郭海寧，陳開豐＊，蘇紅衛(wèi)，劉三鳳，何幼軍，丁君輝，毛輝榮*

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045；2.江西天韻農(nóng)業(yè)開發(fā)股份有限公司，江西 南昌 330016；3.江西省畜牧技術(shù)推廣站，江西 南昌 330044)

山麻鴨是我國優(yōu)良的小型蛋鴨品種，具有體型小、早熟、產(chǎn)蛋多、蛋質(zhì)量適中、適應(yīng)性強和飼料報酬高等特點。由于養(yǎng)殖資源的日益短缺和新《環(huán)境保護法》的實施，傳統(tǒng)的散養(yǎng)模式正逐步向集約化籠養(yǎng)模式轉(zhuǎn)變，因此蛋鴨的繁殖方式也由自然交配轉(zhuǎn)為人工授精。為解決籠養(yǎng)蛋鴨的繁殖瓶頸，減少種公鴨的飼養(yǎng)量和提高其利用率，加快配套系種鴨選育、育種工作，研究籠養(yǎng)蛋鴨的人工授精技術(shù)顯得更加重要、緊迫[1]。我國的家禽人工授精技術(shù)研究開始于20世紀30年代，目前雞的人工授精技術(shù)相對成熟并得到廣泛應(yīng)用，火雞、鵝、番鴨等也獲得了較大的進展，人工授精技術(shù)對籠養(yǎng)模式的推廣、加速繁育與育種工作起到了極大的推動作用[2-4]。但是目前對家鴨人工授精的研究卻甚少，缺乏較為系統(tǒng)、詳細的研究及大規(guī)模的推廣。早期的鴨人工授精研究主要集中在采精和輸精方法之上[5-6]，而對公鴨的精液品質(zhì)和采精頻率、稀釋液種類、稀釋倍數(shù)、母鴨的輸精時間、部位(深度)、輸精量、輸精頻率等的研究報道相對較少，在技術(shù)相對成熟的半番鴨生產(chǎn)中因使用的母本是家鴨，因而對家鴨的人工授精具有一定的參考價值[7-14]。山麻鴨是我國知名的小型蛋用型地方鴨品種，本研究選擇該鴨種作為研究素材，開展種公鴨的采精訓(xùn)練和采精頻率觀察試驗，同時對其精液品質(zhì)進行鑒定；隨后對山麻鴨人工授精過程中涉及的包括輸精量、精液稀釋及輸精間隔等參數(shù)進行探索和優(yōu)化試驗，試驗結(jié)果將為籠養(yǎng)山麻鴨的人工授精技術(shù)標準化建立和推廣提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料及試驗地點

試驗選用90日齡山麻鴨公鴨60羽，母鴨500羽雙籠飼養(yǎng)。其中雄性種鴨的選擇依據(jù)是：繁殖性能方面表現(xiàn)為具有發(fā)達的性指羽、性欲強、生殖器官發(fā)育正常；外貌部分呈現(xiàn)出前胸寬且飽滿、頭頸粗壯等。試驗器具和試劑包括玻璃集精杯、自制采精按摩器、普通顯微鏡、電熱水浴鍋、單道式移液槍、細胞計數(shù)板及用于精液稀釋的生理鹽水等。在試驗期間保持適宜的飼養(yǎng)環(huán)境，飼料統(tǒng)一采用贛達股份有限公司的全價配合顆粒飼料，試驗全程在江西天韻種鴨場進行。

1.2 精液采集及人工授精

試驗所選公鴨飼養(yǎng)至150日齡，采用傳統(tǒng)的“背部按摩法”開始進行人工采精調(diào)教訓(xùn)練，人工采精、授精所需器械必須做到清潔、無菌和干燥，采精訓(xùn)練時間為3周，頻率為每周2～3次。為避免人工采精造成公鴨生殖器受損，采精后必須保證其生殖器順利回縮到腹腔。為防止采精過程公鴨排出糞、尿污染精液，每次采精前停料停水至少2 h，并將集精杯置于40 ℃水浴鍋內(nèi)。采得的精液在25 ℃左右環(huán)境中遮光保存，或手握裝有精液的集精杯，試驗完成后用具均需沖洗干凈并進行高溫消毒。采用“翻肛輸精法”進行輸精，輸精深度為5～6 cm，為避免不同公鴨的個體差異，保證試驗的準確性，輸精采用混合精液在每天08：00—10:00進行輸精，首次輸精時連續(xù)輸精2 d且精液需在30 min內(nèi)使用完。

