章 梅ZHANG Mei

宋元達(dá)1,2

劉 青1,2

王友玲1,2

吳 翰1,2

(1.山東理工大學(xué)農(nóng)業(yè)工程與食品科學(xué)學(xué)院，山東 淄博 255000；2.山東省高校農(nóng)產(chǎn)品功能化技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 淄博 255000)

阿維拉霉素又名肥拉霉素，是一種正糖霉素族的寡糖類抗生素，具有調(diào)節(jié)動(dòng)物腸內(nèi)細(xì)菌代謝[1-2]和促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用[3]。阿維拉霉素對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌具有較好的抑制效果，對(duì)大腸桿菌有著間接的影響，能有效地減小動(dòng)物的感染率[4]，還可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、提高飼料回報(bào)率同時(shí)具有低殘留和低毒性、無(wú)交叉耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，已經(jīng)作為一種飼料添加劑用于豬和肉雞的養(yǎng)殖[5-6]。

阿維拉霉素的生產(chǎn)是好氧發(fā)酵過(guò)程，發(fā)酵液中溶氧水平的高低與細(xì)胞內(nèi)酶的活性有著直接的關(guān)系，決定了何種代謝途徑生成 ATP、還原力及各種代謝物[7]；對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和細(xì)胞內(nèi)阿維拉霉素的合成有重大影響。為了滿足發(fā)酵過(guò)程中氧的要求，常用攪拌轉(zhuǎn)速和增大通氣量等方法來(lái)提高發(fā)酵液中溶氧水平，但過(guò)大的剪切力會(huì)引起菌絲損傷，造成菌絲斷裂、泡沫增多和變大以及發(fā)酵不易控制等[8]。也有學(xué)者利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將透明顫菌血紅蛋白的基因克隆到目的菌株，降低菌株對(duì)氧的敏感度，使菌株適應(yīng)發(fā)酵液中較低的溶氧水平，提高對(duì)氧的利用[9]；向發(fā)酵液中加入過(guò)氧化氫等[10]分子氧底物。以上2種方法存在基因的表達(dá)不穩(wěn)定或丟失[11]和本身有著較大毒性等[12]問(wèn)題。通過(guò)添加氧載體來(lái)改善發(fā)酵液的溶氧水平，也能提高發(fā)酵產(chǎn)量[13]。

氧載體是一種對(duì)細(xì)胞沒(méi)有毒性，具有比水更高的溶氧能力的有機(jī)化合物[14]。在發(fā)酵液中添加正己烷、煤油和表面活性劑等氧載體，引入新的液相，減小氣液之間的傳氧阻力，提高Kla(傳氧系數(shù))值，在同一發(fā)酵系統(tǒng)中能提高30%～300%，或達(dá)到同樣混合效果時(shí)降低攪拌功率 30% 以上[15]。目前國(guó)內(nèi)外尚未發(fā)現(xiàn)有氧載體用于發(fā)酵生產(chǎn)阿維拉霉素的研究。本試驗(yàn)擬研究各種氧載體對(duì)綠色產(chǎn)色鏈霉菌產(chǎn)阿維拉霉素的影響，進(jìn)一步觀察其發(fā)酵參數(shù)，對(duì)氧載體的效果進(jìn)行評(píng)價(jià)和篩選，并考察添加時(shí)間和濃度對(duì)生物量及阿維拉霉素合成的影響，以期為氧載體在阿維拉霉素工業(yè)化生產(chǎn)的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

綠色產(chǎn)色鏈霉菌(S.viridochromogene LY013)：浙江凌云藥業(yè)有限公司。

1.2 主要儀器和試劑

1.2.1 主要試劑

Avilamycin標(biāo)準(zhǔn)品：80%，美國(guó)歷來(lái)公司；

吐溫20、吐溫80：分析純，上海滬試劑廠；

正己烷：分析純，上海沃凱生物技術(shù)有限公司。

1.2.2 主要儀器

超凈工作臺(tái)：ZHJH-C1115C型，上海智城分析儀器制造有限公司；

隔水式恒溫培養(yǎng)箱：GRP-9160型，上海森信儀器有限公司；

液相色譜儀：waters600e型，沃特世科技(上海)有限公司。

1.3 培養(yǎng)基與培養(yǎng)方法

1.3.1 培養(yǎng)基

斜面培養(yǎng)基：可溶性淀粉20.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、KNO31.0 g/L、FeSO4·7H2O 0.5 g/L、NaCl 0.5 g/L、瓊脂 20.0 g/L，pH 7.2～7.4；

