℃、28℃、30℃、37℃、45℃,接種2%種子液后于30℃,200 r/min振蕩培養(yǎng)24 h,測(cè)定培養(yǎng)物在波長(zhǎng)600 nm處的吸光度值,以空白培養(yǎng)基為對(duì)照。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株CICC 33077多相分類(lèi)學(xué)鑒定

2.1.1 菌株CICC 33077的形態(tài)學(xué)鑒定

菌株CICC 33077在MEA瓊脂培養(yǎng)基上于25℃培養(yǎng)48 h,進(jìn)行菌落形態(tài)鑒定及鏡檢測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1a可知,菌落為乳白色,平伏,質(zhì)地絨狀,符合典型的酵母菌特征。由圖1b及1c可知,在光學(xué)顯微鏡下和掃描電鏡下觀察,菌株CICC 33077的菌落直徑為9.0～11.0μm,能夠產(chǎn)生大量菌絲,細(xì)胞呈橢圓形或漏滴狀,芽殖,部分菌絲產(chǎn)生大量的橢圓形芽孢子。

圖1 菌株CICC 33077形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果Fig.1 Morphological observation results of strain CICC 33077

2.1.2 菌株CICC 33077的生理生化試驗(yàn)鑒定

菌株能夠以D-葡萄糖、甘油、肌醇、山梨醇、纖維二塘、D-麥芽糖、D-蔗糖、D-棉子糖為碳源生長(zhǎng),不能以2-酮基-葡萄糖酸鹽、L-阿拉伯糖、D-木糖等結(jié)果為唯一碳源生長(zhǎng),具體碳源利用情況見(jiàn)表3。

表3 菌株CICC 33077的生理生化試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of physiological and biochemical tests of strain CICC 33077

2.1.3 菌株CICC 33077的分子生物學(xué)鑒定

將菌株CICC 33077 26SrRNA D1/D2區(qū)基因序列測(cè)序后遞交數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì),發(fā)現(xiàn)與其親緣最近的是Saccharomycopsis fibuligera NRRL Y-2388T,相似性達(dá)到100%,而與其他菌種的相似性均在99%以下；結(jié)合形態(tài)學(xué)特征及生理生化試驗(yàn)結(jié)果,將其鑒定為扣囊復(fù)膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera),其26SrRNA D1/D2區(qū)基因序列登錄號(hào)為MF324892。

圖2 菌株CICC 33077 26S rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.2 26S rRNA gene phylogenetic tree of strain CICC 33077

2.2 響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化培養(yǎng)基組分

2.2.1 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果及分析

PB試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表4,對(duì)變量效應(yīng)進(jìn)行方差分析,結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知,8個(gè)因素中對(duì)響應(yīng)值影響的顯著性順序?yàn)镵2HPO4＞麥芽浸粉＞蛋白胨＞大豆蛋白胨＞MgSO4＞NaCl＞硝酸銨＞可溶性淀粉,其中麥芽浸粉、大豆蛋白胨、蛋白胨及磷酸氫二鉀為顯著影響因素。麥芽浸粉、大豆蛋白胨及蛋白胨均屬于復(fù)合營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),含有多種單糖、多聚糖及氨基酸、礦物質(zhì)、維生素及微量元素等,這可能是促進(jìn)菌體生長(zhǎng)迅速的原因之一［17］。此外,磷酸氫二鉀對(duì)菌株生長(zhǎng)的顯著促進(jìn)作用可能是因?yàn)槠涮峁┝肆?、鉀兩種元素,兩者都能參與到菌株物質(zhì)代謝或能量代謝過(guò)程中去［18-20］,起到促進(jìn)菌體生長(zhǎng)的作用。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果,初步認(rèn)為適當(dāng)增加培養(yǎng)基中麥芽浸粉、大豆蛋白胨、蛋白胨以及磷酸氫二鉀的含量有利于菌體生長(zhǎng),其他因素則無(wú)顯著性影響。因此,選擇麥芽浸粉、大豆蛋白胨、蛋白胨以及磷酸氫二鉀為后續(xù)最陡爬坡試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)的關(guān)鍵因素。

表4 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 4 Design and results of Plackett-Burman experiments

表5 Plackett-Buramn試驗(yàn)各因素效應(yīng)分析Table 5 Effect analysis of each factor of Plackett-Burman experiments