1.3 不同采精頻率處理

最后兩次采精訓(xùn)練時測定各個公鴨的精液量及精液品質(zhì)，將兩次采精精子活力均在85%以上、精液量均超過0.15 mL的30羽公鴨個體選留下來進行采精頻率試驗，按照采精間隔時間不同將30羽公鴨隨機分成3組，各組均為10羽。第1組為每天采精，第2組采精間隔時間為1 d即隔日采精，第3組采精間隔時間為2 d。每組采集共4批次精液，對每組每批次每個個體采集的精液測量精液量，并用細胞計數(shù)法進行精子密度與精子活力測定，方法參照2005年王鋒主編《動物繁殖學(xué)實驗教程》實驗六。

1.4 不同稀釋液與輸精量處理

從所飼養(yǎng)群體中選留384只健康、均勻的山麻鴨母鴨，隨機分成六個試驗組，每小組64只母鴨，設(shè)2種稀釋液10倍稀釋(稀釋液III、生理鹽水)，稀釋液的溫度為25～35 ℃，輸精量設(shè)0.1 mL、0.2 mL，并以原精液組(0.01 mL、0.02 mL)為對照。首次輸精后第2天開始收集種蛋，輸精間隔為3 d，剔除破蛋、畸形蛋后每5 d入孵并于第7天照蛋，統(tǒng)計受精蛋數(shù)，共收集28 d種蛋。比較分析山麻鴨不同精液稀釋方式和輸精量對其受精效果的影響。

按照稀釋方式不同將試驗組分成3組：第1組為原精液輸精組，即不稀釋組，記為組I；第2組以生理鹽水為稀釋液進行稀釋，記為組Ⅱ；第3組為番鴨精液專用稀釋液組，記為組Ⅲ，該精液稀釋液配制參考朱志明等[15]專利配方(專利號：CN103070162A)，配制100 mL稀釋液具體方法為取0.9 g葡萄糖、1.65 g谷氨酸鈉、0.2 g氯化鎂、0.8 g碳酸氫鈉、0.5 g磷酸二氫鉀和7萬國際單位的鏈霉素，最后加蒸餾水定容至100 mL。

1.5 不同輸精間隔處理

以輸精間隔2，3，4，5，6，7 d為參數(shù)，設(shè)計6個試驗組，其中公鴨采精間隔采用實驗1.3中結(jié)論的最佳采精頻率(間隔2 d)，每組每次輸精時都使用新采集的混合精液；稀釋液和輸精量采用試驗1.4中的最佳稀釋液(生理鹽水)和輸精量(0.1 mL)。各組首次輸精后都于第2天開始收集種蛋，剔除破蛋、畸形蛋后每5 d入孵并于第7天照蛋，統(tǒng)計受精蛋數(shù)，共收集30 d種蛋。分析比較不同輸精間隔對山麻鴨受精率、出雛率和健雛率的影響。

1.6 數(shù)據(jù)分析

運用Excel軟件進行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS20.0軟件進行方差分析，組間顯著性差異檢驗采用LSD、Duncan法進行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 采精頻率對籠養(yǎng)山麻鴨精液品質(zhì)的影響

采精間隔分別為0，1，2 d時對籠養(yǎng)山麻鴨精液品質(zhì)的影響見下表。

表1 每天采精組精液品質(zhì)結(jié)果

同列數(shù)據(jù)后不同大小寫字母分別表示在1%和5%水平差異顯著，下同

Data followed by different capital or small letters means the significance at 0.01 or 0.05 level,the same below

由表1、表2、表3可知，每天采精組，隨著采集次數(shù)增加，精液量和精子密度呈顯著(P<0.05)降低態(tài)勢，精子活力有降低趨勢，但差異不顯著(P>0.05)，第3次采集后呈現(xiàn)顯著(P<0.05)下降，第4次與第3次無差異；采精間隔1 d時，精液量和精子密度每相鄰的2 d差異不顯著(P>0.05)，但隨著采集次數(shù)增長呈一個明顯下降趨勢，精子活力前3次采集差異不顯著(P>0.05)，第4次表現(xiàn)顯著(P<0.05)；間隔2 d組，精液量、精子密度、精子活力和有效精子隨著采集次數(shù)增長表現(xiàn)無顯著差異(P>0.05)。