種子培養(yǎng)基：豆餅粉 32 g/L、甘露醇 22 g/L、蛋白胨 5 g/L、葡萄糖 10 g/L、NaCl 5 g/L、(NH4)2SO4、6.4 g/L、MgSO40.05 g/L，pH 7.2～7.4；

發(fā)酵培養(yǎng)基：甘露醇 25 g/L、豆餅粉 34 g/L、可溶性淀粉 6.4 g/L、(NH4)2SO42.5 g/L、葡萄糖 2 g/L、MgSO40.05 g/L、CaCO35 g/L，pH 7.2～7.4。

1.3.2 培養(yǎng)方法

液體種子培養(yǎng)：挑選斜面培養(yǎng)基中長(zhǎng)勢(shì)較好的綠色產(chǎn)色鏈霉菌的孢子，接種于裝有50 mL種子培養(yǎng)基的250 mL 三角瓶?jī)?nèi)。在28 ℃的搖床里以 200 r/min 振蕩培養(yǎng) 24 h；

液體發(fā)酵培養(yǎng)：以 6%的接種量，將已培養(yǎng)種子培養(yǎng)液接入到裝有50 mL 發(fā)酵培養(yǎng)基的250 mL三角瓶中，在28 ℃ 條件下200 r/min 振蕩培養(yǎng)72 h。

1.4 分析方法

1.4.1 樣品處理 取5.0 mL發(fā)酵液于離心管中，4 000 r/min離心10 min，棄上清液，加入9.0 mL無(wú)水甲醇，用振蕩器充分振蕩后，浸提30 min，用濾膜過(guò)濾，經(jīng)無(wú)水甲醇稀釋的上清液即為待測(cè)液。

1.4.2 菌體生物量的測(cè)定 在發(fā)酵48 h后，吸取發(fā)酵液10 mL，4 000 r/min離心10 min，倒出上清液，沉淀物烘干至恒重的質(zhì)量即為菌體生物量。

1.4.3 還原糖的測(cè)定 采用DNS法[16]。

1.4.4 阿維拉霉素的測(cè)定 取1 mL的發(fā)酵液移至裝有3 mL 甲醇的5 mL的離心管中，旋渦震蕩3 min，超聲10 min 后經(jīng)0.22 μm過(guò)濾膜過(guò)濾，搖勻，備用。

采用高效液相色譜分析(HPLC)法。色譜條件：流動(dòng)相為乙腈∶0.2%磷酸二氫銨=51∶49(體積比)；流速1 mL/min；色譜柱Agilent C18，4.6 mm×250 mm；檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量20.0 μL。

1.4.5 得率系數(shù)的計(jì)算 按式(1)計(jì)算得率系數(shù)。

(1)

式中：

R——得率系數(shù)，mg/g；

M——阿維拉霉素，mg/L；

DCW——生物量，g/L。

2 結(jié)果與分析

2.1 氧載體對(duì)阿維拉霉素的影響

選擇7種常用氧載體以2 g/L的添加量進(jìn)行綠色產(chǎn)色鏈霉菌發(fā)酵試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可知，添加氧載體均可以提高阿維拉霉素的產(chǎn)量。其中吐溫20、吐溫80、正己烷的效果明顯；其余的氧載體也有一定的促進(jìn)作用，但與前3組比較，效果不顯著。與對(duì)照組相比，正己烷提高了21 mg/L，吐溫 20提高了26 mg/L，吐溫80的促進(jìn)效果最好，增加了40 mg/L。顯然吐溫對(duì)阿維拉霉素的合成具有較好的促進(jìn)效果，從促進(jìn)效果和經(jīng)濟(jì)性角度綜合考慮，選擇正己烷、吐溫20和吐溫80作為研究對(duì)象，進(jìn)一步研究其對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的促進(jìn)作用。

圖1 氧載體對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響Figure 1 Effect of different oxygen-vectors on the yield of avilamycin

