華仙麗 ，李敬河 ，梁愛芬 ，雷亞麗 ，隋洪

(1、東莞康華醫(yī)院，廣東 東莞 523080；2、東莞市石碣醫(yī)院，廣東 東莞 523290)

地中海貧血（Thalassemia）是一組溶血性貧血病，呈現(xiàn)常染色體隱性遺傳規(guī)律，是由于人體珠蛋白基因突變或者缺失而導致某種珠蛋白鏈合成障礙，造成α，β-珠蛋白肽鏈合成速率的不平衡而導致的溶血性貧血。地貧為世界上發(fā)病率最高、危害性最大的單基因遺傳性疾病之一。據(jù)統(tǒng)計，廣東省人群中α，β地貧基因的攜帶率高達11.07%，是地貧的高發(fā)區(qū)[1]，地中海貧血被列為廣東省出生缺陷重點干預(yù)病種。東莞市地處珠三角，人口結(jié)構(gòu)復雜，聚居了南方各省務(wù)工人員，有較復雜的基因背景。為此，作者對本地區(qū)疑似地貧的831名患者進行了α與β地貧的基因診斷，檢測外周血，以期獲得本地區(qū)地中海貧血病分布特征，為地貧的防控和降低出生缺陷積累資料。現(xiàn)報告如下：

1 資料與方法

1.1 標本來源 2016年1月至2017年7月，在東莞康華醫(yī)院就診的門診和住院患者。平均紅細胞體積 （MCV）＜82fL和 （或）平均血紅蛋白含量（MCH）＜27pg做為初篩陽性指標[2]，共 831例標本。其中男259例，女572例，年齡1月～84歲，平均年齡28.59歲。其中368例進行血紅蛋白電泳檢測，HBA2＜3.5，HBF＜3.0(孕婦＜5.0) 檢測 α 地貧基因，HBA2＞3.5同時檢測α和β地貧基因[3]。463例患者未做血紅蛋白電泳檢測，血常規(guī)初篩陽性，同時檢測α和β地貧基因。

1.2 樣本采集和處理 抽取患者外周血2ml，EDTA-K2抗凝全血，及時送檢，置于2～8℃冰箱中保存并于一周內(nèi)檢測。

1.3 儀器 ABI 2720基因擴增儀、DYY-8電泳儀、SHA恒溫水浴搖床等。

1.4 試劑 采用深圳益生堂公司生產(chǎn)的地中海貧血基因檢測試劑盒。嚴格按照試劑說明書進行操作與結(jié)果判讀。

1.5 檢測方法

1.5.1 缺失型α-地中海貧血基因檢測采用跨越斷裂點的PCR技術(shù)(也稱裂口PCR，Gap-PCR)結(jié)合瓊脂糖電泳技術(shù)，檢測東南亞型缺失(--SEA)、右側(cè)缺失 (-α3.7)、左側(cè)缺失 (-α4.2)和泰國型缺失(--THAI)。

1.5.2 非缺失型α-地中海貧血基因采用PCR-膜反向點雜交技術(shù)(PCR-RDB)檢測3種非缺失型α地中海貧血突變（Hb WS、Hb CS與Hb QS）

1.5.3 β地中海貧血基因檢測采用PCR-膜反向點雜交技術(shù)(PCR-RDB)檢測17種基因位點突變，分別是 CD41-42、IVS-2-654、-28、CD7l-72、CD17、βE、CD31、CD27/28、IVSI-1、CD43、-32、-29、-30、CD14-15、CAP、Int、IVS-1-5。

2 結(jié)果

831例受檢標本中，檢測到有基因改變（α及β地貧）的有625例，占總檢測對象的75.21%，⑴α-地貧基因檢測結(jié)果檢出α地中海貧血基因攜帶者412例；檢出率為 49.58%，其中--SEA/αα 302例，占α地中海貧血所有突變類型的73.30%，是東莞地區(qū)α地中海貧血主要類型，檢出α雜合子391例，HbH 21例。α雙重雜合子21例。α基因型分布見表1；⑵β-地貧基因檢測結(jié)果 檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，檢出率為29.24%。檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，其中CD41-42/N 90例、βIVS-2-654/N 68例、CD17/N 35例、-28/N 30例，4種β-地中海貧血基因突變共217例，占所有β-地中海貧血突變類型的91.77%。檢出2例復合型β-地中海貧血，1例IVS-2-654純合子。β基因型分布見表2；⑶檢測到αβ復合地貧30例，基因型分布見表3。

