趙瑩 周訓(xùn)華 陳艷輝

[摘要] 目的 探討宮頸上皮細胞穩(wěn)定性游離亞鐵原卟啉（FH）檢測在不同年齡段宮頸癌診斷中的意義。 方法 回顧性分析湖南省腦科醫(yī)院2014年10月～2017年10月收治的213例宮頸腫瘤患者的臨床資料，將其按年齡分為≤30歲、>30～40歲、>40～50歲、>50～60歲、>60～70歲及>70歲6個年齡段，均行手術(shù)治療且均經(jīng)病理檢測明確診斷，另均行上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測。對比不同年齡段FH檢測結(jié)果，分析不同年齡段FH檢測的靈敏度、特異度及準確度，并繪制基于上皮穩(wěn)定性FH的檢測結(jié)果在不同年齡段宮頸腫瘤患者中的工作曲線（ROC），得出曲線下面積（AUC）。 結(jié)果 >40～50歲者與>60～70歲者的總陽性率均明顯高于≤30歲、>30～40歲、>50～60歲及>70歲者（P < 0.05），但其他各年齡段兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）；宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH染色檢測≤30歲、>30～40歲、>40～50歲、>50～60歲、>60～70歲及>70歲宮頸癌患者分別有10、25、56、9、50例及11例，而病理學診斷則分別有7、21、55、7、49例及8例；不同年齡段宮頸腫瘤患者進行上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測均具有較高的靈敏度、特異度及準確度，但>40～50歲與>60～70歲者高于其他年齡段；上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測>40～50歲、>60～70歲、>30～40歲、>70歲、>50～60歲及≤30歲的AUC分別為0.956、0.949、0.819、0.763、0.727及0.725。 結(jié)論 宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測在不同年齡段宮頸癌診斷中均具有一定的可靠性，但在>40～50歲與>60～70歲者中靈敏度、特異度及準確度相對較高，可用于指導(dǎo)臨床宮頸癌篩查及診斷。

[關(guān)鍵詞] 宮頸上皮細胞穩(wěn)定性游離亞鐵原卟啉；宮頸癌；年齡段

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）02（c）-0110-05

Significance of detection of cervical epithelial cell stability free ferrous protoporphyrin in the diagnosis of cervical cancer in different ages

ZHAO Ying ZHOU Xunhua CHEN Yanhui

Department of Gynecology and Obstetrics， Hu'nan Brain Hospital， Hu'nan Province， Changsha 410007， China

[Abstract] Objective To investigate the significance of detection of cervical epithelial cell stability free ferrous protoporphyrin （FH） in the diagnosis of cervical cancer in different ages. Methods The clinical data of 213 cases of patients with cervical tumor admitted to Hu'nan Brain Hospital from October 2014 to October 2017 was retrospectively analyzed. They were divided into 6 age groups of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old， and >70 years old by age， and all the patients were treated with surgical treatment and diagnosed by pathological examination， also they were detected by cervical epithelial cells stability FH. The results of FH detection at different ages were compared， and the sensitivity， specificity and accuracy of FH test in different age groups were analyzed， then the receiver operating curves （ROC） of patients with high-risk cervical cancer in different age groups based on uterine epithelial cells stability FH were made， and the area under curves （AUC） were obtained. Results The total positive rates of people at age of >40-50 years old and >60-70 years old were significantly higher than those of ≤30 years old， >30-40 years old， >50-60 years old and >70 years old （P < 0.05）， but there were no significant differences between the other age groups （P > 0.05）. There were respectively 10， 25， 56， 9， 50 cases and 11 cases of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old and >70 years old by cervical epithelial cells stability FH， while there were respectively 7， 21， 55， 7， 49 cases and 8 cases of ≤30 years old， >30-40 years old， >40-50 years old， >50-60 years old， >60-70 years old and >70 years old by immunocytochemistry examination. Epithelial cells stability FH detection had higher sensitivity， specificity and accuracy in different age groups， which of >40-50 years old and >60-70 years old were higher than other age groups. The AUC of the uterine epithelial cells stability FH for the detection of people at age of >40-50 years old， >60-70 years old， >30-40 years old， >70 years old， >50-60 years old， and ≤30 years old were 0.956， 0.949， 0.819， 0.763， 0.727 and 0.727 respectively. Conclusion Cervical epithelial cells stability FH staining are reliable in the diagnosis of cervical cancer at different ages， but the sensitivity， specificity and accuracy of >40-50 years old and >60-70 years old are relatively higher other ages， which can be used to guide clinical screening and diagnosis of cervical cancer.

