章 杰，何 航，劉安芳，羅宗剛，陳 磊

(1. 西南大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院，榮昌 402460； 2. 重慶市畜牧科學(xué)院，榮昌 402460)

中國是世界最大的豬肉生產(chǎn)和消費(fèi)國，豬肉產(chǎn)量占世界50%以上。目前，為了降低對環(huán)境的污染，在控制養(yǎng)殖規(guī)模的前提下，又要不影響市場供給量，就需提高豬的生產(chǎn)水平和健康狀況。飼養(yǎng)動物對環(huán)境的適應(yīng)性是一個十分重要的問題，沒有良好的適應(yīng)性，生產(chǎn)性能再好的遺傳潛力也不能充分表現(xiàn)，甚至不能生存[1-2]。隨著養(yǎng)豬業(yè)規(guī)?；⒓s化程度的不斷提高，環(huán)境溫度被認(rèn)為是影響豬健康和生產(chǎn)力的最重要的外界環(huán)境影響因素，豬可通過物理和化學(xué)調(diào)節(jié)來適應(yīng)外界溫度的變化[3]。據(jù)報(bào)道，中國從加拿大、美國、英國和日本等國引進(jìn)的豬種在夏季或冬季死亡率較高，并且高溫或低溫環(huán)境會導(dǎo)致母豬生殖失敗，如分娩率低和發(fā)情期延遲等[4]，主要原因是外來豬種對中國不同地區(qū)環(huán)境的適應(yīng)性差，進(jìn)而影響到中國以外來豬種為主的養(yǎng)豬業(yè)生產(chǎn)水平。而中國地方豬種由于世世代代長期生活在當(dāng)?shù)氐淖匀粭l件下，形成了對當(dāng)?shù)丨h(huán)境的良好適應(yīng)性，在極端氣候條件下也能表現(xiàn)出良好的生長發(fā)育和生產(chǎn)性能。適應(yīng)性是機(jī)體抗逆性和抗病性的表現(xiàn)，是有一定的遺傳基礎(chǔ)，受到各類基因的調(diào)控。因此，了解中國地方豬種高、低溫環(huán)境下基因表達(dá)情況對理解豬的環(huán)境適應(yīng)性具有一定的實(shí)踐意義，可為生產(chǎn)上選擇性提高豬的環(huán)境適應(yīng)性奠定理論基礎(chǔ)，也為中國地方豬種資源的保護(hù)及開發(fā)提供理論依據(jù)。

動物馴化是人類歷史上最重要的事件之一，使人類從狩獵和采集的生活方式過渡到更安定的生活方式。大約在一萬年前，豬被馴養(yǎng)[5]。從那時起，豬就開始受到自然選擇和人工選擇的綜合影響，導(dǎo)致外貌、生育率、生長、適口性和當(dāng)?shù)剡m應(yīng)性等表型出現(xiàn)顯著地分化[6]。當(dāng)前，中國是家豬遺傳資源的主要擁有國家，占全球所有品種的1/3以上(約100種)。經(jīng)過長期的自然選擇和人工選育，中國地方豬種已進(jìn)化出了極強(qiáng)的適應(yīng)性來適應(yīng)中國廣闊的、復(fù)雜的地理生態(tài)環(huán)境[6]。中國高低緯度和不同海拔地區(qū)的地方豬種對冷熱環(huán)境溫度具有明顯的體溫調(diào)節(jié)機(jī)制。M.Z.Li等[7]通過對藏豬和四川盆地特有家豬品種從基因組水平進(jìn)行了基因選擇性清除分析，結(jié)果揭示了不同海拔環(huán)境豬適應(yīng)性的分子機(jī)理，并鑒定出藏豬高海拔適應(yīng)性的快速進(jìn)化基因268個，家豬肌肉生長、脂肪沉積、免疫基因等受到人工強(qiáng)烈選擇的基因516個。H.Ai等[8]在全基因組范圍內(nèi)系統(tǒng)地鑒別出了與不同緯度環(huán)境適應(yīng)性相關(guān)的219個候選基因位點(diǎn)，揭示了中國南方豬和北方豬適應(yīng)不同環(huán)境溫度的分子機(jī)制。關(guān)于同一地區(qū)(像重慶夏季酷熱、冬季嚴(yán)寒的極端氣候地區(qū))豬對不同環(huán)境溫度的分子適應(yīng)性研究還未見報(bào)道，因此，本研究比較分析了重慶地區(qū)低、高溫月份豬能量代謝相關(guān)的分子表達(dá)水平，以期了解豬適應(yīng)不同環(huán)境溫度的分子變化情況，為闡明豬適應(yīng)性進(jìn)化的遺傳基礎(chǔ)作前期研究。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本研究選取榮昌豬為試驗(yàn)對象，按月份記錄6月齡(180 d)豬的月增長體重，記錄周期為1～12月，并利用全自動溫濕度記錄儀，采集試驗(yàn)場所的氣溫?cái)?shù)據(jù)。所有豬參照NRC[9](1998)豬營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)飼喂于西南大學(xué)畜牧實(shí)訓(xùn)基地，并且對豬舍溫度不進(jìn)行人為控制，比如地暖、水簾和風(fēng)機(jī)等。

