鄒玖零，吳昌奇，郝知友，屈蓓蓓，禹小芳，劉 剛，李英明，尹秋元

（1. 永州市畜牧水產(chǎn)局，湖南永州 425000；2. 永州市冷水灘區(qū)畜牧水產(chǎn)局，湖南永州 425000）

禽流感（Avian influenza，AI）是由甲型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一種禽類傳染病，可導(dǎo)致火雞、雞、鴿子、珍珠雞、鵪鶉等陸禽發(fā)病，其中火雞和雞對其最易感，引起的發(fā)病率和死亡率較高[1]。鴨和鵝等水禽是AIV的自然宿主[2]，可隱性帶毒。研究發(fā)現(xiàn)AIV可在水禽消化道中繁殖，并且不同亞型病毒在體內(nèi)可不斷重組變異[3]。AIV根據(jù)致病性不同可分為高致病性和低致病性兩種，其中H5、H7亞型為高致病性[4]。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）將高致病性AI列為法定報告動物疫病，我國將其列為一類動物疫病[5]。近期的AIV主動監(jiān)測顯示，陽性樣品主要來自活禽交易市場。為有效研判湖南省永州市AI流行態(tài)勢，進(jìn)一步制定具有針對性的防控措施，2017年4—12月對該市禽類調(diào)運頻繁的冷水灘黃泥井活禽交易市場、零陵虎子嶺禽類批發(fā)市場及部分城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場進(jìn)行了AIV污染狀況調(diào)查。

1 材料與方法

1.1 樣本采集

起初樣品采集點設(shè)在冷水灘區(qū)黃泥井活禽交易市場，每月采集5個攤位50份家禽拭子（3個水禽攤位、2個雞攤位）、10份環(huán)境拭子（包括籠具、食物、飲水、污水等，每個攤位2份）；后續(xù)擴(kuò)大了樣品采集范圍，在部分城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場及零陵虎子嶺禽類批發(fā)市場也開展了調(diào)查。

1.2 主要試劑及儀器

核酸提取試劑盒（磁珠法）：購自杭州艾康生物技術(shù)有限公司；禽流感病毒H5/H7亞型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒：購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。其他儀器：ABI7500實時熒光PCR儀；杭州艾康生物科技生產(chǎn)的核酸提取儀。

1.3 檢測方法

按禽流感病毒H5/H7亞型實時熒光RT-PCR檢測試劑盒說明書進(jìn)行病原檢測。從采集的樣本中提取病毒 RNA 后，以實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法（real time RT-PCR）檢測 H5、H7亞型核酸；CT值＜38判定為陽性。

1.4 數(shù)據(jù)分析

將有關(guān)數(shù)據(jù)錄入Excel 2003軟件進(jìn)行整理，分析不同動物種類、時間、場所、來源地及環(huán)境樣品中的陽性率是否存在差異，并使用GraphPad Prism 5軟件制圖。

2 結(jié)果

2.1 總體情況

2017年4—12月，每月在市場采集樣品進(jìn)行H5/H7亞型AIV檢測，共采集49個攤位（次）的571份樣品。其中，在9攤位（次）44份樣品中檢出H5亞型AIV核酸陽性，陽性檢出率為7.7%，未檢出H7亞型AIV核酸陽性樣品（表1）。

表1 總體檢測情況

2.2 時間分布

除5月份未檢出陽性樣品外，其余月份都檢出了H5亞型AIV核酸陽性樣品，且臨近冬季，陽性檢出率明顯上升（圖1）。另外，檢出陽性的禽類均在攤位停留2 d以上。

圖1 陽性率時間分布

2.3 病毒分布

44份H5亞型AIV陽性樣品中，有鴨拭子27份、環(huán)境拭子17份；各類環(huán)境標(biāo)本中，均檢測出H5亞型AIV核酸陽性樣品，其中飼料2份、糞便5份、籠具3份、飲水1份、污水5份、案板1份，污水中的陽性檢出率最高（表2）。9個家禽樣品陽性攤位中，有7個在周邊環(huán)境樣品中也檢出陽性。

2.4 來源地分布

本次調(diào)查的主要檢測點為冷水灘區(qū)黃泥井活禽交易市場，下半年檢測范圍拓展到城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場和零陵區(qū)虎子嶺批發(fā)市場。檢測發(fā)現(xiàn)，城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場的陽性檢出率（23.8%）高于城區(qū)活禽交易市場（表3）。另外從活禽調(diào)運記錄看，檢測到陽性的9個攤位中，有7個攤位的活禽來源于本地周邊地區(qū)，另外2戶分別來自廣東和廣西等外省份。