[Key words] Cells free ferrous protoporphyrin in cervical epithelial cell stability； Cervical carcinoma； Age group

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤，其病死率占女性癌癥病死率第2位，嚴重威脅女性生命安全[1-2]。采用有效的宮頸癌篩查方法，使宮頸癌前病變及宮頸癌得以早期發(fā)現(xiàn)，并及時給予有效的治療，可降低宮頸癌患者的發(fā)病率與病死率[3-4]。細胞游離亞鐵原卟啉（cells free ferrous protoporphyrin，F(xiàn)H）是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中產(chǎn)生的一種生物標志因子，具有可連續(xù)測量性，與細胞癌變程度具有密切正相關(guān)性[5]。上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測是近年來臨床篩查宮頸癌前病變及宮頸癌的一種新型方法，對宮頸癌的早期診斷具有重要意義，但關(guān)于其在不同年齡段宮頸癌患者診斷中的應(yīng)用鮮有報道，鑒于此，本研究特將213例高危宮頸癌者按年齡進行分組，均進行上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測，以探討其在不同年齡段宮頸癌患者中的診斷價值，詳情如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析湖南省腦科醫(yī)院2014年10月～2017年10月收治的213例宮頸腫瘤患者的臨床資料。所有患者均行手術(shù)治療，且均經(jīng)病理檢查明確診斷，均行宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測，保留有完整的病例資料，各項數(shù)據(jù)可查。其中≤30歲者18例，>30～40歲者36例，>40～50歲者64例，>50～60歲者16例，>60～70歲者59例，>70歲者20例。患者或家屬均簽署知情同意書，且本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 病理診斷 手術(shù)切除取病變組織標本，用10%甲醛溶液進行固定，酒精脫水，二甲苯透明，常規(guī)石蠟包埋標本組織，行病理切片，厚度約為4 μm，脫蠟至水，行蘇木精-伊紅染色，脫水透明，封片，在電子顯微鏡下觀察組織病理形態(tài)。

1.2.2 宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測 ①檢測試劑與材料：細胞保存液購自深圳市廖氏原生物醫(yī)學科技有限公司，細胞刷購自常州洛克曼醫(yī)療器械有限公司，上皮細胞FH檢測試劑盒購自青島東孚美倫生物科技有限公司；②檢測方法：持宮頸滲液采樣器從陰道徐徐插入至子宮頸部位，按照右上、右下、左下、左上及宮頸管口順序進行擦拭，獲得帶有細胞的滲液，并將細胞滲液與細胞保存液進行充分混勻，然后送檢。嚴格按照上皮細胞FH檢測試劑盒操作步驟進行，乳白色滴管管口兩翼部按順時針方向給予折斷，并將試劑滴進測試池中，且用此管吸取樣本液1 mL，然后將樣本液滴進測試池中，之后旋轉(zhuǎn)折斷橘紅色滴管，將試劑滴進測試池內(nèi)，在2 min內(nèi)同比色板對比顯色情況。

1.2.3 靈敏度、特異度及準確度計算方法 以病理學診斷結(jié)果作為金標準，將宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測結(jié)果與金標準結(jié)果進行對比，F(xiàn)H檢測結(jié)果與病理診斷相符合的為真陽性或真陰性，反之為假陽性或假陰性，其中靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性）×100%，特異度=真陰性/（假陽性+真陰性）×100%，準確度=（真陽性+真陰性）/總例數(shù)×100%。

1.3 判定標準

1.3.1 組織病理學診斷 正?；蜓仔苑磻?yīng)；宮頸上皮細胞內(nèi)瘤變：基底膜上方上皮細胞形態(tài)及結(jié)構(gòu)出現(xiàn)異變；原位癌：癌細胞占據(jù)上皮全層，基底膜完整，無間質(zhì)浸潤；浸潤癌：癌細胞穿破基底膜侵入間質(zhì)。

1.3.2 宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測 顯示灰白色或微藍色為陰性，提示子宮上皮細胞穩(wěn)定性良好；顯示藍色為陽性，提示子宮上皮細胞不穩(wěn)定；顯示深藍色為強陽性，提示子宮上皮細胞極不穩(wěn)定，而深藍色后即刻轉(zhuǎn)為棕紅色或深黃色提示標本內(nèi)可能混有血液?？傟栃月?（陽性+強陽性）/總?cè)藬?shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，兩樣本和多樣本計數(shù)資料用百分比表示，采用χ2檢驗，等級資料比較采用非參秩和檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段子宮上皮細胞穩(wěn)定性游離亞鐵原卟啉檢測結(jié)果比較