1.2 樣品采集

在低溫(1月)和高溫(8月)各選取12頭豬進(jìn)行屠宰，宰前24 h禁食、供水，宰后立即采集大腦、心、肝、肺、腎、眼肌和腰肌放入液氮中，帶回實(shí)驗(yàn)室，保存于-80 ℃待用。

1.3 總DNA和RNA提取

總DNA和RNA的提取按照說明書分別使用E.Z.N.A.?Tissue DNA Kit (Omega)和Trizol(Invitrogen)進(jìn)行操作。提取出的總DNA溶解于50 μL TE緩沖液中，并于-20 ℃保存?zhèn)溆?。RNA提取后，使用RNeasy柱(Qiagen)進(jìn)行純化，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 mtDNA拷貝數(shù)檢測

以基因組DNA為模板，使用qRT-PCR法測定線粒體DNA拷貝數(shù)。通過分別檢測單拷貝基因GCG和線粒體基因ATP6和ND1來衡量核DNA和mtDNA的含量。單個細(xì)胞mtDNA拷貝數(shù)的計(jì)算：mtDNA特異基因拷貝數(shù)/GCG基因拷貝數(shù)。使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)基因擴(kuò)增的特異性引物，引物序列見表1。利用SYBR?PremixEXTaqTMII kit (TaKaRa)在CFX96TMReal-Time PCR檢測系統(tǒng)對基因進(jìn)行定量。

表1基因定量引物序列

Table1PrimersequencesofgenesusedinqRT-PCR

基因Gene引物序列(5'→3')Primersequence產(chǎn)物長度/bpAmpliconsize退火溫度/℃TmATP6F:TATTTGCCTCTTTCATTGCCC12359R:GGATCGAGATTGTGCGGTTATCOX1F:ACTACTGACAGACCGCAACC22060R:TCCAATGGACATTATGGCTCCYTBF:TCTTCGCCTTTCACTTTATC24060R:GGGTGTAGTTGTCTGGGTCTND1F:GCCACATCCTCAATCTCCAT9961R:GATTAGAGGGTAGGGTATTGGTAGTWINKLEF:GGAAGGAGGATGATGATAAGG21158R:GGTATGGAGAAGGTAAGAGAGCHSP70F:GCCCTGAATCCGCAGAATA15260R:TCCCCACGGTAGGAAACGGCG*F:GAATCAACACCATCGGTCAAAT19860R:CTCCACCCATAGAATGCCCAGTACTB*F:CACGCCATCCTGCGTCTGGA10063R:AGCACCGTGTTGGCGTAGAGRPL4*F:CAAGAGTAACTACAACCTTC12260R:GAACTCTACGATGAATCTTCTBP1*F:AACAGTTCAGTAGTTATGAGCCAGA15360R:AGATGTTCTCAAACGCTTCG

