劉圓方，樊宏偉，高改云，倪猛，李靜

(南陽市中心醫(yī)院消化內(nèi)科一病區(qū)，河南 南陽473000)

乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）可通過多種途徑侵入人體，進而誘發(fā)多種感染，而其感染結(jié)果常取決于患者的年齡。另外，相關(guān)研究[1]發(fā)現(xiàn)宿主免疫因素也在HBV的感染過程中具有重要地位。肝臟出現(xiàn)病變時，肝細胞死亡后新的肝細胞再生，其刺激再生體液主要來自肝外組織、肝臟以及肝內(nèi)有肝細胞生長因子（Hepatocyte growth factor，HGF）和胰島素生長因子。劉哲[2]的研究已證實HGF可加強對肝損傷的保護并可作為肝損傷的重要判斷指標。

相關(guān)資料[3]顯示血管的成熟和新生在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中作用顯著，其中血管內(nèi)皮生長因子受體（Vascular endothelial growth factor，VEGFR）-1、VEGFR-2、VEGF及HGF均于血管新生具有密切聯(lián)系。肝臟具有較強血液運輸能力，其相關(guān)因子的調(diào)控作用對于維持肝臟的正常功能具有重要作用。上述因子關(guān)于肝癌的研究較多，但關(guān)于乙肝的相關(guān)研究相對較少。因此，本研究探究了VEGFR-1、VEGFR-2和HGF表達情況與乙肝發(fā)病相關(guān)性分析及作用機制，取得了較好的結(jié)果?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取我院在2016年1月至2017年7月期間收治的、符合納入標準的CHB患者80例。CHB患者年齡22~74歲，平均年齡 （37.25±10.17）歲；男性57例，女性23例；根據(jù)分組標準分為：⑴抗病毒組（n=14）：HBeAg 陽性（或陰性）患者經(jīng)我院治療后ALT恢復(fù)正常，HBeAg血清轉(zhuǎn)換，PCR檢測未發(fā)現(xiàn)HBV DNA；⑵HBeAg陽性組（n=24）：血清 ALT 升高＞60U/L，抗-HBe 陰性，肝組織學檢查肝炎病變；⑶HBeAg 陰性組（n=24）：HBeAg陰性，抗-HBe陰性或陽性，HBsAg和HBV DNA陽性，血清 ALT 異常＞60U/L；⑷肝衰竭組（n=18）：符合中華醫(yī)學會肝病學分會及中華醫(yī)學會感染病學分會聯(lián)合制定的肝衰竭診療指南[4]。所有病例均排除酒精性肝炎、脂肪性肝炎、肝炎病毒感染、藥物性肝炎及其他疾病。同期選擇我院門診體檢并注射乙肝疫苗者22例（對照組），其中男性15例，女性 7例；年齡 24~47歲，平均年齡（28.13±10.52）歲；對照組患者肝功能均正常，無肝炎病毒感染，無急、慢性疾病。本研究獲我院倫理委員會批準通過，所有患者及其家屬均知情同意，并簽署相關(guān)知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血清HBVM檢測 定量檢測使用免疫熒光分析法檢測血清HBVM濃度；定性檢測使用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測血清HBVM濃度。試劑盒購于深圳匹基生物工程公司。

1.2.2 HBV DNA檢測 熒光定量PCR法檢測HBV DNA水平，試劑盒購于南京建成生物研究所。

1.2.3肝功能檢測 全自動生化分析儀 （型號OLYMPUSAU，美國GE公司生產(chǎn)）檢測患者肝功能。

1.2.4 HGF檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測HGF水平，試劑盒購于美國Bio-Rad公司。

1.2.5 VEGFR-1及VEGFR-2檢測 使用我院液相懸浮芯片系統(tǒng)（型號Luminex200，德國西門子公司生產(chǎn)），對血漿樣本進行檢測，相關(guān)細胞因子試劑盒均購于美國Bio-Rad公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0，計量資料以平均值±標準差表示，運用t/F檢驗判斷其差異程度；計數(shù)資料以構(gòu)成比形式表示，運用χ2/Fisher確切概率法檢驗判斷其差異程度，采用Spearman等級相關(guān)檢驗其相關(guān)性，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平 五組VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平差異均具有統(tǒng)計學意義（F=7.50、6.75、27.84，P<0.01）；組間比較發(fā)現(xiàn)抗病毒組VEGFR-1水平均低于HBeAg陽性組、HBeAg陰性組及肝衰竭組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；對照組VEGFR-2及HGF均低于抗病毒組、HBeAg陽性組、HBeAg陰性組及肝衰竭組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；抗病毒組HGF水平均低于HBeAg陽性組、HBeAg陰性組及肝衰竭組，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；HBeAg陽性組HGF水平均低于HBeAg陰性組及肝衰竭組，差異具有統(tǒng)計學意義 （P<0.05）；HBeAg陰性組HGF水平均低于肝衰竭組，差異具有統(tǒng)計學意義 （P<0.05），見表 1。

2.2 病毒載量與VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平 高病毒載量組的VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平均高于低病毒載量組，差異具有統(tǒng)計學意義（t=11.14、10.98、2.72，P<0.01），見表 2。

