孫艷，黃志宏，陳朝喜*

（1.四川省涼山彝族自治州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所，四川 西昌 615042；2.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川 成都 610041）

巴天酸模又名土大黃、洋鐵酸模、牛西西等，其莖和葉中含有維生素C、胡蘿卜素及鐵、硒、碘等豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，不僅是一種優(yōu)良的飼用牧草，而且在民間常以根和葉入藥，具有清熱解毒、活血止血、通便殺蟲的功效，在治療多種皮膚病、出血癥及各種炎癥方面具有較高的藥用價(jià)值[1]。本研究以大腸桿菌復(fù)制小鼠腹瀉模型，初步探討不同劑量巴天酸模水提物對(duì)感染小鼠胃腸蠕動(dòng)的影響。

1 材料與方法

1.1 藥材、試劑和供試菌株等 巴天酸模于2016年8月份采自四川省紅原縣西南民族大學(xué)青藏高原研究基地，經(jīng)西南民族大學(xué)獸醫(yī)藥理學(xué)與毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室陳朝喜副教授鑒定為蓼科酸模屬植物巴天酸模，采新鮮全草，自然風(fēng)干后粉碎，置于恒溫干燥箱內(nèi)備用。大腸桿菌臨床分離株從一例腹瀉牦牛糞便樣本中采集，經(jīng)前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有較強(qiáng)的致腹瀉作用。

胭脂紅：臨用前用生理鹽水配成1%溶液；瓊脂粉、MH肉湯和胰蛋白胨大豆肉湯：購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，臨用前按照說明書配制備用；主要實(shí)驗(yàn)器材包括小鼠灌胃器、手術(shù)剪、眼科鑷和透明尺；實(shí)驗(yàn)小鼠購(gòu)自成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 巴天酸模水提物的制備 稱量巴天酸模100g，加入10倍體積的去離子水后置于提取裝置上，在加熱回流條件下提取1h，提取3次，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至浸膏狀。使用前取浸膏適量制成1g/mL的懸濁液，加入0.5%羧甲基纖維素鈉混勻后備用。

1.2.2 巴天酸模水提物L(fēng)D50測(cè)定 將63只體重18～25g的小鼠隨機(jī)分成7組，飼養(yǎng)適應(yīng)1周左右后，將巴天酸模水提物按照等比濃度梯度分別灌胃給藥，并在給藥24h內(nèi)觀察和記錄各組小鼠的精神狀態(tài)和死亡狀況，參照改良寇氏法計(jì)算其LD50。

1.2.3 巴天酸模水提物對(duì)大腸桿菌致瀉小鼠胃腸蠕動(dòng)的影響 參考陳奇等[2]方法以臨床分離的牦牛源大腸桿菌新鮮菌液腹腔注射小鼠，復(fù)制大腸桿菌腹瀉模型。模型復(fù)制成功后，小鼠禁食12h。模型組和對(duì)照組每組各10只小鼠，將巴天酸模水提物分別按1/20 LD50（低劑量組）、1/10 LD50（中劑量組）和1/5 LD50（高劑量組）的藥量灌服模型組小鼠，對(duì)照組小鼠以0.1mL/10g體重灌服生理鹽水。15min后，每只小鼠均灌胃含1%胭脂紅的生理鹽水0.2mL，再經(jīng)15min將各組小鼠全部脫臼處死，剖開腹腔，取出胃腸道，剪開附著在腸管上的腸系膜，將腸管拉成直線。以幽門為起點(diǎn)，測(cè)量胭脂紅在腸道內(nèi)的移動(dòng)距離和小腸（幽門至盲部）的全長(zhǎng)，按照公式“胭脂紅移動(dòng)距離占小腸全長(zhǎng)的百分比=胭脂紅的移動(dòng)距離/小腸全長(zhǎng)×100%”計(jì)算，即得每組小鼠的腸推進(jìn)率，比較各組之間的差異性。