*.參考基因

*.Reference genes

1.5 基因表達(dá)水平檢測

參照Prime-ScriptTMRT reagent kit (TaKaRa)方法，進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。以cDNA為模板，使用qRT-PCR法測定基因的相對表達(dá)水平。ACTB、RPL4和TBP1作為內(nèi)參基因，特異性引物序列見表1。qRT-PCR定量檢測見1.4?；虮磉_(dá)水平采用2-△△Ct法進(jìn)行計(jì)算。

1.6 數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行One-way ANOVA、Student’st-test和Pearson相關(guān)性分析。數(shù)據(jù)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。*P<0.05表示差異顯著;**P<0.01表示差異極顯著；ns表示差異不顯著(P>0.05)。

2 結(jié) 果

2.1 豬體重增長率與環(huán)境溫度變化的關(guān)系

如圖1所示，試驗(yàn)場所1～12月的平均氣溫呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其中1月的平均氣溫最低(6.7 ℃)，8月的平均氣溫最高(30.2 ℃)。豬體重1～12月的增長率與氣溫呈階段性相關(guān)：1～4月，隨氣溫升高而升高(r=0.96，P<0.01)；4～8月，隨氣溫升高而降低(r=-0.94，P<0.01)；8～10月，隨氣溫降低而升高(r=-0.77，P<0.01)；10～12月，隨氣溫降低而降低(r=0.97，P<0.01)，說明4和10月是豬體重增長的較佳時期，即20 ℃左右的氣溫是豬體重增長的最佳溫度范圍[10]，而溫度過高或過低均會影響豬的體重增長，其中8月的豬體重增長率最低(12.24%)，反映出豬體重增長率與氣溫的相關(guān)性。上述結(jié)果表明，極端氣溫環(huán)境對豬的生長發(fā)育存在明顯的影響，為了解豬在極端氣溫條件下的代謝特點(diǎn)，而能量代謝則是反映豬對溫度適應(yīng)性的直接過程，故本試驗(yàn)進(jìn)一步研究了低溫(1月)和高溫(8月)條件下榮昌豬能量代謝相關(guān)分子的表達(dá)情況。

圖1 不同月份豬體重增長率與氣溫變化的關(guān)系Fig.1 Correlation of body weight growth rate and temperature change in different months

2.2 組織間mtDNA拷貝數(shù)隨溫度的變化

如圖2A所示，對低溫和高溫下的組織間mtDNA拷貝數(shù)進(jìn)行單因素方差分析顯示，組織間mtDNA拷貝數(shù)在低溫組(P=3.14×10-10)和高溫組(P=2.19×10-13)均差異極顯著。其中，低溫組mtDNA拷貝數(shù)相對較高的是眼肌和大腦，腎和肺相對較低；高溫組mtDNA拷貝數(shù)最高和最低的分別是眼肌和肺，說明mtDNA拷貝數(shù)在低溫組和高溫組之間展現(xiàn)出非常高的一致性(r=0.92,P<0.01; 圖2B)。

圖2 mtDNA拷貝數(shù)的變化(A)及季節(jié)間相關(guān)性分析(B)Fig.2 Characteristic of mtDNA copy number (A) and correlation analysis between seasons (B)

