霍 行，李 悅，盧燕回，胡成慧，莫映熙，黎起秦，林 緯，袁高慶

（1. 廣西大學農(nóng)學院，廣西 南寧 530004；2. 安康市農(nóng)業(yè)科學研究所，陜西 安康 725021；3. 中國煙草總公司廣西壯族自治區(qū)公司，廣西 南寧 530022）

在我國，煙草作為工業(yè)原料一直被廣泛栽培［1］。但是，長期以來，煙草病害作為影響煙草種植一個重要限制因素，給煙葉生產(chǎn)造成了巨大的經(jīng)濟損失［2］。據(jù)報道，全國16個煙草生產(chǎn)省、自治區(qū)的煙草侵染性病害有65種，其中侵染苗床的就有17種之多［3］。立枯絲核菌（Rhizoctonia solani Kühn）引起的煙草立枯病曾是煙草苗床期的常見病害，但近幾年來逐漸演變?yōu)榇筇锲诓『?，有日益加重的趨勢?-7］。過去幾年對廣西煙草產(chǎn)區(qū)開展的有害生物普查發(fā)現(xiàn)，在廣西80%的煙草主產(chǎn)區(qū)均有煙草立枯病的分布［8-9］。但由于之前煙草立枯病通常被列為次要病害，一直對其缺乏系統(tǒng)研究。該病病原菌寄主范圍甚為廣泛，除造成立枯病外，還可引起很多作物的根腐病、莖基腐病、紋枯病、葉腐（斑）病等，一般以菌絲體或菌核在土壤中或病殘體上越冬，高溫高濕有利于病害發(fā)生，田間地勢低洼、種植密度大、植株生長繁茂地塊發(fā)病尤其嚴重，通常缺乏可靠的抗源［10-13］。立枯絲核菌在煙草上除了侵染莖基部造成立枯外，還可侵染煙草葉片引起靶斑病。蘇燕妮等測試了我國21個主栽煙草品種對靶斑病的室內(nèi)抗病性，未發(fā)現(xiàn)免疫或抗病品種［14］。鑒于煙草立枯病是大田期新上升的病害，發(fā)病流行條件不明確，難以采取有效的防控措施，本研究對煙草立枯病的田間發(fā)生情況展開系統(tǒng)調(diào)查，檢測煙田立枯絲核菌的數(shù)量，分析氣象因素及土壤菌量對該病發(fā)生的影響，并測定煙草品種對立枯病的抗病性，為今后制定煙草立枯病預防對策和控制措施提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試煙草品種云煙97、云煙85、云煙87、貴煙201、安煙2號、粵煙97、畢鈉1號由廣西百色市煙草公司提供，云煙100、云煙108、云煙203、紅花大金元、K326、NC71、G-28由云南大理州煙草公司提供。以上煙草品種均采用吉林盛世泥炭科技科技有限公司生產(chǎn)的全價育苗基質(zhì)（有機質(zhì)+腐殖酸≥50%）育苗。煙草立枯病菌R. solani LC11-6屬于AG4 HG-I菌絲融合群，從廣西煙草（品種為云煙97）立枯病病株中分離獲得，由廣西大學農(nóng)學院植物病理學研究室提供。

1.2 試驗方法

1.2.1 煙草立枯病田間發(fā)生情況調(diào)查 調(diào)查于2015年在廣西百色市靖西縣化峒鎮(zhèn)進行，選擇煙草立枯病常年發(fā)生較為普遍的煙田作為定點調(diào)查田。調(diào)查田塊前作為水稻，煙草品種為云煙97。自煙株團棵期開始病情調(diào)查，采取平行取樣法，每點調(diào)查200株左右，共調(diào)查5點，計1 000株左右。每7 d調(diào)查1次，至采收期末調(diào)查結(jié)束，參考煙草黑脛病的調(diào)查方法記錄煙株發(fā)病株率和病情指數(shù)［15］。

1.2.2 土壤帶菌量的檢測 在調(diào)查病害發(fā)生情況的同時，按照五點取樣法定點采集土壤樣品，每點20 g土樣混勻后置于25℃的恒溫烘箱中24 h，風干后研磨，分別稱取0.1 g均勻地撒在改良的選擇性培養(yǎng)基平板上［15］，置于28℃培養(yǎng)24 h，通過鏡檢確定長出的菌落是立枯絲核菌后，統(tǒng)計每克土壤的菌落數(shù)（CFU/g）。每個處理3次重復，記錄平均值。