表2 環(huán)境標(biāo)本檢測情況

3 分析與討論

高致病性禽流感不僅對養(yǎng)禽業(yè)帶來極大經(jīng)濟(jì)損失，而且經(jīng)過變異后還可以跨種傳播給人類[6]，危害公眾衛(wèi)生安全。本次禽流感污染狀況調(diào)查對全市活禽市場進(jìn)行了摸底，并對禽流感防控知識進(jìn)行了宣傳。

通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，永州市活禽市場中存在H5亞型AIV；除5月外，每月都能監(jiān)測到陽性樣品，特別臨近冬季陽性率明顯上升；另外，活禽在攤位中停留時間越長，陽性檢出率越高。這說明活禽在市場停留過程中，AIV在這些活禽之間存在著一個顯著的擴(kuò)散和增殖過程。同時發(fā)現(xiàn)，H5亞型陽性樣品均來自鴨，其攤位周邊環(huán)境樣品也大多檢出陽性，但臨床檢查和溯源調(diào)查均未發(fā)現(xiàn)發(fā)病禽，為隱性帶毒，再次印證了鴨為AIV的攜帶與保存體，環(huán)境散毒污染風(fēng)險較大。從環(huán)境標(biāo)本類型來看，H5亞型AIV陽性檢出率最高的是污水，其次為籠具，最低的是飲水?？赡茉颍菏袌霏h(huán)境臟、亂、差，清洗消毒不到位，導(dǎo)致污水中的病毒污染率較高；而飲水一般都是單獨器皿盛放，受外源污染風(fēng)險小且經(jīng)常更換清洗，所以病毒檢出率較低。從樣品來源看，城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場陽性檢出率高于城區(qū)活禽交易市場。經(jīng)調(diào)查，陽性率高的市場，環(huán)境衛(wèi)生相對較差，雞與水禽混合銷售，同時還有散戶同場銷售未經(jīng)檢疫的禽類，因而易導(dǎo)致宿主間的交叉感染，或誘導(dǎo)病毒發(fā)生基因重組或突變。通過調(diào)查還發(fā)現(xiàn)，77.8%陽性攤位活禽來源于本市冷水灘區(qū)周邊縣。因此，嚴(yán)格活禽調(diào)運檢疫和監(jiān)管是禽流感防控的重要手段，應(yīng)杜絕市場內(nèi)的雞和水禽混合銷售現(xiàn)象，同時還要嚴(yán)防病原從市場回流到養(yǎng)殖環(huán)節(jié)。

表3 不同來源地檢測情況

自2017年秋強(qiáng)制免疫“H7+H5”疫苗以來，永州市未發(fā)生H7亞型禽流感疫情，也一直未監(jiān)測到H7亞型AIV核酸陽性樣品，說明做好免疫仍是防控禽流感最重要的手段。但鑒于市場環(huán)節(jié)H5亞型AIV陽性檢出率較高，且溯源調(diào)查均未檢測到陽性樣品，說明活禽來源廣、品種雜、密度大的活禽市場是AIV保存、增殖的重要場所[7]。因此，要嚴(yán)格執(zhí)行“一日一清洗，一周一消毒，一月一休市，過夜零存欄”措施，嚴(yán)把清洗消毒關(guān)，切斷病毒傳播途徑，同時要提高養(yǎng)殖戶防疫意識，實現(xiàn)防疫觀從“要我防”到“我要防”的轉(zhuǎn)變，切實把禽流感發(fā)生風(fēng)險降到最低。

4 結(jié)論

本次活禽市場禽流感污染調(diào)查發(fā)現(xiàn)，永州市活禽交易市場的AIV平均污染率為7.7%，且?guī)缀趺吭露寄軝z出陽性，說明該地活禽市場長期存在AIV污染，且隨著活禽在攤位中停留時間的延長，病毒污染不斷加重。鴨等水禽樣品的病毒檢出率較高，說明水禽是AIV的攜帶者和儲存器，具有較高的病毒散播風(fēng)險。因此，應(yīng)禁止市場內(nèi)陸禽和水禽的混合銷售，嚴(yán)格活禽調(diào)運檢疫和監(jiān)管。污水以及衛(wèi)生條件較差的城鄉(xiāng)農(nóng)貿(mào)市場中的病毒檢出率較高，說明嚴(yán)把市場休市清洗消毒關(guān)，提升市場環(huán)境的衛(wèi)生水平，對于禽流感防控尤為重要。

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