2.3 mtDNA拷貝數(shù)與環(huán)境溫度的關(guān)系

如圖3A所示，除了心組織(P>0.05)，其它組織的mtDNA拷貝數(shù)在低溫組顯著高于高溫組(P<0.05)，尤其是大腦、肺和腎達(dá)到了極顯著水平(P<0.01)，說明這3種組織比其他組織對環(huán)境溫度的變化更敏感。TWINKLE基因是合成初始D-loop鏈和mtDNA完整復(fù)制所必需的，在維持mtDNA拷貝數(shù)上發(fā)揮著重要的作用[11]。因此，假設(shè)mtDNA拷貝數(shù)在高溫組的降低可能受到TWINKLE基因表達(dá)的影響。如圖3B所示，所有組織TWINKLE基因表達(dá)在高溫組均顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)降低，這與假設(shè)一致，表明對TWINKLE基因表達(dá)的調(diào)節(jié)是mtDNA拷貝數(shù)適應(yīng)環(huán)境溫度變化機(jī)制中的重要一環(huán)。

圖3 mtDNA拷貝數(shù)(A)和TWINKLE基因表達(dá)(B)在高低溫度下的變化Fig.3 Characteristic of mtDNA copy number (A) and TWINKLE gene expression (B) in high and low temperature

2.4 能量代謝相關(guān)基因表達(dá)與環(huán)境溫度的關(guān)系

如圖4所示，能量代謝相關(guān)基因(ND1、COX1、ATP6和CYTB)在組織中的表達(dá)水平基本上均是低溫組顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)高于高溫組，而眼肌中ND1和COX1基因，肝和心中CYTB基因在低、高溫組間無顯著差異(P>0.05)，大腦中CYTB基因在高溫組顯著高于低溫組(P<0.05)，這可能與大腦的生理學(xué)功能相關(guān)。綜上說明豬適應(yīng)低溫環(huán)境可通過補(bǔ)償性調(diào)整特定基因轉(zhuǎn)錄水平來重塑代謝而實(shí)現(xiàn)。

圖4 能量代謝相關(guān)基因在不同環(huán)境溫度下表達(dá)水平Fig.4 Energy metabolism-related genes expression in different ambient temperature

2.5 熱應(yīng)激基因HSP70在不同環(huán)境溫度下的表達(dá)變化

對熱應(yīng)激基因HSP70的表達(dá)水平進(jìn)行了測定(圖5)，除了肺組織的HSP70基因表達(dá)水平在高溫組極顯著高于低溫組(P<0.01)，其余組織的基因HSP70表達(dá)水平在兩者之間無顯著差異(P>0.05)，說明極端環(huán)境溫度對豬除了肺組織外，對其他器官無明顯影響，豬已基本上適應(yīng)了環(huán)境溫度的變化，并產(chǎn)生了相應(yīng)的分子適應(yīng)性機(jī)制。

圖5 熱應(yīng)激基因HSP70在不同環(huán)境溫度的表達(dá)水平Fig.5 Expression of heat stress gene HSP70 in different ambient temperature

3 討 論

豬的被毛和絕熱層較少，并且缺乏汗腺功能，代謝產(chǎn)生的多余熱量不能及時有效地散出，相較于其他動物對環(huán)境溫度更敏感。研究表明，環(huán)境溫度對育肥豬增重率的影響呈曲線關(guān)系[12]。在一定溫度范圍內(nèi)，育肥豬的生長性能最佳，其產(chǎn)熱與散熱較少，僅靠物理調(diào)節(jié)就可維持體溫平衡[13-14]；低溫環(huán)境下，育肥豬為了維持體溫，不斷地消耗飼料中的能量來加快分解代謝的速度，飼料并未完全用于生長，影響其體重的增加[15]；高溫環(huán)境下，育肥豬為了減少代謝產(chǎn)熱，采食量大幅下降，導(dǎo)致其生長速度降低[16-17]。說明豬為了適應(yīng)環(huán)境溫度的變化，機(jī)體也在作出相應(yīng)的變化，而環(huán)境溫度的變化是季節(jié)性差異的主要因素之一，暗示了不同季節(jié)下豬的分子調(diào)控機(jī)制的差異，而本研究中的重慶地區(qū)季節(jié)性環(huán)境溫度變化極大，育肥豬的增重率也表現(xiàn)出明顯差異，故飼養(yǎng)在本地區(qū)的豬是研究環(huán)境溫度適應(yīng)性的理想材料。