1.2.3 回歸方程的建立及擬合分析 從當?shù)貧庀蟛块T獲取氣象資料，根據(jù)調(diào)查時間計算周平均溫度（x1）、周最高溫（x2）、周最低溫（x3）、周平均相對濕度（x4）、周平均降雨量（x5）、周平均風級（x6）、周平均土壤菌源量（x7）和對應病害發(fā)生的病情指數(shù)（y）。運用SAS 9.2 32bit軟件，將7個自變量和因變量y的全部數(shù)據(jù)集合創(chuàng)建數(shù)據(jù)集，采用REG過程對數(shù)據(jù)進行多元回歸分析，編寫SAS程序，根據(jù)輸出結(jié)果中篩選出來的變量和參數(shù)估計建立預測式。利用所建回歸方程計算預測值，建立預測值與實測值的對比圖，檢查擬合情況。

1.2.4 不同煙草品種的抗性鑒定 將14個不同品種的煙草培育至成苗期，選取長勢一致的健株，采用針刺法進行接種。R. solani LC11-6菌株于馬鈴薯葡萄糖瓊脂（Potato Dextrose Agar，PDA）培養(yǎng)基上28℃下培養(yǎng)3 d，用直徑3 mm的打孔器打取菌絲塊，每株莖基部接種1塊，覆土保濕。每個處理3次重復，每個重復6株煙，以接種空白PDA的煙株作為對照。接種后3 d進行病情調(diào)查，參照煙草黑脛病抗性分級標準劃分各品種的抗病性：免疫（I）：病情指數(shù)為0；抗病（R）：病情指數(shù)在25以下；中抗（MR）：病情指數(shù)在25.1～50.0之間；中感（MS）：病情指數(shù)在50.1～75之間；感?。⊿）：病情指數(shù)大于 75［16］。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草立枯病的田間發(fā)生情況

煙草立枯病田間發(fā)生情況如圖1所示。團棵期開始出現(xiàn)立枯病，之后病情呈逐漸加重趨勢；5月中下旬煙草進入打頂期，病情開始逐步趨于穩(wěn)定，發(fā)病率7%左右，病情指數(shù)3.8左右；而6月后煙草進入采收期，煙株的發(fā)病率和病情指數(shù)又有小幅度升高，發(fā)病率的增幅尤為明顯，1、3級病株明顯增多。最后1次調(diào)查的發(fā)病率為12.87%，病情指數(shù)為5.69。

圖1 煙草立枯病發(fā)生動態(tài)

圖2 調(diào)查日期內(nèi)各因素的數(shù)值變化

2.2 相關(guān)因子對煙草立枯病病情的影響

10次調(diào)查中，6類氣象因素（x1～x6）、周平均土壤菌源量（x7）和病情指數(shù)（y）的數(shù)值見圖2。從圖2可以看出，當周平均溫度（x1）穩(wěn)定在20℃以上時，病害開始發(fā)生，此時煙草處于團顆期。煙株進入旺長期后，周平均溫度上升至27℃，之后整個煙株生長期間周平均溫度基本維持在27℃左右。周最高溫（x2）、周最低溫（x3）以及周平均風級（x6）相對也比較穩(wěn)定，無顯著變化。周降雨量（x5）和周平均相對濕度（x4）的波動幅度相對較大，煙株生長前期降雨少，相對濕度在65%左右徘徊。進入生長中后期，降雨量增加，相對濕度超過75%，最高時為83.3%，發(fā)病率和病情指數(shù)都隨之增長。隨著病情發(fā)展，周平均土壤含菌量（x7）急劇增長，從始見病情時每克土中14個病菌菌落迅速增加至成熟期（5月中旬至6月中上旬）的90個菌落，采收后期達到近130個菌落，土壤菌量比發(fā)病初期增加近10倍。

通過SAS軟件對數(shù)據(jù)進行多元回歸分析，發(fā)現(xiàn)有一些變量的回歸系數(shù)不顯著，故對變量進行了篩選。逐步回歸分析共進行2步，建立了煙草立枯病病情指數(shù)和周平均相對濕度與周平均土壤菌源量之間的回歸式，P＜0.0001，回歸式達極顯著水平。方程如下：

式中，y 為病情指數(shù)，x4、x7分別為周平均相對濕度和周平均土壤菌源量。

2.3 檢驗所建回歸式的合理性與擬合情況

根據(jù)繪制出來的實測值與預測值的對比圖（圖3）可以看出，除5月17日的預測值略低于實際值，5月24、31日的預測值略高于實際值以外，其余時間的預測值與實際值都基本重合，回歸式擬合度達99.40%，擬合情況良好。