3 討論

地中海貧血是一種常染色體隱性遺傳病，只在純合子（aa）時才發(fā)病，基因攜帶者（Aa）通常為正常表型，不需要進行治療。部分地貧基因攜帶者并不知道自己是攜帶者，易被忽略。同型攜帶者婚配的下一代有1/4的機會患重癥地中海貧血，出現(xiàn)嚴重貧血癥狀。α地中海貧血的HbBarts水腫胎多在妊娠晚期或出生后數(shù)小時內(nèi)死亡，嚴重影響母親的身心健康；HdH病終身輕度或重度貧血和肝脾腫大，但個體差異較大，嚴重者類似重型β地中海貧血癥[4]，嚴重影響患者的生存質(zhì)量。重型β地中海貧血由于幾乎不能合成正常的珠蛋白，貧血嚴重，需要靠輸血結(jié)合除鐵劑治療維持生命，不接受治療的重癥患兒常常因發(fā)育遲緩而呈典型的“地貧面容”，常在五歲以前因嚴重貧血或繼發(fā)感染在兒童期死亡[5]，為家庭和社會帶來沉重的精神和經(jīng)濟負擔。目前對攜帶者檢查及產(chǎn)前基因診斷是唯一防止重癥患兒出生有效措施。所以應(yīng)用DNA分析技術(shù)對該病進行早期產(chǎn)前診斷并選擇性終止妊娠防止重型地中海貧血患兒的出生，是目前國際上公認的首選辦法，有著重要的優(yōu)生學意義[6]。

表1 α-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表2 β-地中海貧血各基因突變類型及比例(n，%)

表3 αβ復合型地中海貧血檢測結(jié)果

本實驗以MCV<82fL和 （或）MCH<27pg做為初篩陽性指標，初篩陽性的831例標本，檢測到有基因改變（α及β基因）的有625例，占總檢測對象的75.21%，檢出α-地中海貧血基因攜帶者412例，占基因陽性者65.92%；檢出β-地中海貧血基因攜帶者243例，占基因陽性者38.88%；其中α及β復合地貧30例，占基因陽性者4.8%。

在831例受檢人群中，共檢出標準型--SEA/αα302例，占檢出α-地中海貧血的73.30%，是東莞地區(qū)α-地中海貧血的主要類型。檢出靜止型62例， 其中-α3.7/αα 42 例，-α4.2/αα20 例， 分別占α-地中海貧血突變類型的10.19%及4.85%。與何怡等[7]的報道相似。 數(shù)據(jù)顯示，--SEA/、-α3.7/和-α4.2/最常見的3種基因缺失類型，占α地貧的91.99%（379/412）。另外本數(shù)據(jù)還檢出--THAI攜帶者 5 例，α 點突變（WS、CS、QS）攜帶者 28 例，檢出HbH 21例。雖然α地貧大部分的患者可以用Gap-PCR方法進行診斷，但也不能忽視點突變型α地貧，因為點突變型血紅蛋白H病 （如--SEA/αCSα，--SEA/αQSα） 的貧血癥狀比缺失引起的血紅蛋白H病更嚴重。

不同地區(qū)、不同種族的人群常見β基因突變類型存在差別[6，7]。本實驗檢出10種β-地中海貧血基因突變類型，CD41-42/N(90 例，37.04%)、IVS-2-654/N(68 例，27.98%)、CD17/N(35 例，14.40%)、-28/N(30 例，12.35%)共占 91.77%(223/243)，說明這 4種突變類型是東莞地區(qū)最常見的β基因突變類型，與廣東廣州、深圳地區(qū)同類研究結(jié)果相似[9-11]。與廣東中山、梅州、汕頭地區(qū)[12-14]的β地貧的攜帶類型有區(qū)域性差別。迄今為止，中國人群已發(fā)現(xiàn)30余種β珠蛋白基因的點突變，本實驗檢測的17種基因型覆蓋了我國β突變類型的95%以上[15]，本實驗所用方法（PCR-RDB）無法檢出缺失型β-地中海貧血和其他少見的β突變類型。因此，在產(chǎn)前檢查中對于地貧初篩陽性，HbA2升高提示存在β地貧，而常規(guī)PCR-RDB方法未檢測到突變者要進行測序分析，避免罕見突變β地貧患者的漏診，從而避免罕見突變引起重型β地貧患兒的出生[16]。