不同組織細(xì)胞在生命活動中行使著不同的功能，具有不同的能量需求，故線粒體含量存在差異，而mtDNA拷貝數(shù)則是反映細(xì)胞線粒體含量的直接指標(biāo)[18]。本試驗(yàn)中，環(huán)境溫度變化對不同組織間mtDNA拷貝數(shù)的高低排序無影響，說明機(jī)體mtDNA拷貝數(shù)整體上不會輕易受外界影響，從而保證各組織生物學(xué)功能的實(shí)現(xiàn)，但同一組織在不同環(huán)境溫度下mtDNA拷貝數(shù)存在差異。高溫環(huán)境下，豬為了維持體熱平衡，采食量減少，代謝產(chǎn)熱減弱，能量需求減少，導(dǎo)致mtDNA 拷貝數(shù)降低；低溫環(huán)境下，豬為了維持體溫恒定，代謝產(chǎn)熱增強(qiáng)，能量需求增加，引起mtDNA拷貝數(shù)升高。長期生活在高原和平原的同一物種mtDNA拷貝數(shù)呈現(xiàn)極顯著差異[19-20]，說明機(jī)體為了適應(yīng)外界環(huán)境變化對其組織mtDNA拷貝數(shù)作出相應(yīng)的調(diào)整?；趍tDNA拷貝數(shù)對環(huán)境變化的敏感性，可考慮將mtDNA拷貝數(shù)作為反映環(huán)境變化的分子標(biāo)記。

能量代謝過程除了受mtDNA拷貝數(shù)調(diào)節(jié)外，能量代謝相關(guān)基因的表達(dá)水平同樣發(fā)揮重要作用，比如ND1、COX1、ATP6和CYTB基因。ND1基因可在呼吸鏈中直接參與電子傳遞并通過氧化磷酸化產(chǎn)生ATP而參與到能量代謝過程[21]。COX1基因能把氧化還原反應(yīng)中的能量通過OXPHOS轉(zhuǎn)變?yōu)锳TP，在細(xì)胞有氧代謝過程中起著重要作用[22]。ATP6基因參與線粒體氧化磷酸化的調(diào)控，從而合成ATP[23]。CYTB基因可通過鐵的化合價(jià)互變傳遞電子[24]。本試驗(yàn)中，低溫環(huán)境下，ND1、COX1、ATP6和CYTB基因表達(dá)水平在絕大多數(shù)組織中顯著高于高溫環(huán)境，說明豬可通過調(diào)節(jié)特異基因表達(dá)和重塑能量代謝來適應(yīng)環(huán)境溫度的變化[25]，高溫環(huán)境下呼吸受到抑制，代謝產(chǎn)熱減少，抑制能量代謝基因表達(dá)；低溫環(huán)境下能量需求較高，代謝旺盛，促進(jìn)能量代謝基因表達(dá)。

動物機(jī)體在受到高溫刺激時，組織細(xì)胞會快速產(chǎn)生一類高度保守的保護(hù)性熱休克蛋白來抵抗對細(xì)胞的損傷[26]。研究表明，HSP70是熱休克蛋白家族中最保守，含量最豐富的一種非特異性的內(nèi)源保護(hù)蛋白，具有保護(hù)細(xì)胞、減少炎癥反應(yīng)、抗細(xì)胞凋亡等功能，在高熱環(huán)境刺激下，HSP70基因的表達(dá)量會顯著升高[27-29]。本研究中，除了肺，其余組織HSP70基因的表達(dá)量在不同的季節(jié)差異不顯著，可能是本研究的試驗(yàn)豬長期生活在該地區(qū)，已適應(yīng)其自然環(huán)境溫度的變化，說明豬具有極強(qiáng)的適應(yīng)性。肺作為重要的呼吸系統(tǒng)組成部分，在高溫環(huán)境下，為了散熱控溫，其呼吸頻率升高，極易出現(xiàn)熱喘行為，引起肺損傷[30]，故HSP70基因表達(dá)量升高。