2.4 14個煙草品種的抗性鑒定結(jié)果

供試煙草品種抗立枯病性鑒定結(jié)果見表1，供試的14個煙草品種全部發(fā)病，未發(fā)現(xiàn)對煙草立枯病的免疫品種，但是各個品種的發(fā)病程度不同，說明不同煙草品種對煙草立枯病的抗性是有差異的。供試品種中，云煙97、紅花大金元、云煙87和云煙100對煙草立枯病的抗性較強，病情指數(shù)分別為3.70、11.11 、12.96和22.22，屬于抗病品種，其中云煙97的發(fā)病煙株病害級別均為1級，云煙87和紅花大金元有少數(shù)煙株病情發(fā)展到5級。云煙203和安煙2號對煙草立枯病的抗性差，發(fā)病率均為100%，病情指數(shù)分別為62.96和85.19，分別屬于中感和感病品種。這兩個品種的煙株病情發(fā)展迅猛，接種僅3 d，安煙2號已有1/3煙株死亡，其余煙株病害程度全部發(fā)展到7級，而云煙203有一半的煙株病情發(fā)展到7級。

圖3 預測值與實測值對比

表1 不同煙草品種抗立枯病鑒定

3 結(jié)論與討論

在廣西，大田期煙草立枯病的始見期在4月中旬的團棵期，發(fā)病株率及病情嚴重程度隨生育期發(fā)展呈遞增趨勢，病害發(fā)生高峰期在6月中下旬的采收期。當煙草處于成熟期時，病情逐步趨于穩(wěn)定，但進入采收期后，因采收煙葉留下的傷口有利于病菌侵染，病情又有所加重。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，這些新增病株多在采收煙葉后留下的傷口處起始發(fā)病，但病原來自土壤中越冬菌源還是田間病株再侵染源尚不清楚。根據(jù)這一消長規(guī)律，對煙草立枯病的防治關(guān)鍵時期除了需抓住團棵期外，還應注意采收始期對采收傷口的處理。

通過逐步回歸分析，構(gòu)建了病情指數(shù)（y）與周平均相對濕度（x4）和周平均土壤菌源量（x7）的回歸式：y = 0.02018x4+ 0.03945x7-1.0054，預測值與實測值擬合度較好。在絲核菌引起的植物病害中，氣象條件對病害發(fā)生影響較大，通常溫、濕度均為關(guān)鍵因素［17，18］。孫樸等建立的水稻紋枯病預測模型中［18］，病情指數(shù)與6月份降水量、7月份降水量、8月上中旬平均氣溫、8月上中旬降水量的相關(guān)性顯著；本研究利用SAS軟件逐步回歸分析所構(gòu)建的預測式只入選了周平均土壤菌源量和周平均相對濕度這兩個變量，未有溫度因素入選。原因可能是本研究的田間病情調(diào)查時間比較集中，調(diào)查期間平均溫度為26.3℃，周平均最低溫21.20℃，周平均最高溫28.9℃，周平均溫度多在25℃至27℃之間，數(shù)值相對比較平穩(wěn)，所以氣溫指數(shù)沒有被篩選為影響病情指數(shù)的顯著因素。煙草立枯病是一種土傳病害，而對于土傳病害，土壤帶菌量往往是影響病害發(fā)生的重要因素之一［19-20］。通過對土壤帶菌量的監(jiān)測可以判斷當?shù)夭『Φ陌l(fā)生趨勢，對病害的預測預報及防治具有重要的指導作用。不過，本研究僅有1年的調(diào)查數(shù)據(jù)，在2016年重新調(diào)查時，因調(diào)查田塊受冰雹和暴雨等惡劣天氣影響，未能獲得完整數(shù)據(jù)進行驗證。

除相對濕度和土壤菌量是影響田間煙草立枯病發(fā)生的主導因素之外，研究還發(fā)現(xiàn)不同煙草品種對立枯病的抗病性存在差異，云煙97、紅花大金元、云煙87和云煙100屬于抗病品種，安煙2號為感病品種，其他多表現(xiàn)為中抗或中感。供試品種中，云煙87、K326、云煙85、紅花大金元、中煙100、云煙97等均屬于我國主栽烤煙品種［21］，除K326和云煙85表現(xiàn)為中抗外，其他主栽品種均表現(xiàn)出較好的抗病性。但在蘇燕妮等對立枯絲核菌引起的煙草靶斑病抗性測定中，除NC297和龍江981表現(xiàn)中抗外，其他煙草品種多為感病或高感［14］。這可能與測試中所使用的菌株不同以及品種抗感劃分標準不一致有關(guān)。由于本試驗所用材料有限，品種抗性篩選結(jié)果不夠全面，為選育出更好的抗病品種，應當收集更多的抗性資源進行測定。另外，試驗中僅對苗期煙株進行了初步的抗性鑒定，獲得的抗病性結(jié)果還需要經(jīng)過大田期驗證。

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