在831例受檢人群中，發(fā)現(xiàn)α及β復合地中海貧血30例，占基因陽性者4.8%，在表型篩查中，α及β個體的HbA2值在3.5至6.8之間，因此，臨床上易誤診為單一的β地貧攜帶者，產(chǎn)前診斷中若僅進行β-地貧基因診斷，忽視α-地貧基因診斷，會導致重癥α地貧患兒的出生[17]。因此，在HbA2升高的可疑地貧人群中，有必要α和β基因一起檢測，以免漏檢α和β地貧基因攜帶情況。

由于東莞地區(qū)人群多來自廣東，廣西，湖南，海南等地貧高發(fā)地區(qū)，開展地貧的宣傳教育和大規(guī)模人群篩查，對指導優(yōu)生優(yōu)育有著重要意義。本研究結(jié)果有助于更深入地了解東莞地區(qū)地中海貧血基因突變的類型、頻率和分布，也為在當?shù)亻_展地貧防治知識的宣傳、遺傳咨詢、產(chǎn)前診斷、防止重癥地貧患兒的出生等工作提供有力的支持。

[1]杜傳書.地中海貧血研究的現(xiàn)狀和未來[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志，1996，13（5）：257-258.

[2]張之南.血液病診斷及療效標準[M].第2版.北京：科學出版社，1998：11.

[3]徐湘民.地中海貧血預(yù)防控制操作指南[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2011：55-58.

[4]陸國輝.產(chǎn)前遺傳病診斷[M].廣州：廣東科技出版社，2002：371.

[5]蘇金玉，翟慧敏.β地中海貧血治療的研究進展[J].廣東醫(yī)學，2011，32（15）：2063-2066.

[6]Modell B，Darlison M.Global epidemiology of haemoglobin disorders and derived service indicators[J].Bull World Health Organ，2008，86：480-487.

[7]何怡，婁季武，唐莉，等.東莞地區(qū)地中海貧血產(chǎn)前篩查及產(chǎn)前診斷的研究[J].中華臨床醫(yī)師雜志，2013，7（16）：7597-7599.

[8]Nishank SS，Ranjit M，Kar SK，et al．Molecular variants and clinical importance of beta-thalassaemia traits found in the state of Orissa，India[J]．Hematology，2009，14(5)：290-296．

[9]Firdous N，Gibbons S，Modell B．Falling prevalence of beta-thalassaemia and eradication of malaria in the Maldives[J]．J Community genet，2012，2(3)：173-189．

[10]褚玉新，王曉春，胡朝暉.廣東省β地中海貧血基因突變類型研究[J]．中國地方病學雜志，2010，29（2）：162-166.

[11]袁暉，吳維清等．深圳地區(qū)育齡人群地中海貧血基因型分布調(diào)查[J].中山大學學報（醫(yī)學科學版），2012，33（4）：553-557.

[12]黃健云，莫和國，等.中山市小欖地區(qū)β-地中海貧血產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷狀況[J].廣東醫(yī)學，2016，37(11)：1695-1698.

[13]吳艷麗.梅州地區(qū)育齡人群地中海貧血基因的檢測與分析[J].國際檢驗醫(yī)學雜志，2015，36(4)：442-443.

[14]藍柳燕，王君，林漫燕.地中海貧血患者基因檢測結(jié)果分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學雜志，2011，29（3）：212-214.

[15]陸國輝，徐湘民.臨床遺傳咨詢[M].北京：北京大學出版社，2007：240-244.

[16]杜麗，尹愛華，張彥等.2171例地中海貧血產(chǎn)前基因診斷回顧性分析[J].國際婦產(chǎn)科學雜，2012，39（2）：208-210.

[17]熊符，婁季武，魏小鳳，等.廣西地區(qū)79例β-地中海貧血復合α-地中海貧血患者血液學特征分析 [J].中華血液學雜志，2012，33（10）：856-860.