2.2.2 最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果及分析

最陡爬坡法可以確定主要影響因素的水平,其以試驗(yàn)值變化的梯度方向?yàn)榕榔路较?根據(jù)各因素效應(yīng)值的大小確定變化步長(zhǎng),能快速、經(jīng)濟(jì)地逼近最佳值區(qū)域［21］。最陡爬坡試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知,麥芽浸粉含量為4%,大豆蛋白胨含量為1.3%,蛋白胨含量為1.6%,磷酸氫二鉀含量為1.2%的試驗(yàn)組合5的響應(yīng)值(OD600nm值)達(dá)到最高,此后響應(yīng)值(OD600nm值)開(kāi)始降低,這說(shuō)明適當(dāng)增加培養(yǎng)基中碳源、氮源以及鉀鹽的含量有助于菌體的生長(zhǎng),但過(guò)多的添加反而造成不利影響,因此選擇適宜的添加量尤為重要。考慮到序號(hào)4的試驗(yàn)組合響應(yīng)值為7.96,序號(hào)5的試驗(yàn)組合響應(yīng)值為8.03,兩者相差不足0.1；故選取序號(hào)4試驗(yàn)組合與序號(hào)5試驗(yàn)組合中各種因素水平的中間值為后續(xù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)的中間點(diǎn),此時(shí)各因素添加量為麥芽浸粉3.75%、大豆蛋白胨1.2%、蛋白胨1.5%、磷酸氫二鉀1.1%。

表6 最陡爬坡試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 6 Design and results of the steepest ascent experiments

2.2.3 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果及分析

響應(yīng)面法可通過(guò)較少的試驗(yàn),較短的周期在整個(gè)區(qū)域內(nèi)給出因素與響應(yīng)值之間的明確函數(shù)關(guān)系,且精度更高,同時(shí)能夠研究幾種因素間的交互作用。根據(jù)最陡爬坡試驗(yàn)篩選出的試驗(yàn)中心點(diǎn),采用Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì),利用Design Expert 10.0.3軟件試進(jìn)行4因素3水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn),試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表7。建立以O(shè)D600nm值(R)為目標(biāo)函數(shù)的二次回歸方程,并對(duì)所得到的回歸方程進(jìn)行方差分析與顯著性檢驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表8。

生物量(R)與麥芽浸粉(A)、大豆蛋白胨(B)、蛋白胨(C)和磷酸氫二鉀(D)之間的四元二次回歸方程為：

R=8.0-0.18A+0.11B-0.062C+0.11D+0.30AB+0.023AC+0.06AD-0.09BC+0.077BD-7.500E-003CD-0.35A2-0.66B2-0.36C2-0.31D2

表7 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 7 Design and results of Box-behnken experiments

表8 回歸模型方差分析Table 8 Variance analysis of regression model

由表8可知,該模型P值=0.006 7＜0.01,達(dá)到極顯著水平,且失擬項(xiàng)在置信區(qū)間95%水平上不顯著(P=0.0537＞0.05),說(shuō)明模型擬合性較好,實(shí)驗(yàn)誤差在可接受范圍內(nèi),可以實(shí)際用于預(yù)測(cè)所選4個(gè)因素與菌體生長(zhǎng)之間的情況。同時(shí),一次項(xiàng)A,二次項(xiàng)D2及交互項(xiàng)AB影響顯著(P＜0.05),二次項(xiàng)A2、B2、C2影響極顯著(P＜0.01)；說(shuō)明麥芽浸粉含量對(duì)響應(yīng)值(OD600nm值)有顯著影響,麥芽浸粉與大豆蛋白胨含量對(duì)響應(yīng)值(OD600nm值)有顯著交互影響。麥芽浸粉、大豆蛋白胨、蛋白胨和磷酸氫二鉀這4個(gè)因素中兩兩因素對(duì)響應(yīng)值(OD600nm值)的交互作用,結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 酵母浸粉、大豆蛋白胨、蛋白胨及磷酸氫二鉀含量交互作用對(duì)生物量影響的響應(yīng)面和等高線Fig.3 Response surface plots and contour line of effects of interaction between yeast extract,soy peptone,peptone and K2HPO4 content on biomass

由圖3可知,大豆蛋白胨與麥芽浸粉的交互效應(yīng)影響顯著。當(dāng)大豆蛋白胨含量較低時(shí),獲得較高生物量(OD600nm值≈7.3)的麥芽浸粉含量大約在3.3%,當(dāng)大豆蛋白胨含量為1.2%時(shí),獲得最高生物量(OD600nm值≈8.02)的麥芽浸粉含量大約在3.6%；這說(shuō)明大豆蛋白胨與麥芽浸粉可能存在協(xié)同效應(yīng),在一定范圍內(nèi),同時(shí)提高兩者含量,可使菌株CICC 33077生物量增加。此外,圖中等高線的形狀可以反映出兩因素之間交互作用的強(qiáng)弱,橢圓形表示交互作用強(qiáng),對(duì)響應(yīng)值影響顯著,圓形則表示交互作用弱,對(duì)響應(yīng)值影響不顯著［22］。

根據(jù)上述分析及軟件計(jì)算,預(yù)測(cè)培養(yǎng)基最佳組合為麥芽浸粉3.586%,大豆蛋白胨1.216%,蛋白胨1.470%,磷酸氫二鉀1.148%,預(yù)測(cè)最高OD600nm值為(8.034±0.136)。為驗(yàn)證模型預(yù)測(cè)的可靠性,用預(yù)測(cè)得到的最優(yōu)培養(yǎng)基條件下進(jìn)行3次平行試驗(yàn),得出OD600nm值的實(shí)際平均值為(8.096±0.112),與響應(yīng)曲面擬合所得方程的預(yù)測(cè)值符合良好,說(shuō)明該模型較為合理。

