隋娟娟，李曉昕，吳 健，曹 興，吳 澤，何俊娜，義鳴放

(1.阜陽(yáng)師范學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院，安徽 阜陽(yáng) 236037；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 觀賞園藝與園林系，花卉發(fā)育與品質(zhì)調(diào)控北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193；3.聊城大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，山東 聊城 252059)

顯花植物從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變?yōu)樯成L(zhǎng)是生活史中的一個(gè)重要?dú)v程，花是顯花植物重要的繁殖器官，花的形成和發(fā)育受到多個(gè)基因的調(diào)控。Coen等[1]研究提出了花器官發(fā)育的ABC模型，將調(diào)控花發(fā)育的基因分為A、B、C這3類，在花萼、花瓣、雄蕊及雌蕊的發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮著不同的作用。隨著研究的進(jìn)一步深入，人們又發(fā)現(xiàn)了調(diào)控胚珠發(fā)育的D類基因以及對(duì)各輪花器官發(fā)育均有調(diào)控作用的E類基因，因此，ABC模型進(jìn)一步擴(kuò)展為ABCDE模型[2]。

MADS-box家族基因廣泛分布于動(dòng)物、植物及真菌中，其編碼的蛋白是一類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，能調(diào)節(jié)其他基因的表達(dá)，對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要的調(diào)控作用[3]。植物的開花過(guò)程精密而復(fù)雜，受到很多基因的調(diào)控，其中，MADS-box基因在植物的花形態(tài)建成方面發(fā)揮了重要作用。MADS-box基因是一個(gè)龐大的基因家族，在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中分化為TypeⅠ和TypeⅡ兩大類，其中，TypeⅡ基因含有4個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域，分別為MADS(M)、Intervening(I)、Keratin-like(K)和Carboxyl-terminal(C)，因此被稱為MIKC基因；而TypeⅠ基因缺少Keratin-like(K)結(jié)構(gòu)域，目前發(fā)現(xiàn)的調(diào)控植物花發(fā)育的相關(guān)基因大部分屬于MIKC亞家族基因[4-6]。

AGL6(AGAMOUSlike6)亞家族基因是一個(gè)古老的遺傳冗余基因，屬于MIKC家族的AP1/AGL9組，該組由AP1、AGL6/AGL13以及SEP這3個(gè)分枝組成，AGL6與SEP互為姊妹系，在300萬(wàn)年以前就已經(jīng)出現(xiàn)在被子植物與裸子植物的共同祖先中[3，5，7-8]。目前，已經(jīng)從多種植物中克隆得到AGL6的同源基因，如裸子植物輻射松(Pinusradiata)[9]、挪威云杉(Piceaabies)[10]、柳杉(Cryptomeriajaponica)[11]，被子植物玉米(Zeamays)[12]、水稻(Oryzasativa)[13-14]、擬南芥(Arabidopsisthaliana)[15]、矮牽牛(Petuniahybrida)[16]等。前人研究表明，AGL6基因與花器官發(fā)育密切相關(guān)，主要表現(xiàn)在調(diào)節(jié)開花時(shí)間、生殖分生組織及花器官的決定性方面[17]。在擬南芥中將AGL6基因過(guò)表達(dá)或由T-DNA插入使其表達(dá)增強(qiáng)后，會(huì)導(dǎo)致擬南芥早花現(xiàn)象[18-19]；水稻中的AGL6-like基因OsMADS6突變后，水稻會(huì)喪失花分生組織屬性的決定性，導(dǎo)致小穗的分生組織形成額外的小穗[14，20]；玉米中的AGL6-like基因ZAG3突變后，雌花和雄花的表型會(huì)發(fā)生多樣化[21]；樊金會(huì)等[22]研究表明，風(fēng)信子中的HoAGL6能夠通過(guò)促進(jìn)SOC1、LFY基因的表達(dá)調(diào)節(jié)開花時(shí)間，通過(guò)激活A(yù)G、SEP1基因參與花器官發(fā)育，在擬南芥中異位過(guò)表達(dá)后引起開花提前、植株矮小及器官之間發(fā)生同源轉(zhuǎn)化的現(xiàn)象；Melzer等[23-24]研究認(rèn)為，AGL6/SEP1/SQUA-like轉(zhuǎn)錄因子家族是花發(fā)育調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的中心，其通過(guò)相互作用將分生組織和花器官的決定性聯(lián)合起來(lái)，最終發(fā)育形成有正常功能的花器官。