2 結(jié)果

2.1 巴天酸模水提物L(fēng)D50的測(cè)定 各組小鼠給藥后，除了高劑量組部分小鼠出現(xiàn)焦慮、多動(dòng)、排便次數(shù)相對(duì)增多等特征外，其他組小鼠沒有任何異常，因此本試驗(yàn)未能測(cè)到其LD50。為避免后續(xù)試驗(yàn)中藥物存在蓄積毒性，本研究對(duì)24h內(nèi)未發(fā)生死亡的各組小鼠繼續(xù)按照同樣給藥方法給藥1周，除了高劑量組小鼠死亡1只外，其他各組小鼠與24h內(nèi)給藥的表現(xiàn)基本一樣。

對(duì)高劑量組死亡小鼠進(jìn)行剖檢觀察和病理學(xué)觀察，發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)器官心、肝、脾、肺、腎均未見任何眼觀變化；病理組織學(xué)結(jié)果顯示：少數(shù)心肌細(xì)胞明顯腫大，胞漿消失，胞漿有大量空泡或裂隙，殘存的胞漿呈顆粒狀或絲網(wǎng)狀，細(xì)胞核正?；蛎黠@腫大，染色質(zhì)溶解呈空泡狀，病變心肌細(xì)胞呈散在分布或2～4個(gè)小灶狀分布；腎臟皮質(zhì)部大量腎小管上皮細(xì)胞腫脹，胞漿淡染，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不一的空泡，殘存的胞漿呈顆粒狀或絲網(wǎng)狀，多數(shù)病變細(xì)胞的細(xì)胞核溶解消失，病變腎小管多呈形狀不規(guī)則的散在分布，病變腎小管超過50%；脾臟、肺臟和肝臟未觀察到病變。

2.2 巴天酸模水提物對(duì)大腸桿菌致瀉小鼠胃腸蠕動(dòng)的影響 小鼠大腸桿菌腹瀉模型復(fù)制成功后，小鼠均出現(xiàn)不同程度的腹瀉現(xiàn)象。在給藥巴天酸模水提物后，胭脂紅在各組小鼠的腸推進(jìn)率如圖1所示。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，大腸桿菌腹瀉模型組小鼠的腸推進(jìn)率為23.29%，低、中、高劑量組小鼠的腸推進(jìn)率分別為35.72%、37.10%、48.25%。與腹瀉模型組相比，高劑量組的腸推進(jìn)率差異極顯著，低劑量組和中劑量組差異顯著。

圖1 不同劑量巴天酸模對(duì)小鼠腸推進(jìn)率的影響

3 結(jié)論與分析

前期體外抗菌試驗(yàn)結(jié)果表明，從紅原縣采集的巴天酸模等幾種蓼科植物水提物對(duì)大腸桿菌的抑制作用存在不同程度的差異性（試驗(yàn)結(jié)果未發(fā)表）?；诖耍驹囼?yàn)擬通過體內(nèi)抗腹瀉試驗(yàn)來驗(yàn)證其效果是否與體外一致。然而，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著巴天酸模水提物劑量的升高，各組小鼠的腸推進(jìn)率也隨著升高，說明巴天酸模水提物可以引起腹瀉小鼠的胃腸蠕動(dòng)增加。分析本試驗(yàn)出現(xiàn)此種結(jié)果的原因，主要有以下幾點(diǎn)：

（1）巴天酸?；瘜W(xué)成分和濃度的影響：Demirezer等[3]報(bào)道蒽醌是酸模屬乃至蓼科植物中最具特征性的一類成分，而蒽醌類具有較強(qiáng)的下瀉作用[4-5]。（2）巴天酸模采集時(shí)間和環(huán)境因素：本試驗(yàn)巴天酸模的采收時(shí)間為多雨的夏季，采收時(shí)植株內(nèi)的化學(xué)成分對(duì)藥材質(zhì)量具有影響，因此后續(xù)工作要進(jìn)一步證實(shí)并確定最佳采收期。此外，巴天酸模的生長(zhǎng)環(huán)境對(duì)其質(zhì)量的影響也較大，本試驗(yàn)藥材樣本采集于無污染的高原地區(qū)，避免了有害元素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響[6-11]。（3）胭脂紅灌胃量和小鼠處死時(shí)間也會(huì)對(duì)試驗(yàn)結(jié)果造成一定的誤差，加上剪取腸管時(shí)過度用力牽拉導(dǎo)致長(zhǎng)度測(cè)量結(jié)果不準(zhǔn)確，同樣會(huì)引起誤差。

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