2.2 氧載體添加量對(duì)發(fā)酵的影響

2.2.1 吐溫20、吐溫80和正己烷添加量對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響 由圖2可知，添加量低于3 g/L時(shí)，隨著氧載體添加量的增加，阿維拉霉素產(chǎn)量也隨著增加。添加量為3 g/L時(shí)，阿維拉霉素產(chǎn)量均達(dá)到最高。吐溫80的提升效果要優(yōu)于吐溫20與正己烷的。當(dāng)添加量超過(guò)3 g/L時(shí)，阿維拉霉素產(chǎn)量均有所減小，說(shuō)明過(guò)高濃度的氧載體對(duì)菌生產(chǎn)阿維拉霉素不利，可能是氧的濃度對(duì)抗生素的產(chǎn)量影響降低。其中添加量為3～4 g/L時(shí)正己烷組產(chǎn)量下降較快，可能是高濃度的正己烷影響了阿維拉霉素相關(guān)酶系導(dǎo)致產(chǎn)量下降[17]。高濃度的氧載體能提高Kla系數(shù)[18]，提高發(fā)酵液的溶氧水平，促進(jìn)阿維拉霉素產(chǎn)量的提高，但是過(guò)高濃度氧載體卻不利于綠色產(chǎn)色鏈霉菌的發(fā)酵，使得發(fā)酵液中阿維拉霉素含量降低。

2.2.2 吐溫20、吐溫80和正己烷添加量對(duì)生物量的影響

圖3顯示，在添加量為3 g/L時(shí)菌體量達(dá)到最大值，添加正己烷、吐溫80和吐溫20的發(fā)酵液生物量與對(duì)照組生物量(9.80 g/L)相比，分別提高了15.58%，20.63%，16.58%。與正己烷組相比，吐溫80對(duì)生物量促進(jìn)的效果更為明顯。

圖2 正己烷、吐溫20和吐溫80添加量對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響Figure 2 Effect of different n-hexane, Tween-20 and Tween-80 concentration on the yield of avilamycin

圖3 正己烷、吐溫20和吐溫80添加量對(duì)生物量的影響Figure 3 Effect of different n-hexane, Tween-20 and Tween-80 concentration on dry weight of cells

這可能是吐溫80本身就可以作為營(yíng)養(yǎng)源，供給微生物生長(zhǎng)，而且吐溫可以增大細(xì)胞的通透性，使細(xì)胞的新陳代謝較為容易[19]，從而促進(jìn)了細(xì)胞的生長(zhǎng)，提高了生物量。同時(shí)發(fā)現(xiàn)添加量超過(guò)3 g/L時(shí)，正己烷、吐溫20和吐溫80組的生物量都有所降低。其中正己烷組的生物量下降速度較快，可能是由于高濃度烷烴類氧載體對(duì)菌體的傷害較強(qiáng)，使得菌絲體在發(fā)酵后期快速降解[20]，與馮杰等[21]研究結(jié)果相符。說(shuō)明氧載體的濃度過(guò)高不利于菌體量的增長(zhǎng)，同時(shí)會(huì)干擾微生物的發(fā)酵，抑制菌體合成次生代謝產(chǎn)物的能力，造成單位菌體產(chǎn)阿維拉霉素能力下降。

2.2.3 吐溫20、吐溫80和正己烷添加量對(duì)得率系數(shù)的影響

由圖4可知，添加不同氧載體的發(fā)酵液中得率系數(shù)的趨勢(shì)大致相同，添加0～2 g/L時(shí)隨著氧載體濃度的提高，正己烷、吐溫20和吐溫80組的菌體得率系數(shù)逐漸增大，說(shuō)明低濃度氧載體均有利于單位細(xì)胞產(chǎn)阿維拉霉素的能力提高。比較圖2～4的數(shù)據(jù)可知，添加量為2～3 g/L時(shí)，添加氧載體能促進(jìn)阿維拉霉素的產(chǎn)量和生物量的提高，與顏日明等[22]的研究結(jié)果相同，但阿維拉霉素的得率系數(shù)基本維持不變甚至有所降低，說(shuō)明產(chǎn)量的增加與生物量的提高有很大關(guān)系，不僅僅是單位細(xì)胞產(chǎn)率增大的結(jié)果。添加量超過(guò)3 g/L 時(shí)，3種氧載體的得率系數(shù)、生物量和產(chǎn)量都沒(méi)有提高，甚至有所降低。這可能是菌體在生長(zhǎng)階段和代謝階段受到的限制主要因素不僅僅是氧濃度，還受到發(fā)酵本身的碳源和氮源限制。