4 結(jié) 論

本研究通過檢測季節(jié)性高低溫環(huán)境下組織mtDNA拷貝數(shù)及能量代謝相關(guān)基因表達(dá)水平，初步探究了豬在分子水平對環(huán)境溫度的適應(yīng)性變化。結(jié)果提示，豬能量代謝相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄水平及mtDNA拷貝數(shù)隨著季節(jié)性環(huán)境溫度的變化而發(fā)生了顯著變化，但機(jī)體對環(huán)境的適應(yīng)性變化是一個復(fù)雜性、系統(tǒng)性的過程，因此，還需進(jìn)一步更為深入的研究來闡明具體的機(jī)制。

參考文獻(xiàn)(References)：

[1] BLOEMHOF S, MATHUR P K, KNOL E F, et al. Effect of daily environmental temperature on farrowing rate and total born in dam line sows[J].JAnimSci, 2013, 91(6): 2667-2679.

[2] VAN RENSBURG L J, SPENCER B T. The influence of environmental temperatures on farrowing rates and litter sizes in South African pig breeding units[J].OnderstepoortJVetRes, 2014, 81(1), doi: 10.4102/ojvr.v81i1.824.

[3] IIDA R, KOKETSU Y. Climatic factors associated with peripartum pig deaths during hot and humid or cold seasons[J].PrevVetMed, 2014, 115(3-4): 166-172.

[4] BODDICKER R L, SEIBERT J T, JOHNSON J S, et al. Gestational heat stress alters postnatal offspring body composition indices and metabolic parameters in pigs[J].PLoSOne, 2014, 9(11): e110859.

[5] LARSON G, LIU R R, ZHAO X B, et al. Patterns of East Asian pig domestication, migration, and turnover revealed by modern and ancient DNA[J].ProcNatlAcadSciUSA, 2010, 107(17): 7686-7691.

[6] 國家畜禽遺傳資源委員會. 中國畜禽遺傳資源志: 豬志[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2011: 2-16.

China National Commission of Animal Genetic Resources. Animal genetic resources in China: pigs[M]. Beijing: China Agricultural Press, 2011: 2-16. (in Chinese)

[7] LI M Z, TIAN S L, JIN L, et al. Genomic analyses identify distinct patterns of selection in domesticated pigs and Tibetan wild boars[J].NatGenet, 2013, 45(12): 1431-1438.

[8] AI H, FANG X, YANG B, et al. Adaptation and possible ancient interspecies introgression in pigs identified by whole-genome sequencing[J].NatGenet, 2015, 47(3): 217-225.

[9] NRC. Nutrient requirements of swine[M]. Washington, DC: National Academy Press, 1998.

[10] 李延森, 沈祥星, 李春梅. 母豬發(fā)情和產(chǎn)仔性能與環(huán)境溫度變化相關(guān)性分析[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào), 2016, 47(6): 1133-1139.

LI Y S, SHEN X X, LI C M. Correlation analysis between the ambient temperatures and reproductive performance of sows[J].ActaVeterinariaetZootechnicaSinica, 2016, 47(6): 1133-1139. (in Chinese)

[11] SHUTT T E, GRAY M W. Twinkle, the mitochondrial replicative DNA helicase, is widespread in the eukaryotic radiation and may also be the mitochondrial DNA primase in most eukaryotes[J].JMolEvol, 2006, 62(5): 588-599.

[12] 郭春華, 王康寧. 環(huán)境溫度對生長豬生產(chǎn)性能的影響[J]. 動物營養(yǎng)學(xué)報(bào), 2006, 18(4): 287-293.

