陳銀華，徐凡，李海霞 (十堰市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所, 湖北 十堰 442000)

李志浩 (湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬東風(fēng)醫(yī)院, 湖北 十堰 442000)

中成藥、保健品非法添加化學(xué)藥品現(xiàn)象在我國(guó)屢見不鮮，多年來(lái)，藥品監(jiān)督管理部門從未停止過對(duì)非法添加的專項(xiàng)整治和打擊，但面對(duì)巨大的市場(chǎng)誘惑，不法商人仍然愿意鋌而走險(xiǎn)，打著中藥治病，純天然保健的旗號(hào)，偷偷在中成藥和保健品中加入西藥成分。非法添加化學(xué)藥品的中成藥和保健品多用于治療慢性病和一些疑難病癥，短期內(nèi)可以起到明顯的療效，但是給人民群眾的用藥安全帶來(lái)巨大風(fēng)險(xiǎn)。譬如在治療難以治愈的痛風(fēng)病等中藥制劑中非法添加激素類、鎮(zhèn)痛抗炎類等化學(xué)藥品，長(zhǎng)期服用會(huì)給患者帶來(lái)不良后果[1]。

吲哚美辛和醋酸潑尼松為臨床上較為常見的非甾體抗炎藥和糖皮質(zhì)激素，其消炎、退熱、鎮(zhèn)痛效果顯著，且價(jià)廉見效快。因此常被不法商人添加進(jìn)用于治療痛風(fēng)病等慢性疾病的中成藥和保健品中，但其副作用極大。為了有效打擊制假行為，筆者采用旨在建立HPLC-二極管陣列法(DAD)，以檢測(cè)出其中非法添加的吲哚美辛和醋酸潑尼松?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器和試藥

Dianox U-3000高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測(cè)器(美國(guó)戴安公司)；XS105十萬(wàn)分之一電子天平(德國(guó)METTLER TLLEDO)；元素型1840A超純水器(重慶摩爾)；吲哚美辛對(duì)照品(批號(hào)100258，含量100%)、雙氯芬酸鈉對(duì)照品(批號(hào):100334-200302，含量:100% )、布洛芬對(duì)照品(批號(hào)100179-200804，含量100.0%)、醋酸潑尼松對(duì)照品(批號(hào)10012-0105)、醋酸地塞米松對(duì)照品(批號(hào)100122-201206)、地塞米松對(duì)照品(批號(hào)100129-201105)、氫化可的松對(duì)照品(批號(hào)100152-200206)均由中國(guó)食品生物制品研究院提供，供含量測(cè)定用；痛風(fēng)靈散1批(市民送樣，稱購(gòu)自私人診所)；乙腈為色譜純(美國(guó)天地)；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

精密稱取上述對(duì)照品適量，加甲醇分別制成濃度為0.2mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。取樣品痛風(fēng)靈散內(nèi)容物，混合均勻，精密稱取約相當(dāng)于一包的量，置100mL量瓶中，加甲醇80mL，超聲提取30min，放冷，用甲醇稀釋至刻度，過濾，濾液作為供試品溶液。

2.2 薄層色譜初篩

取供試品溶液和各對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-冰乙酸(10∶10∶0.2)為展開劑，預(yù)飽和20分鐘，展開，取出，晾干，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，檢出了相應(yīng)的熒光淬滅斑點(diǎn)。見圖1。

圖1 供試品和各對(duì)照品溶液色譜圖

2.3 高效液相色譜條件

色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以庚烷磺酸鈉(庚烷磺酸鈉15.2mg，加三乙胺0.8mL，加水至1000mL，用冰乙酸調(diào)pH值至3.3)-甲醇-乙腈(25∶30∶0.18)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm(全波長(zhǎng)掃描)，柱溫30℃，流速1ml/min，進(jìn)樣10uL。

2.4 線性關(guān)系考察

由于薄層色譜初篩及液相色譜只檢出了吲哚美辛和醋酸潑尼松兩個(gè)成分，因此含量測(cè)定的方法只考慮這兩個(gè)成分。精密量取吲哚美辛對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度；精密量取醋酸潑尼松對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10mL置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述方法測(cè)定，以峰面積(A)對(duì)進(jìn)樣濃度(C)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別計(jì)算吲哚美辛和醋酸潑尼松的回歸方程。吲哚美辛：A=246.9920C-6.6451,r=0.9995。吲哚美辛在0.069～0.691mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性。醋酸潑尼松：A=157.5508C-0.2081，r=0.9997。醋酸潑尼松在0.035～0.352mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，在2.3項(xiàng)的色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算吲哚美辛和醋酸潑尼松的RSD，分別為0.25%和0.30%(n=6)

圖2 供試品與醋酸潑尼松和吲哚美辛對(duì)照品溶液的全波長(zhǎng)匹配

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，在2.3項(xiàng)色譜條件下，每2h測(cè)定一次，連續(xù)測(cè)定7次，結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定，樣品中吲哚美辛和醋酸潑尼松的RSD分別為0.44%和0.67%(n=7)。

2.7 加樣回收試驗(yàn)

取已知含量的樣品(相當(dāng)于0.5包痛風(fēng)靈散)，精密稱取3份，分別加入吲哚美辛對(duì)照品16.8、21.0、25.2mg和醋酸潑尼松6.4、8.0、9.6mg，按2.1項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，以2.3項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，計(jì)算回收率。吲哚美辛的平均回收率為99.0%，RSD為1.68%(n=3)；醋酸潑尼松的平均回收率為98.3%，RSD為1.81%(n=3)。