2.3 菌株CICC 33077生長(zhǎng)pH及溫度測(cè)定結(jié)果

菌株CICC33077生長(zhǎng)pH值試驗(yàn)結(jié)果表明,初始pH值對(duì)扣囊復(fù)膜孢酵母(Saccharomycopsis fibuligera)CICC 33077生物量的影響很大,初始pH值在3.0～11.0時(shí),菌株生長(zhǎng)良好；pH 6.0時(shí),該菌株菌體量達(dá)到最大值,pH值在1.0～2.0時(shí),菌株CICC 33077生長(zhǎng)趨于停滯?？傮w而言,該菌株pH適應(yīng)范圍廣泛,能夠應(yīng)用于大曲發(fā)酵的酸性環(huán)境。

圖4 扣囊復(fù)膜孢酵母CICC 33077生長(zhǎng)pH值測(cè)定結(jié)果Fig.4 Determination results of growth pH of S.fibuligera CICC 33077

圖5 扣囊復(fù)膜孢酵母CICC 33077生長(zhǎng)溫度值測(cè)定結(jié)果Fig.5 Determination results of growth temperature of S.fibuligera CICC 33077

菌株CICC 33077生長(zhǎng)溫度試驗(yàn)結(jié)果表明,扣囊復(fù)膜孢酵母(S.fibuligera)CICC 33077生長(zhǎng)溫度范圍較廣。該菌株在25～40℃條件下能保持良好生長(zhǎng)；30℃為最適生長(zhǎng)溫度。20℃時(shí),菌株生長(zhǎng)緩慢；在低于15℃或高于45℃的條件下,該菌株停止生長(zhǎng)。

3 結(jié)論

本研究采用多相分類(lèi)鑒定技術(shù)對(duì)分離于扳倒井高溫大曲中的產(chǎn)淀粉酶菌株CICC 33077分類(lèi)學(xué)地位進(jìn)行研究,鑒定結(jié)果表明,該菌株為扣囊復(fù)膜孢酵母(Saccharomycopsisfibuligera)。以生物量(OD600nm值)為響應(yīng)值,利用PB設(shè)計(jì)、最陡爬坡試驗(yàn)及Box-Behnken設(shè)計(jì)對(duì)扣囊復(fù)膜孢酵母(S.fibuligera)CICC 33077培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行了優(yōu)化,最優(yōu)培養(yǎng)基組分為麥芽浸粉3.586%,大豆蛋白胨1.216%,蛋白胨1.470%,磷酸氫二鉀1.148%。對(duì)S.fibuligera CICC 33077生長(zhǎng)溫度與生長(zhǎng)pH的研究表明,該菌株可在20～40℃,pH 3.0～pH 12.0條件下生長(zhǎng),最適生長(zhǎng)溫度為30℃,最適生長(zhǎng)pH值為6.0。在此培養(yǎng)條件下利用優(yōu)化培養(yǎng)基進(jìn)行菌株的培養(yǎng),生物量(OD600nm值)達(dá)到(8.136±0.102),比優(yōu)化前提高了170%。

本研究通過(guò)對(duì)S.fibuligera CICC 33077的初步研究,確定了適合菌株生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及培養(yǎng)條件,為下一步研究該菌株的生物學(xué)功能、固體產(chǎn)酶條件以及在扳倒井高溫大曲生產(chǎn)中的實(shí)際應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。

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《中國(guó)釀造》雜志征稿啟事

《中國(guó)釀造》創(chuàng)刊于1982年,是由中國(guó)商業(yè)聯(lián)合會(huì)主管,中國(guó)調(diào)味品協(xié)會(huì)及北京食品科學(xué)研究院主辦的綜合性科技期刊。并歷次被評(píng)為全國(guó)中文核心期刊、中國(guó)科技核心期刊、《中國(guó)知網(wǎng)》重點(diǎn)收錄期刊、《萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)》全文收錄期刊、《中文科技期刊數(shù)據(jù)庫(kù)》來(lái)源期刊、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊網(wǎng)絡(luò)出版總庫(kù)收錄期刊、美國(guó)《烏利希期刊指南》(UPD)收錄期刊、英國(guó)《食品科學(xué)文摘》(FSTA)收錄期刊、英國(guó)《國(guó)際農(nóng)業(yè)與生物科學(xué)研究中心》(CABI)收錄期刊、美國(guó)《化學(xué)文摘》(CA)收錄期刊、俄羅斯《文摘雜志》(AJ)收錄期刊、中國(guó)科學(xué)評(píng)價(jià)研究中心(RCCSE)數(shù)據(jù)庫(kù)收錄期刊,也是學(xué)位與研究生教育的中文重要期刊。

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