圖4 正己烷、吐溫20和吐溫80添加量對(duì)得率系數(shù)的影響Figure 4 Effect of n-hexane, Tween-20 and Tween-80 concentration on dry weight of cells and the yield of avilamycin

2.3 吐溫20、吐溫80和正己烷添加時(shí)間對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響

在上述試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以3 g/L的添加量進(jìn)一步研究氧載體在發(fā)酵過(guò)程中的添加時(shí)間對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響，結(jié)果見(jiàn)圖5。由圖5可知，發(fā)酵后24 h內(nèi)添加氧載體比發(fā)酵開(kāi)始時(shí)添加能顯著提高阿維拉霉素產(chǎn)量；前8 h，隨著添加時(shí)間的推遲，阿維拉霉素的產(chǎn)量整體呈上升趨勢(shì)，提示氧載體最適的添加時(shí)間為鏈霉菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，可能是菌體在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期對(duì)氧的要求較高，添加氧載體解除溶氧極限，有利于菌體的生長(zhǎng)；而在發(fā)酵后期(24 h后)添加氧載體，隨著添加時(shí)間推遲，阿維拉霉素的產(chǎn)量低于發(fā)酵初始添加，這是因?yàn)檫M(jìn)入生長(zhǎng)穩(wěn)定期，氧載體的添加對(duì)菌體量的促進(jìn)效果減低。另外吐溫組的產(chǎn)量超過(guò)了正己烷組，可能是氧載體吐溫80對(duì)生物量有明顯提升效果，與王爽等[19]的研究結(jié)果一致。但是抗生素是次級(jí)代謝產(chǎn)物，其產(chǎn)量的高低受多種因素影響，菌體量只是其中的一個(gè)方面；液態(tài)烷烴在發(fā)酵液中可以起到分散劑的作用，使細(xì)胞間的絮凝性降低，較大的菌絲團(tuán)在剪切力的作用下會(huì)分散成數(shù)個(gè)小菌絲團(tuán)。與大菌絲團(tuán)相比，分散的較小菌絲團(tuán)界面面積會(huì)有所增加，從而加快了氧傳遞到菌絲體內(nèi)的總速度。但是烷烴較高的毒性會(huì)抑制菌體產(chǎn)抗生素的能力，降低阿維霉素的產(chǎn)量。

圖5 正己烷、吐溫20和吐溫80添加時(shí)間對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響Figure 5 Effect of n-hexane, Tween-20 and Tween-80 concentration addition time on and avilamycin production

2.4 吐溫80對(duì)阿維拉霉素發(fā)酵過(guò)程的影響

以吐溫80為氧載體，添加時(shí)間為8 h、添加量為3 g/L進(jìn)行發(fā)酵試驗(yàn)，其發(fā)酵過(guò)程中綠色產(chǎn)色鏈霉菌的生物量、產(chǎn)量、培養(yǎng)基pH值、殘?zhí)呛康淖兓厔?shì)見(jiàn)圖6。由圖6可知，添加氧載體能加快菌體的生長(zhǎng)，提高生物量，并提高了單位菌體產(chǎn)阿維拉霉素的能力，兩者共同作用促使阿維拉霉素產(chǎn)量顯著提高。在0～16 h菌體的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，發(fā)酵液中阿維拉霉素的含量較低，pH值和還原糖的含量都急劇下降；在16 h后，生物量逐漸保持穩(wěn)定，菌體進(jìn)入穩(wěn)定期，并保持不變，而阿維拉霉素的含量呈指數(shù)上升，并在40 h達(dá)到最大值，這種發(fā)酵類型屬于非生長(zhǎng)偶聯(lián)型發(fā)酵；同時(shí)發(fā)酵液中pH值由發(fā)酵早期的逐漸減小轉(zhuǎn)變?yōu)橹饾u增大，還原糖的消耗速率也有著明顯的降低，可能與菌體在發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的有機(jī)酸有關(guān)[20]。葡萄糖經(jīng)EMP途徑等生成的有機(jī)酸被部分排出細(xì)胞外，使得發(fā)酵液的有機(jī)酸含量增高，pH值下降，但在阿維拉霉素生產(chǎn)期，由于發(fā)酵液中碳源量的降低，有機(jī)酸被菌體重新利用[23-25]，pH值逐漸上升；同時(shí)菌體進(jìn)入次生代謝期，生物量不再增加，還原糖的消耗速率也逐漸減小，阿維拉霉素含量也急劇上升[26]。因此在8 h發(fā)酵的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期添加吐溫80解除溶氧限制，能提高生物量和阿維拉霉素的產(chǎn)量[27-28]。