百合(Liliumspp.)屬于單子葉植物，是百合科百合屬觀賞花卉，單瓣百合花器官主要由3枚瓣化的萼片、3枚花瓣、6枚雄蕊及1枚雌蕊組成?；ǖ陌l(fā)育是影響百合花品質(zhì)的生物學(xué)基礎(chǔ)，目前，市場(chǎng)上百合多以單瓣品種為主，復(fù)瓣和重瓣百合品種繁育技術(shù)尚不成熟，品種較少，市場(chǎng)認(rèn)知度不高，因此，開展百合花瓣發(fā)育相關(guān)基因的研究，對(duì)通過(guò)生物技術(shù)改善百合觀賞瓣性，提高百合品種多樣性與穩(wěn)定性，具有重要的意義。本研究以雌雄蕊瓣化的重瓣百合比羅尼卡為試驗(yàn)材料，從中克隆了AGL6基因，并對(duì)其蛋白特性和表達(dá)特性進(jìn)行了分析，以期探討出AGL6基因在百合重瓣花中的表達(dá)模式，為進(jìn)一步揭示E類基因AGL6在花發(fā)育方面的作用機(jī)制以及通過(guò)基因工程改善百合的觀賞瓣性提供理論參考。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料

以重瓣百合比羅尼卡(Belonica)為試驗(yàn)材料，種球購(gòu)自荷蘭，規(guī)格為18～20 cm，種植于北京市盛斯通生態(tài)科技有限公司南口試驗(yàn)基地，常規(guī)栽培管理。比羅尼卡的花器官由外至內(nèi)共由7輪花瓣組成，雌雄蕊全部瓣化，其中最內(nèi)側(cè)的第7輪花瓣上偶見(jiàn)殘存的花藥(圖1)。

A.重瓣花；B.1～7輪花瓣。A.The double flower；B.1-7 wheel petals.

試驗(yàn)所用的RNA提取試劑盒購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司；DNA片段回收試劑盒、質(zhì)粒提取試劑盒購(gòu)自北京百泰克生物技術(shù)有限公司；pMD18-T載體、SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)熒光定量試劑盒以及試驗(yàn)中所用的各種常規(guī)酶類均購(gòu)自TaKaRa公司；卡那霉素(Kan)、氨芐青霉素(Amp)購(gòu)自Sigma公司；大腸桿菌感受態(tài)DH5α購(gòu)自北京全式金生物技術(shù)有限公司；擴(kuò)增引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成；DNA測(cè)序由北京華大科技有限公司完成。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 總RNA提取及AGL6基因的克隆 取比羅尼卡盛花期的花瓣，用液氮速凍并保存于-80 ℃的超低溫冰箱中備用，按照RNA提取試劑盒中的說(shuō)明書提取RNA，并用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)完整性。利用Reverse Transcriptase M-MLV 進(jìn)行cDNA第1鏈的合成，并以其為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

根據(jù)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)觀賞植物栽培生理與生物技術(shù)實(shí)驗(yàn)室前期從百合中克隆得到的AGL6基因ORF(開放閱讀框)序列(未發(fā)表)設(shè)計(jì)1對(duì)引物(F1：5′-ATGGGTAGAGGAAGAGTTGAGTTGAAGAG-3′；R1：5′-CTACCATCCCATACTCAAAGAACCCAAACC-3′)，以重瓣百合比羅尼卡花瓣的 cDNA為模板，使用高保真PrimeSTAR HS DNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)，PCR反應(yīng)條件：98 ℃ 5 min；98 ℃ 10 s，63 ℃ 15 s，72 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 延伸10 min。PCR產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)后切膠回收，連接到pMD18-T載體并轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5α感受態(tài)中，Amp抗性培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)后，挑取單克隆進(jìn)行菌落PCR檢測(cè)，將含有目的基因片段的陽(yáng)性克隆送北京華大科技有限公司測(cè)序，獲得比羅尼卡AGL6基因的ORF全長(zhǎng)序列。