不同年齡段等級分布比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），總陽性率比較差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）；>40～50歲者與>60～70歲者的總陽性率均明顯高于 ≤30歲、>30～40歲、>50～60歲及>70歲者（P < 0.05），但其他各年齡段兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 子宮上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測結(jié)果與病理學診斷結(jié)果比較

兩種方法檢測宮頸癌結(jié)果見表2，上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測方法與病理學診斷結(jié)果對比見表3，可見不同年齡段宮頸癌者進行上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測均具有較高的靈敏度、特異度及準確度，但>40～50歲者與>60～70歲者高于其他年齡段。上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測對不同年齡段宮頸癌檢查的ROC如圖1所示，可知>40～50歲、>60～70歲、>30～40歲、>70歲、>50～60歲及≤30歲的AUC分別為0.956、0.949、0.819、0.763、0.727、0.725。

3 討論

宮頸癌在女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中較多見，高危型人乳頭瘤病毒（HPV）感染是宮頸癌發(fā)病的主要危險因素，且性生活、孕產(chǎn)年齡及次數(shù)等也與宮頸癌的發(fā)生密切相關(guān)[6-7]。宮頸癌早期常無明顯體征及癥狀，宮頸可光滑或難與宮頸柱狀上皮異位區(qū)別，且頸管型患者常因?qū)m頸外觀正常易漏診或誤診，因此，需尋找有效的檢測方法，以促進宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)與診斷，便于及時給予有效的治療措施[8-9]。近年來，宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測篩查得以普遍應(yīng)用，極大地促進了宮頸癌及宮頸癌變的早發(fā)現(xiàn)、早診斷及早治療，明顯降低了宮頸癌發(fā)病率及病死率，但其在不同年齡段宮頸癌患者診斷中的意義尚未有明確報道，因此，需進一步深入研究，探討其是否可為提高臨床宮頸癌篩查力度提供理論依據(jù)。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，>40～50歲者與>60～70歲者的總陽性率均明顯高于≤30歲、>30～40歲、>50～60歲及>70歲者（P < 0.05），但其他各年齡段兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），提示子宮上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測對宮頸癌具有一定的診斷價值，但在>40～50歲與>60～70歲年齡段中宮頸癌發(fā)病率較高。有研究表明[10]，宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測在宮頸癌患者的篩查及診斷中具有較高的應(yīng)用價值。FH主要存在于線粒體中，當致癌因子出現(xiàn)時，細胞內(nèi)抑癌基因發(fā)生突變或缺失，喪失對葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的抑制作用，使細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)失調(diào)及能量代謝異常，且蛋白質(zhì)的構(gòu)象發(fā)生改變，導(dǎo)致亞鐵原卟啉從細胞蛋白中析出，成為FH[11]。游離的FH是一種活性基團，它能夠催生亞硝基自由基、氧自由基、羥自由基等，但自由基中含未配對的電子，具有極不穩(wěn)定性，可從鄰近的脂肪、蛋白質(zhì)及DNA上奪取電子，使自己處于一種穩(wěn)定狀態(tài)，然而鄰近的分子則變成新的自由基，再去從別的分子上奪取電子，此種連鎖反應(yīng)引起脂蛋白、細胞膜脂質(zhì)、細胞骨架及DNA等的氧化損傷，導(dǎo)致細胞自身調(diào)控出現(xiàn)紊亂，使組織細胞發(fā)生癌變[12-13]。隨著組織器官及細胞氧化損傷的加重，F(xiàn)H滲出增多，且FH滲出量與上皮細胞惡性程度呈正相關(guān)[14]。因此，宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測對宮頸癌的篩查與診斷具有極其重要的作用。而宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH在>40～50歲者與>60～70歲者中陽性率較高，可指導(dǎo)臨床工作者重視此兩個年齡段女性的宮頸癌篩查工作，督促該年齡段女性定期至醫(yī)院進行體檢，加大健康教育力度，增強她們自我預(yù)防意識，積極主動至醫(yī)院進行宮頸癌篩查，以利于及時發(fā)現(xiàn)宮頸癌變，及時給予積極治療，降低宮頸癌發(fā)病率及病死率。