圖6 發(fā)酵過(guò)程中pH、還原糖、生物量、阿維拉霉素的曲線圖Figure 6 The curve of pH, deoxidize sugar, Biomass, avilamycin during fermentation

3 結(jié)論

本研究將7種氧載體添加到綠色產(chǎn)色鏈霉菌的發(fā)酵過(guò)程中，結(jié)果顯示添加的氧載體均可以提高其阿維拉霉素的產(chǎn)量，其中吐溫20、正己烷和吐溫80效果最好。在此基礎(chǔ)上考察這3種氧載體對(duì)綠色產(chǎn)色鏈霉菌合成阿維拉霉素的影響，發(fā)現(xiàn)3種氧載體均可以提高生物量，同時(shí)能提高綠色產(chǎn)色鏈霉菌的得率系數(shù)，從而提高綠色產(chǎn)色鏈霉菌產(chǎn)阿維拉霉素的能力，其中吐溫80作為氧載體的效果最好。另外，還研究了氧載體添加時(shí)間對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量的影響，在發(fā)酵開(kāi)始的第 8天添加 3 g/L 的吐溫80與對(duì)照組相比，生物量提高了20.63%，得率系數(shù)增加到3.12%。

本試驗(yàn)證明了氧載體能強(qiáng)化氧傳遞速率，提高菌體的生物量和得率系數(shù)，促進(jìn)代謝產(chǎn)物的合成。下一步將研究各種氧載體的協(xié)同作用對(duì)阿維拉霉素產(chǎn)量提高的影響以及對(duì)菌體糖代謝的關(guān)鍵酶活性的影響，進(jìn)一步發(fā)掘氧載體的促進(jìn)機(jī)制。

[1] SCHABERG D R, CULVER D H, GAYNES R P.Major trends in the microbial etiology of nosocomial infection[J].American Journal of Medicine, 1991, 91(3B): 72S.

[2] SWARTZ M N.Hospital-acquired infections: diseases with increasingly limited therapies[J].Proc Natl Acad Sci USA, 1994, 91(7): 2 420-2 427.

[3] HERNANDEZ F, MADRID J, GARCIA V, et al.Influence of two plant extracts on broilers performance, digestibility, and digestive organ size[J].Poult Sci, 2004, 83(2): 169-174.

[4] PARADIS M A, MCMILLAN E, BAGG R, et al.Efficacy of avilamycin for the prevention of necrotic enteritis caused by a pathogenic strain of Clostridium perfringens in broiler chickens[J].Avian Pathology, 2016, 45(3): 365-369.

[5] AARESTRUP F M, BAGER F, ANDERSEN J S.Association between the use of avilamycin for growth promotion and the occurrence of resistance among Enterococcus faecium from broilers: epidemiological study and changes over time[J].Microbial Drug Resistance, 2000, 6(1): 71-75.

[6] 王東衛(wèi), 王瑛.飼用抗生素在雛雞生產(chǎn)中應(yīng)用效果的比較[J].飼料工業(yè), 2011, 32(24): 62-64.

[7] 張克旭, 陳寧, 張蓓.代謝控制發(fā)酵[M].北京: 中國(guó)輕工業(yè)出版社, 1998: 25-50.

[8] YE Rui-fang, WANG Qian, ZHOU Xiao-fang.Lincomycin, rational selection of high producing strain and improved fermentation by amino acids supplementation[J].Bioprocess and Biosystems Engineering, 2009, 32(4): 521-529.

[9] 吳益民, 王洪軍, 孫艷, 等.透明顫菌血紅蛋白基因在紅色糖多孢菌株中表達(dá)及對(duì)紅霉素產(chǎn)量的影響[J].中國(guó)抗生素雜志, 2007, 32(10): 599-601.