1.2.2 基因序列分析 將獲得的基因ORF序列使用NCBI(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)在線工具進(jìn)行序列分析；使用ProtParam(http：//www.web.expasy.org/protparam)在線工具預(yù)測(cè)分析百合AGL6蛋白的基本性質(zhì)；使用NCBI(http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/)的Blast功能搜索同源基因并進(jìn)行蛋白的相似性分析；使用DNAMAN 5.0軟件對(duì)AGL6蛋白進(jìn)行多重比對(duì)分析；使用MEGA 5.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹的構(gòu)建。

1.2.3 亞細(xì)胞定位分析 結(jié)合pCAMBIA1300載體特點(diǎn)，使用DNAMAN 5.0軟件對(duì)百合AGL6基因的ORF序列進(jìn)行酶切位點(diǎn)分析，選用SalⅠ和SpeⅠ作為構(gòu)建融合表達(dá)載體的酶切位點(diǎn)，設(shè)計(jì)特異引物(F2：5′-GTCGACATGGGTAGAGGAAGAGTTG

AG-3′，R2：5′-ACTAGTCTACCATCCCATACTCAAAG-3′)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。將pCAMBIA1300空載質(zhì)粒和PCR擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行雙酶切，之后將酶切產(chǎn)物純化并用T4連接酶16 ℃連接過(guò)夜，獲得重組表達(dá)載體。通過(guò)基因槍轟擊法將構(gòu)建好的重組表達(dá)載體轟擊到經(jīng)過(guò)MS培養(yǎng)基預(yù)培養(yǎng)24 h的洋蔥(Alliumcepa)表皮細(xì)胞中，24 h后在激光共聚焦顯微鏡(Nikon Eclipse TE2000-E)下進(jìn)行觀察及拍照，以空載pCAMBIA1300-GFP為對(duì)照。

1.2.4 基因表達(dá)分析 分別取比羅尼卡盛花期的莖、葉、整朵花瓣及1～7輪不同花瓣用液氮速凍并保存于-80 ℃的超低溫冰箱中備用，按照說(shuō)明書提取RNA，電泳檢測(cè)完整性，并進(jìn)行cDNA第1鏈的合成(方法同1.2.1)。用ABI Step One Plus System PCR儀，以上述材料反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，將百合AGL6基因ORF序列結(jié)合3′端UTR序列設(shè)計(jì)定量特異引物(F3：5′-GGTTCTACTGAAGAAGCTATGCCA

T-3′；R3：5′-CGATCCAATCCGAAATAAAGTTCG-3′)，進(jìn)行重瓣百合AGL6基因的實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析。以18S rRNA為內(nèi)參(18SF：5′-AGTTGGTGGAGCGA

TTTGTCT-3′，18SR：5′-CCTGTTATTGCCTCAAACTTC

C-3′)進(jìn)行百合AGL6基因的相對(duì)表達(dá)水平檢測(cè)。PCR反應(yīng)體系為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 3 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 20 s，40個(gè)循環(huán)；95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，95 ℃ 15 s，1個(gè)循環(huán)。每個(gè)樣品設(shè)3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，采用2-ΔΔCT法對(duì)基因相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 百合LiAGL6基因克隆

將重瓣百合花瓣提取的RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，并以其為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，獲得比羅尼卡重瓣百合基因ORF序列744 bp，共編碼247個(gè)氨基酸(圖2)。Blast的結(jié)果顯示，百合AGL6基因與其他物種的AGL6基因有較高的同源性，因此，將其命名為L(zhǎng)iAGL6基因。