GUO C H, WANG K N. Effects of environmental temperature on the performance of growing pigs[J].JournalofAnimalNutrition, 2006, 18(4): 287-293. (in Chinese)

[13] CAMERLINK I, BOLHUIS J E, DUIJVESTEIJN N, et al. Growth performance and carcass traits in pigs selected for indirect genetic effects on growth rate in two environments[J].JAnimSci, 2014, 92(6): 2612-2619.

[14] RENAUDEAU D, GOURDINE J L, ST-PIERRE N R. A meta-analysis of the effects of high ambient temperature on growth performance of growing-finishing pigs[J].JAnimSci, 2011, 89(7): 2220-2230.

[15] LE BELLEGO L, VAN MILGEN J, NOBLET J. Effect of high temperature and low-protein diets on the performance of growing-finishing pigs[J].JAnimSci, 2002, 80(3): 691-701.

[16] HEITMAN H Jr, MORRISON S R. Ambient temperature and protein level in the ration of growing pigs[J].IntJBiometeorol, 1988, 32(1): 44-46.

[17] MORALES A, GRAGEOLA F, GARCA H, et al. Performance, serum amino acid concentrations and expression of selected genes in pair-fed growing pigs exposed to high ambient temperatures[J].JAnimPhysiolAnimNutr, 2014, 98(5): 928-935.

[18] ZHANG J, MA J D, LONG K, et al. Dynamic gene expression profiles during postnatal development of porcine subcutaneous adipose[J].PeerJ, 2016, 4(2): e1768.

[19] LUO Y J, YANG X H, GAO Y Q. Mitochondrial DNA response to high altitude: A new perspective on high-altitude adaptation[J].MitochondrDNA, 2013, 24(4): 313-319.

[20] LI Y, HUANG W, YU Q, et al. Lower mitochondrial DNA content relates to high-altitude adaptation in Tibetans[J].MitochondrDNAPartA, 2016, 27(1): 753-757.

[21] SOLAINI G, SGARBI G, BARACCA A. Oxidative phosphorylation in cancer cells[J].BiochimBiophysActa, 2011, 1807(6): 534-542.

[22] GENNIS R, FERGUSON-MILLER S. Structure of cytochrome c oxidase, energy generator of aerobic life[J].Science, 1995, 269(5227): 1063-1064.

[23] TAN G F, WANG F, ZHANG X Y, et al. Different lengths, copies and expression levels of the mitochondrial atp6 gene in male sterile and fertile lines of carrot (DaucuscarotaL.)[J].MitochondrDNAPartA, 2017: 1-9.

[24] TAN A S, BATY J W, DONG L F, et al. Mitochondrial genome acquisition restores respiratory function and tumorigenic potential of cancer cells without mitochondrial DNA[J].CellMetab, 2015, 21(1): 81-94.

[25] ZHANG J, ZHOU C W, MA J D, et al. Breed, sex and anatomical location-specific gene expression profiling of the porcine skeletal muscles[J].BMCGenet, 2013, 14: 53.

[26] BAKTHISARAN R, TANGIRALA R, RAO C M. Small heat shock proteins: Role in cellular functions and pathology[J].BiochimBiophysActa, 2015, 1854(4): 291-319.

[27] NAGAYACH R, GUPTA U D, PRAKASH A. Expression profiling of HSP70 gene during different seasons in goats (Caprahircus) under sub-tropical humid climatic conditions[J].SmallRuminRes, 2017, 147: 41-47.

[28] BANERJEE D, UPADHYAY R C, CHAUDHARY U B, et al. Seasonal variation in expression pattern of genes under HSP70[J].CellStressChaperon, 2014, 19(3): 401-408.

[29] PARMAR M S, MADAN A K, HUOZHA R, et al. Heat shock protein70 (HSP70) gene expression pattern in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) during different seasons in Sahiwal cows (Bosindicus)[J].JAnimRes, 2015, 5(1): 109-113.

[30] LIU Z F, LI B L, TONG H S, et al. Pathological changes in the lung and brain of mice during heat stress and cooling treatment[J].WorldJEmergMed, 2011, 2(1): 50-53.