2.3 VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平與肝功能指標、HBV DNA的相關(guān)性 經(jīng)Spearman等級相關(guān)檢驗分析發(fā)現(xiàn)，VEGFR-1、VEGFR-2及HGF與ALT、AST 及 Tbil均呈正相關(guān)關(guān)系 （r=0.29、0.52、0.37、0.48、0.59、0.70、0.53、0.55、0.33，P＜0.05）；VEGFR-1、VEGFR-2及HGF與HBV DNA無相關(guān)性（r=0.13、0.19、0.15，P＞0.05）；VEGFR-1 與 VEGFR-2 及 HGF呈正相關(guān)關(guān)系 （r=0.53、0.68，P＜0.05）；VEGFR-2 與HGF 呈正相關(guān)關(guān)系（r=0.47，P＜0.01）。

表1 各組VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平(x±s，pg/ml)

表2 病毒載量與VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平(x±s，pg/ml)

3 討論

乙型病毒性肝炎是由HBV引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞯囊环N疾病。此外，其還可能引起以腎臟為主的其它器官損害。據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全球約20億人曾感染乙肝病毒，其中2.4億人為慢性乙肝病毒感染者，每年約有65萬人死于乙肝病毒感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝細胞癌(HCC)[5]。全球肝硬化和HCC患者中，由乙肝病毒感染引起的比例分別為30%和45%[6]。由此可見，乙肝已成為嚴重威脅人類健康的世界性疾病，也是我國當前流行最為廣泛、危害性最嚴重的一種疾病。

乙肝發(fā)展的主要基礎(chǔ)是血管新生。VEGF是調(diào)節(jié)血管新生最特異的細胞因子，亦是作用最強的因子，其可與VEGFR有效結(jié)合并發(fā)揮作用，進而調(diào)節(jié)內(nèi)皮細胞增殖。HCG是具有促進細胞增殖和分裂的多功能細胞因子，有刺激體內(nèi)血管的再生，對某些腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移和浸潤同樣具有重要影響作用[6，7]。VEGF及HGF因均參與腫瘤血管的心聲，故與肝癌血管增生過度具有密切關(guān)系，此外在血管成熟過程中同樣具有類似相同作用，進而存在出現(xiàn)一定的協(xié)同作用，進一步調(diào)控血管生成和血管內(nèi)皮的通透[8]。但上述因子在肝癌的研究較多，關(guān)于乙肝的相關(guān)研究相對較少。故此，本研究探究了VEGFR-1、VEGFR-2和HGF表達情況與乙肝發(fā)病相關(guān)性分析及作用機制。

本研究發(fā)現(xiàn)五組 VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；高病毒載量組的VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平均高于低病毒載量組，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.01）。上述結(jié)果提示隨著乙肝的病毒的浸潤及程度的加深，VEGFR-1、VEGFR-2及HGF水平也逐漸升高。我們認為VEGFR-1、VEGFR-2及HGF具有成為評價乙肝發(fā)展程度的生物學治療的重大潛力。隨著乙肝程度的加深，VEGF表達升高，進而誘導(dǎo)相應(yīng)血管新生，形成一個循環(huán)[9]。VEGFR-1、VEGFR-2均為VEGF受體，VEGFR-1主要在血管內(nèi)皮細胞和巨噬細胞上表達，VEGFR-2主要在肝細胞、肝癌細胞及血管內(nèi)皮細胞上表達，鐘武[10]的研究發(fā)現(xiàn)肝癌組織的VEGFR-1、VEGFR-2表達率顯著高于癌旁組織，這提示VEGFR-1、VEGFR-2在腫瘤組織的發(fā)展過程中具有重要作用。HGF最先在重型肝炎患者中純化，并逐漸在肝硬化幾慢性肝炎患者的腹水中發(fā)現(xiàn)，各種肝臟疾病均可誘發(fā)HCG的表達，Kanazawa H[11]認為肝病患者HCG水平的變化可有效反映肝細胞修復(fù)和壞死的程度。肝硬化和慢性重癥肝炎患者因肝臟代謝能力下降HCG的被清除率也隨之下降，此外一些相關(guān)炎性因子的濃度升高刺激非實質(zhì)細胞加速合成HGF，進而導(dǎo)致 HCG 含量升高[12，13]。

經(jīng)Spearman等級相關(guān)檢驗分析發(fā)現(xiàn)，VEGFR-1、VEGFR-2及 HGF 與 ALT、AST 及 Tbil均呈正相關(guān)關(guān)系 （P＜0.05）；VEGFR-1 與 VEGFR-2 及HGF 呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.05）；VEGFR-2 與 HGF 呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。 上述結(jié)果提示，VEGFR-1、VEGFR-2及HGF可作為判斷乙肝疾病發(fā)展和預(yù)后的參考指標。肝臟出現(xiàn)炎癥時，在多種炎癥因子的刺激下可刺激肝星狀細胞，并刺激VEGFR-1、VEGFR-2及HGF的合成[14]。此外，肝細胞產(chǎn)生的胰島素生長因子也可刺激HCG的生成。因肝損傷好轉(zhuǎn)后，激活的星狀細胞可出現(xiàn)自發(fā)逆轉(zhuǎn)，HCG水平隨之下降，因而，臨床常把HCG作為肝損傷的評價指標之一[15]。

綜上所述，VEGFR-1、VEGFR-2和 HGF與乙肝發(fā)病密切相關(guān)。

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