蔣永元 朱璇

上海復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院青浦分院口腔科，上海 201700

口腔扁平苔蘚（OLP）是慢性炎性自身免疫性疾病，常累及頰部、舌及牙齦并伴發(fā)充血、糜爛、潰瘍，若病損經(jīng)久不愈，局部癌變風(fēng)險可大幅上升[1]。目前臨床對于OLP的發(fā)病機(jī)制尚無明確結(jié)論，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，OLP是一種T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病，其中輔助性T細(xì)胞亞群（Th1/Th2）漂移學(xué)說備受關(guān)注[2]。研究發(fā)現(xiàn)，OLP患者病損組織中可見Th17細(xì)胞大量浸潤，表明Th17可能參與了OLP的炎癥免疫反應(yīng)進(jìn)展[3]。為驗證這一假設(shè)，此次研究比較71例OLP患者及30名健康體檢者上述指標(biāo)水平，探討Th1、Th17在OLP發(fā)病機(jī)制中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

入選標(biāo)準(zhǔn)：參照第四版《口腔粘膜病學(xué)》[4]并經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診OLP，簽署書面同意協(xié)議。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其它口腔粘膜或系統(tǒng)性疾病；合并嚴(yán)重感染性疾??；合并其他部位癌前病損或腫瘤；入組前1個月內(nèi)有抗生素或免疫制劑使用史。2015年2月至2016年12月71例患者符合條件，納入患者組；選取同期性別、年齡與患者相近的30名健康體檢者作為NC組。

1.2 檢測方法

抽取兩組受試者入組次日清晨空腹靜脈血5 mL，使用FACSC CantoTMⅡ Flow Cytometer流式細(xì)胞儀（美國BD公司）以及配套Th1、Th17試劑盒，運(yùn)用雙重免疫熒光染色技術(shù)檢測[5]。借助配套CBA Instrument Setup template及Cytometer Setup Beads，使用Cellquest軟件建立獲取模式，讀取細(xì)胞因子檢測數(shù)據(jù)。其中，Th1型細(xì)胞因子包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）以及白細(xì)胞介素-2（IL-2）；Th17型細(xì)胞因子包括IL-17及IL-23。

1.3 分析方法

比較患者組、NC組外周血Th1型細(xì)胞因子及Th17型細(xì)胞因子水平，按照OLP患者臨床類型[6]分非糜爛型（口腔粘膜可見白色條紋但無充血糜爛）；輕度糜爛型（口腔粘膜有白色條紋并伴單灶或多灶小面積糜爛，總面積≤1 cm2）；重度糜爛型（口腔粘膜有白色條紋并伴單灶或多灶小面積糜爛，總面積＞1 cm2），比較各組患者外周血中Th1、Th17水平差異。臨床體征及臨床癥狀再次分組，運(yùn)用Pearson相關(guān)性分析，明確Th1、Th17與患者臨床特征的關(guān)聯(lián)。臨床體征評分方法按照文獻(xiàn)[7]、臨床癥狀評分標(biāo)準(zhǔn)按照文獻(xiàn)[8]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

對本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0進(jìn)行分析，Th1和Th17型細(xì)胞因子水平組間比較采用t檢驗，Pearson法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者組與NC組外周血Th1和Th17檢測結(jié)果

患者組外周血Th1型細(xì)胞因子（TNF-α、IFN-γ、IL2）及Th17型細(xì)胞因子（IL-17、IL-23）水平均高于NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 患者組與NC組外周血Th1和Th17檢測結(jié)果比較（pg/mL，x±s）

2.2 不同臨床類型患者外周血Th1和Th17檢測結(jié)果

隨著患者臨床類型由非糜爛型向輕度糜爛、重度糜爛進(jìn)展，其外周血Th1型細(xì)胞因子、Th17型細(xì)胞因子均逐漸升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床類型OLP患者外周血Th1和Th17檢測結(jié)果比較（pg/mL，x±s）

2.3 相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析示，OLP患者外周血Th1型細(xì)胞因子、Th17型細(xì)胞因子與其臨床類型、臨床體征評分及臨床癥狀評分呈弱正相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

