陳端妮，唐曉敏*，張春榮，程軒軒，楊全*

(1.廣東藥科大學(xué) 中藥學(xué)院，廣州 510006；2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局嶺南藥材生產(chǎn)與開發(fā)重點(diǎn)研究室，廣州 510006；3.中藥材國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系 廣州綜合試驗(yàn)站(CARS-21-16)，廣州 510006；4.廣東省南藥規(guī)范化種植與綜合開發(fā)工程技術(shù)研究中心，廣州 510006)

豆科植物廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osbeck)Merr.的干燥地上部位為中藥材廣金錢草，別名為大銅錢、銅錢沙和金錢草等，廣泛分布于廣東、廣西、海南等地。具有利濕退黃、利尿通淋的功效，主要用于治療黃疸尿赤、熱淋、石淋、小便澀痛、水腫尿少等癥[1]。隨著廣金錢草的廣泛應(yīng)用，年消耗量越來越大，市場(chǎng)流通的廣金錢草以栽培為主，關(guān)于栽培廣金錢草的采收時(shí)間的研究已有報(bào)道[2]，但局限于藥材成分含量的研究，忽略了藥材產(chǎn)量。因此，本文結(jié)合了藥材產(chǎn)量和多成分(多糖、總黃酮、夏佛塔苷)含量的變化規(guī)律，確立適合廣金錢草的最佳采收時(shí)間，為生產(chǎn)中廣金錢草的采收及規(guī)范化生產(chǎn)關(guān)鍵技術(shù)的制定提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：UV1800紫外分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器)；超聲提取處理器(昆山市超聲儀器有限公司)；島津LC-20A高效液相色譜儀；FA2204B電子分析天平(上海精科美科學(xué)儀器有限公司)；HWS26型電熱恒溫水浴鍋。

試劑：夏佛塔苷對(duì)照品(批號(hào)：PS13071901；99.31%；購(gòu)自成都普思生物科技有限公司)；蘆丁對(duì)照品(上海晶純生化科技股份有限公司)；甲醇(色譜純，美國(guó)歐普森公司)；乙醇、葡萄糖、濃硫酸、苯酚、亞硝酸鈉、硝酸鋁和氫氧化鈉均為分析純；超純水。

1.2 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)布置于廣東省梅州市平遠(yuǎn)縣南領(lǐng)藥業(yè)廣金錢草種植基地。于2015年1月份育苗，2016年4月中旬選取長(zhǎng)勢(shì)一致的種苗進(jìn)行大田移栽，開展常規(guī)管理。采用“S”形隨機(jī)取樣法，于7、8、9、10月每隔15 d采集樣品1次，每次采集15株。

1.3 測(cè)定項(xiàng)目

1.3.1 生物量測(cè)定 于地面處割取植株地上部位，用游標(biāo)卡尺測(cè)定直徑、卷尺測(cè)定長(zhǎng)度，105 ℃殺青0.5 h，55 ℃烘至恒重測(cè)定生物量。

1.3.2 總黃酮含量測(cè)定 參考程軒軒等[3]的響應(yīng)面法提取測(cè)定總黃酮含量，蘆丁作為對(duì)照品，在510 nm處測(cè)定吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=12.165X-0.017 1(r=0.999 0)，線性范圍9.964～69.748 μg·mL-1。

1.3.3 總多糖含量測(cè)定 參考程軒軒等[4]的響應(yīng)面法提取測(cè)定多糖含量，葡萄糖作為對(duì)照品，在490 nm處測(cè)吸光度值，以溶液濃度X(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，吸光度Y為坐標(biāo)，得線性回歸方程Y=9.528 3X+0.004 8(r=1.000 0)，線性范圍2.000～11 μg·mL-1。

1.3.4 夏佛塔苷含量測(cè)定 參照2015版《中華人民共和國(guó)藥典》方法檢測(cè)廣金錢草中夏佛塔苷含量。以夏佛塔苷濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=2 000 000X-22 540(r=0.999 9)，線性范圍75.0～1050 μg·mL-1。見圖1。

1.3.4 數(shù)據(jù)分析 數(shù)據(jù)處理用Excel辦公軟件，數(shù)據(jù)分析使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同采收時(shí)間廣金錢草生長(zhǎng)變化規(guī)律

圖1 夏佛塔苷對(duì)照品(A)、廣金錢草樣品(B)HPLC圖

不同采收時(shí)間廣金錢草各生長(zhǎng)指標(biāo)變化規(guī)律見表1，由表1可以看出，隨著采收時(shí)間的推遲，株高和地徑均呈逐漸升高的變化趨勢(shì)，10月份增加不顯著。干重呈現(xiàn)逐漸上升而后降低的趨勢(shì)，10月初達(dá)到最高。說明株高、地徑、生物量受采收期影響顯著，不同采收時(shí)間的藥材生長(zhǎng)及生物量積累存在較大差異。