2.2 百合LiAGL6蛋白特性與同源比對(duì)分析

ProtParam在線工具預(yù)測(cè)百合LiAGL6蛋白的分子式為C1216H1956N364O384S15，分子量為28.3 ku，半衰期在大腸桿菌(Escherichiacoli)中大于10 h，在酵母菌(Saccharomycescerevisiae)中大于20 h，親水性平均系數(shù)(GRAVY)為-0.748。對(duì)氨基酸組成成分進(jìn)行分析，結(jié)果表明，LiAGL6蛋白肽鏈負(fù)電荷殘基(天冬氨酸Asp + 谷氨酸Glu)為30，正電荷殘基(精氨酸Arg + 賴氨酸Lys)為32，預(yù)測(cè)等電點(diǎn)(PI)為8.23(>7)，推測(cè)LiAGL6蛋白為堿性蛋白。將LiAGL6與擬南芥、番紅花(Crocussativus)、春蘭(Cymbidiumgoeringii)、油棕(Elaeisguineensis)、風(fēng)信子(Hyacinthusorientalis)及海棗(Phoenixdactylifera)的AGL6氨基酸序列進(jìn)行同源比對(duì)，結(jié)果表明，百合LiAGL6蛋白與其他物種的AGL6蛋白一樣，在N端1-60個(gè)氨基酸殘基內(nèi)含有一個(gè)典型的MADS-box結(jié)構(gòu)域，在中間90-155氨基酸殘基內(nèi)含有一個(gè)K-domain區(qū)，在靠近C端部分含有2個(gè)特有的AGL6-Ⅰmotif和AGL6-Ⅱmotif基序(圖3)。

圖2 百合LiAGL6基因開放閱讀框及編碼的氨基酸序列Fig.2 The open reading frame of LiAGL6 and the amino acid sequences encoded by LiAGL6

2.3 百合LiAGL6系統(tǒng)進(jìn)化樹分析

為確定百合LiAGL6基因的系統(tǒng)發(fā)育位置，對(duì)其進(jìn)行了系統(tǒng)進(jìn)化樹分析，結(jié)果顯示，AP1/AGL9亞家族有3個(gè)分枝，分別為SEP分枝、AP1分枝及AGL6分枝，其中AGL6分枝與SEP分枝互為姊妹分枝。AGL6分枝可分為3個(gè)類群，分別為裸子植物類群、單子葉植物類群及雙子葉植物類群，百合LiAGL6歸屬于AP1/AGL9亞家族AGL6分枝的單子葉植物類群，與風(fēng)信子的親緣關(guān)系最近(圖4)，Blast的結(jié)果顯示，其相似度達(dá)78%，進(jìn)一步說(shuō)明百合LiAGL6基因?yàn)锳GL6的同源基因。

LiAGL6. 百合AGL6；AtAGL6. 擬南芥AGL6(NP_182089.1)；CsAGL6. 番紅花AGL6(ABK35281.1)；CgAGL6. 春蘭AGL6(ADI58464.1)；EgAGL6. 油棕AGL6(XP_010934013.1)；HoAGL6. 風(fēng)信子AGL6(AAT88088.1)；PdAGL6. 海棗AGL6(XP_008797646.1)。

LiAGL6. Peptide sequences of AGL6s from Lily；AtAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromArabidopsisthaliana(NP_182089. 1)；CsAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromCrocussativus(ABK35281.1)；CgAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromCymbidiumgoeringii(ADI58464.1)；EgAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromElaeisguineensis(XP_010934013.1)；HoAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromHyacinthusorientalis(AAT88088.1)；PdAGL6. Peptide sequences of AGL6s fromPhoenixdactylifera(XP_008797646.1).

圖3百合LiAGL6與其他植物AGL6氨基酸序列同源比對(duì)
Fig.3HomologyalignmentoftheaminoacidsequencesofLiAGL6andAGL6fromotherplants

▲. 百合LiAGL6?！? Lily LiAGL6.