表2 間隔1 d組采精組精液品質(zhì)結(jié)果

表3 間隔2 d組采精精液品質(zhì)結(jié)果

2.2 輸精量與稀釋液對籠養(yǎng)山麻鴨受精率的影響

采用不同的輸精量0.1 mL、0.2 mL、(原精液組0.01 mL、0.02 mL為對照)與3種不同稀釋液(I、II、III)進行輸精，對受精率的影響見表4。

表4 輸精量及不同稀釋液對受精率的影響

由表4可知，當輸精量為0.1 mL時，不同輸精量處理的平均受精率為88.13%，當輸精量為0.2 mL時，不同輸精量處理的平均受精率為89.96%，兩者差異不顯著(P>0.05)。其中在0.1 mL輸精量時生理鹽水組極顯著高于原精液對照組和稀釋液III組(P<0.01)，且原精液組顯著高于稀釋液III；在0.2 mL輸精量時，生理鹽水組與原精液對照組都極顯著高于稀釋液III(P<0.01)，其中生理鹽水組最高為91.56%。

2.3 不同輸精間隔對籠養(yǎng)山麻鴨受精率及孵化效果的影響

輸精間隔2，3，4，5，6，7 d時對籠養(yǎng)山麻鴨受精率及孵化效果影響的結(jié)果如表5所示。由表5可知，間隔2 d和3 d組受精率差異不顯著(P>0.05)，且極顯著高于間隔4 d、5 d、6 d和7 d組的受精率(P<0.01)；各組間出雛率無顯著(P>0.05)差異，5 d組最高；但健雛率最高的為5、6 d組，顯著高于2 d、3 d、4 d和7 d組(P<0.05)。

表5 不同輸精間隔對受精率及孵化效果的影響結(jié)果

3 討 論

3.1 采精頻率對山麻鴨公鴨精液品質(zhì)的影響

影響種鴨精液品質(zhì)的因素頗多，除品種、遺傳、個體差異、營養(yǎng)與飼養(yǎng)環(huán)境外，采精頻率同樣是關(guān)鍵因素之一。本試驗對山麻鴨的采精頻率研究，對提高山麻鴨種公鴨的利用效率具有較高的參考價值和實踐指導(dǎo)意義。本試驗中發(fā)現(xiàn)，平均每只山麻鴨人工采精量為0.20～0.25 mL，每毫升精液的精子密度為2.70×109個，與陳章言等[11]在番鴨按摩采精獲得的精液量(0.89±0.13)mL/只相比，明顯偏少；但山麻鴨的精子密度明顯高于番鴨[16](1.85±0.19)×109個/mL，同時與王光瑛等[17]研究番鴨結(jié)果非常接近，與宋衛(wèi)濤[18]研究的蘇郵1號蛋鴨單次采精量為(0.17±0.05)mL，精子密度為(25.52±4.73)×108個/mL也基本趨于一致。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)在每日采精的情況下，總精液量、精子活力和精子密度均隨著采精次數(shù)增加呈現(xiàn)顯著下降趨勢，這與辛清武[19]在肉鴨間隔采精組中的試驗結(jié)果一致，該小組研究發(fā)現(xiàn)隔日采精組，隨著次數(shù)增加上述精液品質(zhì)的參數(shù)均呈現(xiàn)一定下降趨勢。相較于每日采精組和隔日采精，本試驗中間隔2 d組，總精液量、精子活力和精子密度并未隨著次數(shù)增加發(fā)生明顯變化，這與辛清武[19]和Tan[20]在肉鴨和番鴨中的報道相一致。由此可見，在3種采精間隔時間模式下，間隔2 d采精的公鴨可以保持較好的精液品質(zhì)，這可能得益于種公鴨采精間隔時間長可得到一定的休養(yǎng)，從而為下次采精提供充足的體能。

3.2 輸精量與稀釋液種類對山麻鴨受精率的影響

本試驗中對3種精液稀釋類型各自設(shè)定的兩組人工授精輸精用量，相同模式下不同輸精量對山麻鴨的平均受精率均有一定影響，但差異程度不一，其中以生理鹽水作為稀釋液的兩組輸精量對受精率的影響均為最高且兩者間沒顯著性差異。