[10] 翁雪清, 施巧琴, 吳松剛.氧載體、表面活性劑及H2O2對(duì)L-phe發(fā)酵影響的研究[J].氨基酸和生物資源, 2012, 34(2): 39-42.

[11] 文瑩, 宋淵, 李季倫.透明顫菌血紅蛋白在肉桂地鏈霉菌中的表達(dá)對(duì)其細(xì)胞生長(zhǎng)及抗生素合成的影響[J].生物工程學(xué)報(bào), 2001, 17(1): 24-28.

[12] 李書(shū)良, 焦鵬, 曹竹安.流加H2O2對(duì)提高供氧及微生物代謝的影響[J].微生物學(xué)報(bào), 2002, 42(1): 129-132.

[13] 崔培梧, 胡亞強(qiáng), 鐘瑜萍, 等.氧載體對(duì)茯苓菌液態(tài)深層發(fā)酵的影響[J].中藥材, 2015, 38(6): 1 157-1 160.

[14] NARTA U, ROY S, KANWAR S S, et al.Improved production ofL-asparaginase by Bacillus brevis cultivated in the presence of oxygen-vectors[J].Bioresource Technology, 2011, 102(2): 2 083-2 085.

[15] WANG Jiang-long.Enhancement of citric acid production by As pergillusni gerusing n-dodecane as an oxygen-vector[J].Process Biochemistry, 2000, 35(10): 1 079-1 083.

[16] 趙凱, 許鵬舉, 谷廣燁.3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定還原糖含量的研究[J].食品科學(xué), 2008, 29(8): 534-536.

[17] XU Fang, YUAN Qi-peng, ZHU Yan.Improved production of lycopene and b-carotene by Blakeslea trispora with oxygen-vectors[J].Process Biochemistry, 2006, 42(2): 289-293.

[18] 王英燕, 張芙蓉, 田智斌.氧載體對(duì)番茄紅素發(fā)酵影響[J].藥學(xué)研究, 2014, 33(4): 196-199.

[19] 王爽, 周魏, 劉紅冉, 等.幾種氧載體對(duì)納他霉素發(fā)酵的影響[J].食品科學(xué), 2015, 40(6): 102-107.

[20] 彭超, 黃和, 劉欣, 等.添加正十六烷對(duì)高山被孢霉發(fā)酵生產(chǎn)花生四烯酸的影響[J].食品科技, 2010(5): 2-5.

[21] 馮杰, 馮娜, 唐慶九, 等.氧載體正十二烷對(duì)靈芝三萜液態(tài)深層發(fā)酵的影響[J].食用菌學(xué)報(bào), 2016, 23(2): 52-58.

[22] 顏日明, 艾佐佐, 汪涯, 等.雙液相體系強(qiáng)化氧傳遞促進(jìn)微生物油脂生產(chǎn)[J].生物工程學(xué)報(bào), 2013, 29(4): 536-539.

[23] 王衡偉, 陳長(zhǎng)華, 付水林, 等.腺苷發(fā)酵液中有機(jī)酸的代謝規(guī)律[J].華東理工大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2004, 30(2): 223-226.

[24] 諶頡, 儲(chǔ)炬, 莊英萍, 等.阿維菌素發(fā)酵過(guò)程有機(jī)酸積累規(guī)律與生物合成的關(guān)[J].華東理工大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版, 2005, 31(6): 731-734.

[25] LOPES D S T, REIS A.The use of multi-parameter flow cytometry to study the impact of n-dodecane additions to marine dinoflagellate microalga Crypthecodinium cohnii batch fermentations and DHA production[J].Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 2008, 35(8): 875-887.

[26] 李娜娜, 吳曉英, 吳振強(qiáng).液態(tài)烷烴氧載體對(duì)粘紅酵母發(fā)酵產(chǎn)番茄紅素的影響[J].生物技術(shù)通報(bào), 2015, 31(2): 196-201.

[27] 劉芳, 李曉榮, 鄒祥.阿維拉霉素生物合成與代謝調(diào)控研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào), 2010(12): 25-30.

[28] SEIFU D G, ISIMJAN T T, MEQUANINT K.Tissue engineering scaffolds containing embedded fluorinated-zeolite oxygen vectors[J].Acta Biomaterialia, 2011, 7(10): 3 670-3 678.