呂云瑤 ，王興娜 ，張夢蕓 ，夏粉芳 ，鄭嶺楠 ，楊春艷 ，周春陽 ，張建武 △

1川北醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)院，四川 南充 637007；2川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院/藥物研究所

洋蔥(Allium cepaL.)，別名玉蔥、圓蔥、蔥頭，為百合科(Liliaceae)蔥屬(Allium)多年生草本植物[1]。洋蔥中主要活性成分有含硫化合物、甾體皂甙、類黃酮化合物以及多糖等，具有降血壓、降血糖、降血脂、利尿、抗衰老、抗癌、殺菌、祛痰、健胃潤腸等多種藥理及保健功能[2-5]。本研究通過離體蟾蜍心臟灌流實(shí)驗(yàn)，觀察洋蔥醇提物對蟾蜍心率和心肌張力的影響，初步探討其機(jī)制，為洋蔥的進(jìn)一步開發(fā)利用提供合理的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 蟾蜍60只，雌、雄兼?zhèn)?，體質(zhì)量110～130 g，精神狀態(tài)良好，購自川北醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，實(shí)驗(yàn)動物許可證號：SYXK(川)2013-076。

1.2 藥品及藥材 洋蔥采集于甘肅省天水市，由川北醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥用植物學(xué)楊蘭老師鑒定為洋蔥；任氏液由川北醫(yī)學(xué)院機(jī)能實(shí)驗(yàn)中心配制。

1.3 儀器 蛙類通用實(shí)驗(yàn)器械，肌張力換能器(四川成都泰盟公司)；電子天平(上海醫(yī)用激光儀器廠)；BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(四川成都泰盟公司)；加樣槍(芬蘭biohit)。

1.4 方法

1.4.1 洋蔥醇提物的制備 新鮮洋蔥2 kg，鼓風(fēng)干燥箱45℃干燥，粉碎。稱取100.90 g洋蔥粉，70%乙醇回流提取3次(料液比為1∶10)，得浸膏76.55 g。取浸膏75.72 g，溫水混懸。先用二氯甲烷萃取，40℃減壓濃縮得二氯甲烷部位1.43 g；然后采用水飽和的正丁醇進(jìn)行萃取，減壓濃縮后于65℃水浴蒸干，得正丁醇部位6.26 g。稱取正丁醇部位244.6 mg，加仁氏液30 mL超聲溶解后4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 離體蟾蜍標(biāo)本制備[6-7]采用斯氏法蛙心插管，取一只蟾蜍，破壞腦和脊髓，背位固定于蛙板上暴露心臟，在左右主動脈下穿一線，將心臟翻至頭端，在背面結(jié)扎前后腔靜脈，在左主動脈下穿一線，距動脈圓錐2～3 mm處結(jié)扎，再從左右主動脈下方穿一線打活結(jié)留作固定插管用。持眼科剪在動脈圓錐前端處向心臟剪一斜口，將盛有任氏液的蛙心插管由此口插入心室腔內(nèi)，連同近旁血管一起結(jié)扎固定，將心臟離體，任氏液反復(fù)沖洗心室內(nèi)余血，至插管內(nèi)灌流液完全澄清無色，然后保持插管內(nèi)的灌流液1 mL，劃線作標(biāo)記。

1.4.3 離體蟾蜍心活動記錄 蟾蜍心經(jīng)蛙心夾和絲線與張力換能器相連，通過BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄心搏曲線。

1.5 分組及給藥方法

1.5.1 空白對照組 先在蟾蜍心套管中加入1 mL任氏液和100 μL任氏液，觀察離體蟾蜍心在正常情況下的自主收縮活動2分鐘，描記一段曲線。以此作為空白對照組。

1.5.2 洋蔥醇提物不同劑量組 加入1 mL任氏液和100 μL的洋蔥醇提物使其終濃度為0.8、1.6、2.4 mg/mL，描記5分鐘，以此作為洋蔥醇提物組。

1.5.3 維拉帕米組 加入1 mL任氏液和100 μL維拉帕米使其終濃度為0.000 5 mg/mL，描記5分鐘，以此作為陽性對照組。

測定每次加藥后5分鐘內(nèi)蟾蜍心肌的收縮力及收縮頻率的變化情況，以此分析不同濃度洋蔥醇提物對正常離體蟾蜍心臟的影響，每組10只。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟心率的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度洋蔥醇提物后離體蟾蜍心率變化不大或略減慢，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，加入0.0005 mg/mL維拉帕米5分鐘后心率明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表 1。

表1 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟心率的影響(±s)

表1 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟心率的影響(±s)

注：＊表示與給藥前空白對照組比較，P＜0.05

組別 只數(shù) 濃度/(m g·m L-1) 心率/(次·m i n-1)給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對照組 1 0 - 3 4.4±4.5 3 4.4±4.5 3 4.4±4.5 0.8 3 0.4±3.8 2 9.6±3.7 2 9.3±3.7洋蔥醇提物組 1 0 1.6 3 1.4±3.4 3 1.1±4.1 3 0.8±4.3 2.4 3 2.8±4.5 3 1.2±4.0 3 0.3±3.6維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 3 5.5±4.1 3 3.0±4.6 3 0.9±4.8＊