本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，不同年齡段宮頸癌患者進行上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測均有較高的靈敏度、特異度和準確度，但>40～50歲者與>60～70歲者高于其他年齡段者，且上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測>40～50歲、>60～70歲、>30～40歲、>70歲、>50～60歲及≤30歲的AUC分別為0.956、0.949、0.819、0.763、0.727及0.725，提示子宮上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測診斷宮頸癌結(jié)果可靠，但在>40～50歲者與>60～70歲者可靠性相對較高。宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH可作為宮頸癌生物標志物，通過染色可對宮頸癌患者進行篩查與診斷。有研究表明[15]，子宮上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測對診斷宮頸癌具有較高的敏感度。另有研究報道[16]，子宮上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測對>40～50歲宮頸癌患者具有較高的靈敏度與準確度。30～40歲婦女性生活較活躍，感染上HPV的概率較高，且可能存在反復(fù)感染的情況，而HPV持續(xù)感染是宮頸上皮惡化的最重要危險因素，感染超過半年者易發(fā)生癌變，且HPV感染后演變成宮頸癌需10～20年，因此，從宮頸癌的發(fā)生和演變過程來看，40～50歲形成一個宮頸癌發(fā)病的高峰，宮頸上皮發(fā)生癌變，則FH滲出增多[17-18]。此外，老年患者的卵巢功能減退及雌激素水平降低，陰道壁萎縮及黏膜變薄，且宮頸上皮與子宮內(nèi)膜呈萎縮狀態(tài)，使局部微循環(huán)發(fā)生改變，患者抵抗力下降，易感染病原微生物，導(dǎo)致子宮頸發(fā)生癌變，增加FH滲出含量[19-20]。結(jié)合上述研究結(jié)果，則宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測在不同年齡段檢測結(jié)果及其靈敏度、特異度與準確度的不同可能與患者感染HPV的概率及機體功能狀態(tài)有關(guān)。

綜上所述，宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測在不同年齡段宮頸癌患者中均具有較高的診斷價值及可靠性，但在>40～50歲與>60～70歲患者中靈敏度、特異度、準確度均較高，可指導(dǎo)臨床宮頸癌篩查工作。但患者存在個體差異性，且受宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測技術(shù)水平的影響，此研究結(jié)果可能存在一定的偏差，尚需結(jié)合大量臨床資料進行統(tǒng)計分析，并進一步深入探討年齡與FH表達的關(guān)系，以指導(dǎo)診斷和治療。

[參考文獻]

[1] 周暉，林仲秋.美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)“2016宮頸癌臨床實踐指南”解讀[J].中國實用婦科與產(chǎn)科雜志，2016， 32（3）：223-230.

[2] 劉慧強.我國宮頸癌流行病學特征和高危因素分析[J].中國婦幼保健，2016，31（6）：1258-1260.

[3] 何曉明，尤志學.2013年WHO宮頸癌篩查及處理方案指南的解讀[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展，2015，24（3）：220-223.

[4] 孫妙紅，何玉立.HPV檢測在早期宮頸癌篩查中的臨床意義[J].中國婦幼保健，2015，30（17）：2730-2731.

[5] 胡玉芹，劉付強，劉巖麗，等.宮頸上皮細胞穩(wěn)定性FH檢測與TCT技術(shù)在宮頸病變篩查中的應(yīng)用價值[J].河北醫(yī)科大學學報，2016，37（1）：35-39.

[6] 吳翠霞，張艷紅，葛小花，等.高危型HPV感染與宮頸癌前病變與宮頸癌的相關(guān)性研究[J].中華醫(yī)院感染學雜志，2016，26（11）：2568-2570.

[7] Srivastava S，Singh S，F(xiàn)atima N，et al. Pre-microRNA Gene Polymorphisms and Risk of Cervical Squamous Cell Carcinoma [J]. J Clin Diagn Res，2017，11（9）：31-34.

[8] 王少云，謝東.宮頸液基薄層細胞學檢測聯(lián)合陰道鏡在篩查宮頸癌前病變中的價值[J].中國性科學，2015，24（11）：36-39.

[9] Kishore V，Patil AG. Expression of p16INK4A Protein in Cervical Intraepithelial Neoplasia and Invasive Carcinoma of Uterine Cervix [J]. J Clin Diagn Res，2017，11（9）：17-20.