在原精液輸精組中，每只母鴨的輸精量為0.02 mL時，其受精率(91.28±0.26%)顯著高于0.01 mL組(87.03±0.16%)，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能是輸入的原精液量過少使得輸精過程中粘連損耗或帶出導(dǎo)致有效精子數(shù)不足，進而受精率下降；組Ⅱ中兩種輸精量梯度(0.1 mL/只和0.2 mL/只)對受精率的影響無顯著差異，該結(jié)果與宋衛(wèi)濤等[21]利用生理鹽水對“蘇郵1號”種公鴨原精液稀釋20倍生理鹽水的分析結(jié)果相一致，這可能與人工輸精時輸入母鴨體內(nèi)有效精子的達到了滿足受精的最低有效量時，受精率不再隨輸精量的提高而顯著增加有關(guān)；因此，在人工授精時精液中精子數(shù)達到一定數(shù)量后，僅增加輸精量，并不能有效取提高受精率；采用番鴨專用精液稀釋液的III組中，當每只母鴨輸精量為0.2 mL時，平均受精率可達到87.04%顯著高于用量為0.1 mL組的受精率(85.93±0.58%)，這可能得益于精液稀釋液能夠通過模擬精子原有的緩沖空間，滿足精子體外存活需要的營養(yǎng)因子，減緩精子的新陳代謝速度從而減少代謝過程中諸如乳酸類的不利于精子存活的物質(zhì)，同時有效提高精子在外的存活率和壽命，進而提高人工授精的受精率[22]。本試驗中所設(shè)置的3組稀釋類別的輸精率都達到了較高水平，此結(jié)果與劉思陽等[23]在比較生理鹽水和蛋黃葡萄糖溶液對半番鴨輸精率影響的報道中的結(jié)果差異較大，后者平均受精率均低于70%，這可能與試驗對象的品種差異有關(guān)。但縱觀本試驗中的3種稀釋類型對輸精率的影響可見，生理鹽水作為稀釋液時，兩個輸精量組別的受精率最高，平均達到91.5%，均顯著優(yōu)于原精液Ⅰ組和專業(yè)精液稀釋液Ⅲ組，這卻與王光瑛等[17]研究發(fā)現(xiàn)磷酸鹽稀釋液對番鴨的精液稀釋效果最佳頗有不同，事實上，本研究中Ⅲ組使用的專業(yè)精液稀釋液所適用的對象就是番鴨品種，而并非山麻鴨或其他麻鴨系列，因此由于試驗動物屬性甚至品種的不同，其所相適宜的精液的稀釋液的配置也可能不同，但對于番鴨和山麻鴨二者相適應(yīng)的精液稀釋液不同的具體原因尚待進一步研究。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)用生理鹽水10倍稀釋，并且輸精量0.1mL時可以增加授精母鴨個數(shù)，可獲得較好效果，在生產(chǎn)實踐中既經(jīng)濟又實用。因而在間隔3 d輸精時用生理鹽水作為稀釋液稀釋10倍輸入0.1 mL時不僅可以獲得較高的受精率，也可提高種公鴨的利用效率和時限。

3.3 輸精間隔對山麻鴨受精率的影響

在種鴨的人工采精和授精生產(chǎn)過程中，最佳輸精頻率的確定不僅直接影響著受精率和孵化率，同時對生產(chǎn)操作實用性和可行性同樣至關(guān)重要[24]。在本試驗1.4中得出在輸精時使用生理鹽水作為稀釋液，稀釋10倍輸入0.1 mL時可以獲得較高的受精率，為進一步探索是否有更佳的輸精間隔，本研究設(shè)計間隔2，3，4，5，6，7 d 6組輸精間隔進行深入探究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)間隔2 d組和3 d組受精率無顯著差異，但從實際生產(chǎn)考慮，3 d為輸精間隔為最佳。目前，關(guān)于山麻鴨的人工輸精間隔對受精率影響的研究還鮮見報道，但類似的研究在番鴨和半番鴨中確已不在少數(shù)，但報道的結(jié)果確不一。蘇開波等[25]通過利用半番鴨為試驗動物，研究發(fā)現(xiàn)間隔3 d進行一次輸精的效率最優(yōu)；而湯樹生等[26]以番鴨為研究對象進行輸精間隔研究確發(fā)現(xiàn)理想的輸精間隔為5 d，同時上述兩個研究小組最優(yōu)輸精間隔情況下的受精率均偏低。相反，在利用北京鴨和番鴨雜交的輸精間隔優(yōu)化試驗中，Nadine等[27]發(fā)現(xiàn)輸精間隔在2～4 d的受精率平均高達91.9%，效果最佳，該研究同時發(fā)現(xiàn)孵化的健雛率高低與輸精間隔的時間呈正相關(guān)。這種趨勢在其他團隊的研究報道中也得到驗證，呈現(xiàn)這種趨勢的原因可能是輸精間隔越短，相同時間內(nèi)的輸精次數(shù)就越多，相應(yīng)的對于母鴨生殖器官的刺激和應(yīng)激就越大，健雛率進而受到影響[28-29]。綜上所述，采用輸精間隔3 d可使山麻鴨達到較優(yōu)的受精率和出雛效果。

4 結(jié) 論

籠養(yǎng)山麻鴨人工采精頻率2 d最佳，并采用生理鹽水10倍稀釋，輸精量0.1 mL/只、間隔3 d授精的輸精參數(shù)可獲得較優(yōu)的受精和孵化、出雛效果。

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