2.2 不同濃度洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度的洋蔥醇提物后蟾蜍心肌平均收縮力逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，然后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，蟾蜍心臟收縮力呈現(xiàn)出典型的先下降后升高的表現(xiàn)，見表2、圖1。

2.3 不同濃度洋蔥醇提物對離體蛙心心力峰峰值的影響 加入0.8、1.6、2.4 mg/mL洋蔥醇提物后，離體蛙心力峰峰值逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，然后心力峰峰值逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，蛙心收縮力呈現(xiàn)出典型的先下降后升高的表現(xiàn)，見表3、圖1。

表2 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響(±s)

表2 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟平均收縮力的影響(±s)

注：與給藥前空白對照組比較，＊表示P＜0.05，＊＊表示P＜0.01

組別 只數(shù) 濃度/(m g·m L-1) 平均收縮力/g給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對照組 1 0 - 2.8 7±0.3 1 2.8 3±0.2 1 2.8 9±0.2 2 1 0 0.8 3.6 1±0.2 5 3.3 1±0.2 6＊ 3.8 6±0.2 2＊洋蔥醇提物組 1 0 1.6 3.1 1±0.3 3 2.7 4±0.2 5＊＊ 3.6 7±0.3 9＊＊1 0 2.4 2.9 9±0.5 2 2.1 9±0.4 6＊＊ 3.9 8±0.8 1＊＊維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 3.0 2±0.2 7 2.6 5±0.3 6＊＊ 2.2 8±0.3 1＊＊

表3 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟心力峰峰值的影響(±s)

表3 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心臟心力峰峰值的影響(±s)

注：與給藥前空白對照組比較，＊表示P＜0.05，＊＊表示P＜0.01

組別 只數(shù) 質(zhì)量濃度/(m g·m L-1) 心力峰峰值/g給藥前 給藥后1 m i n 給藥后5 m i n空白對照組 1 0 - 3.8 8±0.4 1 3.5 3±0.4 9 3.5 9±0.4 2 1 0 0.8 3.9 1±0.3 7 3.1 2±0.1 9＊＊ 4.9 1±0.6 2＊＊洋蔥醇提物組 1 0 1.6 4.2 3±0.3 5 3.3 1±0.2 5＊＊ 4.7 7±0.2 5＊＊1 0 2.4 4.0 8±0.3 3 2.5 2±0.4 5＊＊ 4.9 6±0.5 7＊＊維拉帕米組 1 0 0.0 0 0 5 4.3 5±0.2 9 3.2 7±0.4 6＊＊ 2.3 5±0.4 1＊＊

圖1 洋蔥醇提物對離體蟾蜍心肌收縮力和心率的影響

3 討論

本研究中加入0.8、1.6、2.4 mg/mL濃度洋蔥醇提物后，離體蟾蜍心臟心率變化不大或略減慢。然而無論是離體蟾蜍心臟的平均收縮力還是心力峰峰值均先逐漸下降，在1分鐘左右達(dá)到谷值，然后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，蟾蜍心臟收縮力呈現(xiàn)典型的先下降后升高的表現(xiàn)。

本研究檢測各濃度洋蔥醇提物溶液的pH值為5～6，呈酸性，而酸性溶液可降低肌肉收縮的效果，可能是心肌收縮力先下降的原因之一，這與黃鳳玲等[8]報(bào)道的灌流大劑量洋蔥液后心臟中的環(huán)境呈酸性，從而迅速抑制心肌收縮的結(jié)果基本一致。但是本研究發(fā)現(xiàn)隨著洋蔥醇提物濃度的增高，心臟抑制作用明顯增強(qiáng)，并有一定濃度依賴性，這可能是洋蔥中含有的抑制心臟功能的類黃酮化合物槲皮素作用的結(jié)果，與楊春嵐等[9]報(bào)道槲皮素可以使離體蟾蜍心臟的心肌收縮力明顯下降大致相同。

現(xiàn)代研究[10]表明洋蔥中除了含有類黃酮化合物外，同時(shí)每100 g洋蔥中含有鈣40 mg，硒236 mg等。而鈣離子是興奮收縮偶聯(lián)的關(guān)鍵物質(zhì)，心肌細(xì)胞外鈣離子濃度增高，鈣離子內(nèi)流增多可使心肌收縮力增強(qiáng)[11]，硒具有較強(qiáng)的抗氧化、清除自由基和逆轉(zhuǎn)冠心病及心衰的作用[12]，同時(shí)可以增強(qiáng)心肌收縮力，化偉[13]的研究顯示硒有增強(qiáng)心肌收縮力的作用，李貴明等[14]的研究也提示適量的硒能增加心肌收縮力。本研究結(jié)果表明，離體蟾蜍心肌收縮力迅速下降后逐漸上升，在5分鐘左右達(dá)到峰值，因此推斷其上升作用可能與洋蔥中含有鈣和硒元素有關(guān)。

但是，洋蔥中含有的其他化合物也可能引起心肌收縮力的降低或者增高，具體原因需對洋蔥醇提物純化后進(jìn)一步研究。

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