2.8 樣品的檢驗(yàn)結(jié)果

用2.2和2.3項(xiàng)色譜條件對(duì)該散劑進(jìn)行檢驗(yàn)，該樣品薄層色譜圖中只有兩個(gè)熒光淬滅斑點(diǎn)，其Rf值與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品一致；液相色譜圖中也只顯示兩個(gè)峰，它們的HPLC保留時(shí)間與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品一致，經(jīng)過全波長(zhǎng)光譜的匹配度檢驗(yàn)，與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品的庫(kù)相似度分別為999.81和999.89。見圖2?；究梢源_定為吲哚美辛和醋酸潑尼松。經(jīng)含量測(cè)定，結(jié)果每包痛風(fēng)靈散中含有吲哚美辛42.1mg，醋酸潑尼松16.7mg。

3 討論

3.1 色譜條件的選擇

參考相關(guān)文獻(xiàn)[2～4]，曾試用不同比例的甲醇-水,甲醇-磷酸-水，乙睛-冰醋酸-水，乙睛-水等流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行等度和梯度洗脫分離。經(jīng)過試驗(yàn)，上述流動(dòng)相系統(tǒng)在測(cè)定五種化學(xué)物質(zhì)時(shí)，有的分離度較差，有的理論板數(shù)過低。最終采用了庚烷磺酸鈉(庚烷磺酸鈉15.2mg，加三乙胺0.8mL，加水至1000mL，用冰乙酸調(diào)pH值至3.3)-甲醇-乙腈(25∶30∶0.18)為流動(dòng)相，結(jié)果顯示本法操作簡(jiǎn)便，供試品溶液中組分分離度良好，塔板數(shù)較高。

3.2 含量測(cè)定檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

從兩種物質(zhì)全波長(zhǎng)掃描圖可以看出，吲哚美辛的最大吸收在257nm，醋酸潑尼松的最大吸收在242nm，均在254nm附近有比較大的吸收值，故選擇254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 提取溶劑和提取時(shí)間的選擇

取適量樣品7份，分別加甲醇、60%甲醇、20%甲醇、無(wú)水乙醇、60%乙醇、20%乙醇、水20mL，超聲提取30min，過濾，測(cè)定，結(jié)果用甲醇處理效果最佳。取樣品，加甲醇，分別超聲處理10、20、30、40、50、60min后，測(cè)定，計(jì)算，結(jié)果在30min內(nèi)提取完全。故選擇溶劑甲醇、超聲30min。

3.4 檢驗(yàn)結(jié)果分析

經(jīng)檢驗(yàn)，該散劑薄層色譜只有兩個(gè)熒光淬滅斑點(diǎn)，HPLC基線平整，且只有兩個(gè)色譜峰，初步判斷該散劑中可能不含中藥成分，僅含兩種化學(xué)藥，其薄層Rf值及液相保留時(shí)間與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品一致。對(duì)兩個(gè)峰進(jìn)行二極管陣列紫外光譜檢測(cè)，與吲哚美辛和醋酸潑尼松對(duì)照品匹配。因此可以基本判斷出該假藥非法添加了這吲哚美辛和醋酸潑尼松。下一步將采用HPLC-MASS進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證。

該批樣品為群眾投訴樣品。該樣品標(biāo)注名稱為“痛風(fēng)靈散”，為一個(gè)體醫(yī)生中藥祖?zhèn)髅胤?，處方不公開，無(wú)生產(chǎn)廠家。每日服用兩次，每次1包，患者服用后療效顯著，痛風(fēng)癥狀立即減輕，服用兩天后關(guān)節(jié)紅腫疼痛基本消失，但頭痛、惡心等反應(yīng)較嚴(yán)重，懷疑是藥物的副作用大，遂送檢。經(jīng)檢驗(yàn)，每包中含有吲哚美辛42.1mg，醋酸潑尼松16.7mg，屬非法添加，且劑量過大，長(zhǎng)期服用此類假藥會(huì)造成藥源性疾病，造成嚴(yán)重的毒副作用。

本方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便快捷、環(huán)保安全、成本低廉，適用于基層單位的快速篩查吲哚美辛和醋酸潑尼松的非法添加，有效提高監(jiān)督檢驗(yàn)的效率和靶向性，打擊違法行為。

[參考文獻(xiàn)]

[1]趙曉娟.激素類藥物的不良反應(yīng)[J].遼寧醫(yī)學(xué)雜志，2001,15(6):294～296.

[2]張少敏,陳斌,凌善文,等.非法添加抗痛風(fēng)類化學(xué)藥檢測(cè)方法的研究[J],藥學(xué)服務(wù)與研究，2012,12(3):199～201.

[3]徐軍輝,李存金,王仕平,等.中成藥中非法添加化學(xué)藥品吲哚美辛檢測(cè)方法的研究[J].中國(guó)藥品標(biāo)準(zhǔn),2010,11(6):416～420.

[4]郭宏,張?jiān)螺x.HPLC法同時(shí)測(cè)定抗風(fēng)濕類中成藥中的5種糖皮質(zhì)激素[J].遼寧中醫(yī)雜志,2015,42(9):1721～1723.