2.4 百合LiAGL6基因亞細(xì)胞定位

利用基因槍將構(gòu)建好的重組表達(dá)載體pCAMBIA1300-GFP-LiAGL6轟擊到經(jīng)過(guò)24 h預(yù)培養(yǎng)的洋蔥表皮細(xì)胞中，24 h暗培養(yǎng)后放置于激光共聚焦顯微鏡下觀察，結(jié)果表明，空載對(duì)照pCAMBIA1300-GFP的綠色熒光分布在整個(gè)洋蔥表皮細(xì)胞中，包括細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核及質(zhì)體中，而重組表達(dá)載體pCAMBIA1300-GFP-LiAGL6的綠色熒光則主要分布在細(xì)胞核中(圖5)，說(shuō)明百合LiAGL6主要在核內(nèi)發(fā)揮作用，具備轉(zhuǎn)錄因子的基本特征。

2.5 百合LiAGL6基因的表達(dá)分析

為了確定LiAGL6基因在百合地上部位不同組織及不同輪數(shù)花瓣中的表達(dá)差異，分別對(duì)重瓣百合的花、莖、葉及1～7輪花瓣中的LiAGL6基因進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量表達(dá)分析，結(jié)果表明，在不同的地上組織部位中，LiAGL6基因主要在花中表達(dá)，在莖和葉中幾乎檢測(cè)不到表達(dá)，差異達(dá)顯著水平(P<0.05)(圖6-A)；在第1輪及3～7輪花瓣中能檢測(cè)到LiAGL6基因的表達(dá)，第2輪花瓣中幾乎檢測(cè)不到表達(dá)，其中，在第7輪花瓣中的表達(dá)量顯著高于1～6輪花瓣中的表達(dá)量(P<0.05)，其次依次為第6輪和第3輪花瓣，第1，4，5三輪花瓣中的表達(dá)量基本一致，差異不顯著(圖6-B)。

圖5 LiAGL6在洋蔥表皮中的亞細(xì)胞定位Fig.5 Subcellular localization of LiAGL6 in onion epidermal cells

A.LiAGL6在花、莖、葉的表達(dá)；B.LiAGL6在不同花瓣中的表達(dá)；不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；相同小寫字母表示差異不顯著。

A.The expression ofLiAGL6 in flower，stem and leaf；B.The expression ofLiAGL6 in different petals；The different small-letter means significant difference (P<0.05); The same small-letter means no significant difference.

圖6重瓣百合不同組織及不同花瓣中LiAGL6基因的表達(dá)分析
Fig.6LiAGL6expressionindifferentplantorgansanddifferentpetalsindoublelily

3 討論與結(jié)論

MADS-box基因家族成員眾多，在擬南芥基因組中，即有107個(gè)成員，該家族基因參與了植物多方面的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程，特別是在生殖生長(zhǎng)階段發(fā)揮了重要的調(diào)控作用[25-26]。早在20世紀(jì)90年代，Coen等[1]即提出了調(diào)控花發(fā)育的ABC模型來(lái)解釋植物花發(fā)育的分子機(jī)理，之后隨著擬南芥中D類和E類基因的發(fā)現(xiàn)，ABC模型逐漸完善為ABCDE模型[2]。本研究以雌雄蕊均發(fā)生瓣化的重瓣百合比羅尼卡為試驗(yàn)材料，從中克隆了1個(gè)E類基因AGL6，將其命名為L(zhǎng)iAGL6。同源比對(duì)結(jié)果顯示，LiAGL6與其他物種的AGL6具有很高的同源性，除了具有典型的MADS-box結(jié)構(gòu)域、K-domain區(qū)外，在靠近C端部分還具有2個(gè)特有的AGL6-Ⅰmotif和AGL6-Ⅱ motif的結(jié)構(gòu)特征。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析的結(jié)果表明，LiAGL6歸屬于AP1/AGL9亞家族AGL6分枝的單子葉植物群，亞細(xì)胞定位的結(jié)果也顯示該基因編碼的蛋白主要在核內(nèi)發(fā)揮作用，符合轉(zhuǎn)錄因子的基本特征，這說(shuō)明本試驗(yàn)克隆得到的LiAGL6基因應(yīng)該為AGL6的同源基因。