表1 不同采收時(shí)間對(duì)廣金錢草生長(zhǎng)的影響

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

2.2 不同采收時(shí)間廣金錢草化學(xué)成分積累變化規(guī)律

不同采收時(shí)間廣金錢草化學(xué)成分含量差異見表2。由表2可知，隨著采收時(shí)間的推遲，多糖含量呈逐漸上升的變化趨勢(shì)，9月中旬極顯著升高；總黃酮含量呈先增加后降低的變化趨勢(shì)，在9月中旬極顯著升高，而后逐漸降低；夏佛塔苷含量7月初到10月中旬逐漸降低，7月初含量最高。由此可見，廣金錢草化學(xué)成分受采收時(shí)間影響顯著，不同采收時(shí)間藥材的質(zhì)量存在較大差異。

表2 不同采收時(shí)間對(duì)廣金錢草化學(xué)成分含量的影響

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

2.3 不同采收時(shí)間廣金錢草單株化學(xué)成分積累變化規(guī)律

不同采收時(shí)間廣金錢草單株化學(xué)成分含量差異見表3。由表3可以看出，隨著采收時(shí)間的推遲，單株多糖、總黃酮、夏佛塔苷含量均呈先上升后降低的變化趨勢(shì)。其中，單株多糖含量9月中旬～10月中旬極顯著高于其他月份，單株總黃酮和夏佛塔苷含量10月初極顯著高于其他月份。由此可見，廣金錢草單株化學(xué)成分受采收時(shí)間影響顯著或極顯著，不同采收時(shí)間存在較大差異。

表3 不同采收時(shí)間對(duì)廣金錢草單株化學(xué)成分含量的影響 mg·株-1

注：表中大寫字母表示P值在0.01水平差異顯著，小寫字母表示P值在0.05水平差異顯著。

3 結(jié)論與討論

3.1 采收時(shí)間與廣金錢草藥材產(chǎn)量

廣金錢草株高、地徑均在10月份達(dá)到最高值，10月中旬(15日)的株高是7月初(1日)的9.06倍，地徑增加了325%，但干重(生物量)在10月中旬出現(xiàn)降低趨勢(shì)，較10月初降低了18.10%，主要原因是采收過程中發(fā)現(xiàn)10月中旬采收時(shí)出現(xiàn)葉片容易脫落的現(xiàn)象，最終導(dǎo)致產(chǎn)量降低。因此，從藥材產(chǎn)量而言，廣金錢草最佳采收時(shí)間為10月初。

3.2 采收時(shí)間與廣金錢草化學(xué)成分積累

廣金錢草9月初多糖、總黃酮含量極顯著或顯著高于其他月份，與7月初比較多糖含量增加了371.14%，總黃酮含量增加了170.64%；而夏佛塔苷含量7月初極顯著高于其他月份，是10月中旬的6.14倍?；厮阒羻沃戤a(chǎn)量結(jié)果出現(xiàn)了變化，表現(xiàn)為10月初的多糖、總黃酮、夏佛塔苷含量均顯著或極顯著高于其他月份，分別是7月初的148.24、96.66、20.36倍。因此，從化學(xué)成分積累而言，廣金錢草最佳采收時(shí)間為10月初。

3.3 廣金錢草最佳采收時(shí)間

通過單株化學(xué)成分含量的分析，單純考慮化學(xué)成分含量的變化而忽略產(chǎn)量確定采收期欠缺科學(xué)性，該地區(qū)廣金錢草最佳采收時(shí)間為10月初。不同產(chǎn)地的氣候、地理環(huán)境等因素對(duì)廣金錢草藥材質(zhì)量有一定的影響[5]，本實(shí)驗(yàn)研究適合廣東梅州地區(qū)。

本試驗(yàn)研究為廣金錢草規(guī)范化生產(chǎn)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)的制定及藥材采收提供依據(jù)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：44-45.

[2] 陳豐連，張文進(jìn)，徐鴻華.廣金錢草適宜采收期研究[J].2010，32(2)：178-180.

[3] 程軒軒，郭楚楚，周鳳燕，等.響應(yīng)面法優(yōu)化廣金錢草中總黃酮的酶法提取工藝[J].華西藥學(xué)雜志，2015，30(1)：70-73.

[4] 程軒軒，郭楚楚，鄒鳳汝，等.響應(yīng)面法優(yōu)化廣金錢草多糖的酶法提取工藝[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2014，31(5)：544-549.

[5] 王海霞，林萍，周文婷，等.氣候及地理環(huán)境對(duì)不同采收期的廣金錢草質(zhì)量的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33(8)：1077-1079.