表3 OLP患者外周血Th1和Th17與臨床特征的相關(guān)性分析（r值）

3 討論

多數(shù)研究認(rèn)為，免疫因素在OLP的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色，其中，T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)被認(rèn)為與OLP的發(fā)生密切相關(guān)，且已有大量研究證實(shí)Th1/Th2失衡所致體液免疫及細(xì)胞免疫紊亂與OLP的相關(guān)性，但目前該病的確切發(fā)病機(jī)制尚無全面闡釋[9-10]。

既往研究顯示，OLP病損組織固有層內(nèi)可見大量散在分布的Th1和Th17細(xì)胞，且患者外周血Th1和Th17細(xì)胞比例均顯著升高并與OLP臨床表型具有密切關(guān)聯(lián)[11]?；诩韧芯?，此次分析OLP患者外周血Th1、Th17水平變化，結(jié)果顯示，與健康者相比，OLP患者外周血Th1、Th17型細(xì)胞因子水平均大幅升高，同時，隨著患者病損組織糜爛程度的加劇，其Th1、Th17型細(xì)胞因子水平逐漸升高，且Pearson相關(guān)性分析亦印證了Th1、Th17型細(xì)胞因子與OLP臨床類型、臨床體征評分、臨床癥狀評分的相關(guān)性。

Th1型細(xì)胞因子中，TNF-α是一種促炎性細(xì)胞因子，主要由活化的單核-巨噬細(xì)胞分泌，不僅能夠刺激單核細(xì)胞分泌IL-1、IL-6及趨化因子，還可促使Th細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化[12]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，OLP病損處T細(xì)胞分泌的趨化因子可激發(fā)肥大細(xì)胞脫顆粒作用，促使TNF-α大量釋放，而TNF-α可進(jìn)一步上調(diào)趨化因子分泌，形成瀑布樣效應(yīng)，加劇OLP慢性發(fā)展過程[13]。一項體外研究結(jié)果顯示，OLP局部病損取約有1%的基底膜細(xì)胞內(nèi)IFN-γ mRNA呈陽性表達(dá)[14]，其引發(fā)局部病損的機(jī)制可能與增強(qiáng)粘附分子及主要組織相容性復(fù)合體-Ⅱ表達(dá)有關(guān)，這一連鎖反應(yīng)的形成可能是促使局部炎癥反應(yīng)增強(qiáng)的重要原因。作為一種重要調(diào)節(jié)因子，IL-2可參與損傷、炎癥、宿主免疫反應(yīng)等多個過程，扮演著中性粒細(xì)胞活化劑、T細(xì)胞趨化劑等多種角色，OLP患者外周血IL-2顯著升高的原因可能與TNF-α-TNFR-1信號通路介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)有關(guān)，此外，亦有研究發(fā)現(xiàn)，IL-2、TNF-α在病損部位的大量聚集，也可協(xié)同促進(jìn)Th1細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)進(jìn)展[15]。

Th17細(xì)胞是一種與Th1、Th2細(xì)胞不同分化途徑的獨(dú)立輔助性T細(xì)胞亞群，其產(chǎn)生的特征性促炎癥細(xì)胞因子IL-17，被認(rèn)為是自身免疫性疾病必須的效應(yīng)性、輔助性T細(xì)胞亞群[16]。在自身免疫性疾病中，IL-17主要誘導(dǎo)早期分化與晚期成活增殖兩個階段，且可刺激角化細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等，誘導(dǎo)TNF-α、IL-2大量分泌，促進(jìn)局部炎癥反應(yīng)的增強(qiáng)[17]。此次研究OLP患者外周血內(nèi)亦檢出大量IL-17，說明IL-17也在OLP的免疫病理過程中發(fā)揮了重要作用。OLP患者外周血IL-23水平大幅上升，意味著Th17細(xì)胞穩(wěn)定性破壞、Th17細(xì)胞大量增殖以及區(qū)域聚集，也是加劇局部組織損傷、激活局部微環(huán)境炎癥級聯(lián)反應(yīng)的重要因子[18]。

綜上所述，OLP患者外周血中Th1和Th17均顯著升高，二者均可誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)增強(qiáng)、加劇局部組織損傷，共同促進(jìn)OLP病理生理改變的發(fā)生與發(fā)展。重視外周血Th1和Th17檢測以評估病情，并尋求控制Th1和Th17的靶向治療藥物，有望為OLP的診療提供新的思路。

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