常規(guī)單瓣百合的花器官具有6枚花被片、6枚雄蕊和1枚雌蕊，而重瓣百合比羅尼卡缺乏正常的雌雄蕊，僅在第7輪花瓣上偶見(jiàn)殘存的花藥。對(duì)重瓣百合地上組織部位進(jìn)行LiAGL6基因的表達(dá)檢測(cè)，結(jié)果表明，LiAGL6基因在花中的表達(dá)量最高，在莖和葉中幾乎檢測(cè)不到表達(dá)，該結(jié)果與AGL6基因主要在單子葉植物花中表達(dá)的模式一致[27]，LiAGL6基因可能與其他植物中的AGL6基因功能類似，在花器官的形成和發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮了重要功能。但前人研究表明，在核心真雙子葉植物中AGL6基因不僅在花器官中有表達(dá)，在營(yíng)養(yǎng)器官中也有表達(dá)，如葡萄中的VvAGL6a基因主要在其卷須中表達(dá)，VvMADS3基因則在花和卷須中都有表達(dá)，說(shuō)明AGL6基因在百合不同組織部位中的表達(dá)模式與核心真雙子葉植物存在差異[27]。在重瓣百合1～7輪花瓣中LiAGL6基因在第7輪中的表達(dá)量最高，其次依次為第6輪和第3輪花瓣，但在第2輪花瓣中幾乎檢測(cè)不到表達(dá)。盡管在絕大多數(shù)植物中AGL6基因主要表達(dá)部位為花，但不同植物花器官中的表達(dá)模式仍存在某些不同，如在矮牽牛中AGL6基因在4輪花器官中均有表達(dá)[28]，在單子葉植物水稻中AGL6類基因OsMADS6在雄蕊中不表達(dá)，但另一個(gè)AGL6類基因OsMADS17則在雄蕊中有表達(dá)[20]。在觀賞植物春蘭中也含有CgAGL6-1和CgAGL6-3 2個(gè)AGL6基因，其存在部分功能冗余，CgAGL6-1在正?；ǖ妮嗥?、側(cè)瓣、唇瓣及蕊柱中有表達(dá)，但CgAGL6-3在側(cè)瓣中幾乎不表達(dá)[29]。由此推測(cè)，可能在比羅尼卡原種單瓣百合的雄蕊中LiAGL6基因也不表達(dá)或表達(dá)量極低，在百合雄蕊群發(fā)生瓣化形成3～6輪花瓣的過(guò)程中LiAGL6基因發(fā)揮了調(diào)控功能，而在第7輪花瓣中LiAGL6基因表達(dá)量突然增加，推測(cè)第7輪花瓣有可能是雌蕊發(fā)生瓣化而來(lái)，LiAGL6基因通過(guò)增加表達(dá)量發(fā)揮了調(diào)控功能。重瓣百合中的第2輪花瓣中幾乎檢測(cè)不到LiAGL6基因的表達(dá)，推測(cè)LiAGL6在百合中可能也屬于一個(gè)功能冗余基因，極有可能存在另外的AGL6同源基因在第2輪花瓣的形成過(guò)程中發(fā)揮作用，需要進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

本研究以重瓣百合比羅尼卡為試驗(yàn)材料，從中分離得到1個(gè)E類花發(fā)育相關(guān)基因，命名為L(zhǎng)iAGL6。 試驗(yàn)結(jié)果表明，該基因含有744 bp的核苷酸，編碼247個(gè)氨基酸，具有典型的MADS-box結(jié)構(gòu)域、K-box區(qū)及2個(gè)AGL6基序，屬于AP1/AGL9亞家族AGL6分枝的單子葉植物類群；亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，LiAGL6蛋白主要在核內(nèi)發(fā)揮作用；熒光定量PCR技術(shù)分析表明，LiAGL6基因主要在花中表達(dá)，其中，在第7輪花瓣中的表達(dá)量最高，推測(cè)LiAGL6可能在重瓣百合雌雄蕊瓣化過(guò)程中發(fā)揮了一定的推動(dòng)作用。

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