劉亮亮，黃 強(qiáng)，劉臣海，劉 振，齊 燦

膽管癌是一種缺乏早期診斷，膽汁異質(zhì)性的惡性腫瘤。但是其發(fā)病機(jī)制仍很大程度上未知。早期膽管癌一般無(wú)癥狀，并且通常在晚期階段被診斷[1]。白細(xì)胞介素6(interleukin-6 , IL-6)是一種多功能的細(xì)胞因子, 通過(guò)與細(xì)胞膜的受體(IL-6R)結(jié)合后可作用于多種靶細(xì)胞, 近年來(lái)研究[2]顯示IL-6及IL-6R對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、疾病的病理進(jìn)程及病情嚴(yán)重程度均有影響。但關(guān)于其在膽管癌組織中的表達(dá)情況及其與膽管癌的臨床病理的關(guān)系尚未報(bào)道。該研究利用Western blot方法檢測(cè)兩種蛋白在膽管癌中的表達(dá)，并對(duì)其表達(dá)意義進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1病例資料收集安徽醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院2009年5月～2011年7月手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)的膽管癌及癌旁的標(biāo)本40例。所有患者術(shù)前未進(jìn)行放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療，其中男23例，女17 例，年齡41～80(61.9±8.6) 歲。上段膽管癌(肝門(mén)部膽管癌) 24例，中下段膽管癌16 例。經(jīng)病理檢查證實(shí)屬高分化腺癌14例，中低分化腺癌26例，手術(shù)中探查及術(shù)后病理切片證實(shí)無(wú)癌周及遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者16例，已發(fā)生轉(zhuǎn)移者24 例。按照肝外膽管癌TNM 分期進(jìn)行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期15例，Ⅲ～Ⅳ期25例。所有患者行膽管癌根治性手術(shù)R0切除。

1.2Westemblot法檢測(cè)IL-6、IL-6R蛋白表達(dá)水平過(guò)蛋白酶抑制劑處理膽管癌及癌旁組織提取總蛋白，之后經(jīng)過(guò)上樣、電泳、轉(zhuǎn)膜、封閉、孵育后，最終經(jīng)化學(xué)發(fā)光、顯影、定影后，對(duì)膠片進(jìn)行掃描。通過(guò)UVP 凝膠圖像處理系統(tǒng)與Abworks 4.6軟件分析目的條帶與β-actin 條帶灰度值之比來(lái)表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)水平?？?IL-6、IL-6R一抗稀釋濃度為1 ∶200;抗-Actin 一抗稀釋濃度為1 ∶500; 二抗稀釋度為1 ∶5 000。

1.3隨訪采用電話隨訪或信訪。40例均進(jìn)行了隨訪，通過(guò)隨訪獲取生存情況后，繪制生存曲線，分析IL-6及IL-6R在膽管癌組織中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，生存率的計(jì)算采用Kaplan-Meier法，并作Log-Rank檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1IL-6及IL-6R在膽管癌及癌旁組織中的表達(dá)通過(guò)Western blot法檢測(cè)40例膽管癌標(biāo)本中IL-6及IL-6R的表達(dá)水平，結(jié)果通過(guò)Western blot分析，IL-6R的灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.780±0.120)和(0.158±0.059)(P<0.05)；IL-6灰度值在膽管癌組織和癌旁組織分別為(0.480±0.112)和(0.058±0.010)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖1。

表1 膽管癌組織中IL-6及IL-6R蛋白的表達(dá)與臨床病理關(guān)系±s)

圖1 膽管癌組織與癌旁組織中的受體表達(dá)情況

2.2膽管癌組織中IL-6及IL-6R表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系IL-6及IL-6R表達(dá)水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，且呈正相關(guān)性；在低分化組中表達(dá)明顯高于高中分化組，T1+T2期分組中表達(dá)水平要明顯低于T3+T4期分組，淋巴轉(zhuǎn)移組表達(dá)水平要高于未轉(zhuǎn)移組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.3IL-6及IL-6R表達(dá)水平與膽管癌預(yù)后的關(guān)系在40例膽管癌患者中IL-6及IL-6R高表達(dá)的26例，低表達(dá)的14例。Kaplan-Meier 生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達(dá)者的中位生存期為25.30個(gè)月，生存率為7.6%,26例患者中僅2例存活；IL-6及IL-6R低表達(dá)者的中位生存期為57.00個(gè)月，生存率為35.7%，14例患者中5例存活，經(jīng)Log-Rank檢驗(yàn)，顯示IL-6及IL-6R高表達(dá)者與低表達(dá)者生存率相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.080，P=0.043) ，其中生存分析的截尾時(shí)間為60個(gè)月。見(jiàn)圖2。

3 討論

膽管癌是一種來(lái)源于膽管上皮的惡性腫瘤，癌變的過(guò)程中炎癥因子在這個(gè)過(guò)程中發(fā)生了重要的作用，同時(shí)在臨床診治中硬化性膽管炎被廣泛認(rèn)為是一種癌前病變，增加了膽管癌發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)[3]。而白細(xì)胞介素在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要的作用[4]，本研究探討的IL-6被認(rèn)為是與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的炎癥因子，國(guó)外多項(xiàng)研究[4]結(jié)果顯示IL-6能夠促進(jìn)多種腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移以及影響患者的預(yù)后，例如食道癌等。然而IL-6 的多種生物學(xué)活性是通過(guò)IL-6R 介導(dǎo)的,IL-6和IL-6R 形成復(fù)合物后發(fā)揮其生物學(xué)活性。IL-6和IL-6R間有相互協(xié)同的作用, 其異?？捎绊懨庖摺⒃煅蛢?nèi)分泌系統(tǒng)功能紊亂, 甚至誘發(fā)惡性腫瘤。

圖2 膽管癌組織中表達(dá)IL-6及IL-6R表達(dá)水平

國(guó)外已有文獻(xiàn)[5]在血清學(xué)水平檢測(cè)了胃癌患者中血清IL-6水平，顯示胃癌患者血清IL-6水平明顯增高，并指出IL-6是一種診斷胃癌的潛在指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)膽管癌組織學(xué)水平研究結(jié)果顯示IL-6及IL-6R表達(dá)水平與腫瘤分化程度，TNM分期和淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，且呈正相關(guān)性，推測(cè)腫瘤的惡性程度越高，其表達(dá)水平越高。40例患者通過(guò)手術(shù)后，根據(jù)隨訪結(jié)果，應(yīng)用Kaplan-Meier生存分析顯示生存分析顯示IL-6及IL-6R高表達(dá)者生存率明顯低于低表達(dá)者并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；推測(cè)IL-6及IL-6R表達(dá)水平越高，患者預(yù)后越差。同時(shí)有國(guó)內(nèi)外研究[6-7]顯示IL-6能夠通過(guò)激JAK/STAT途徑來(lái)增強(qiáng)其增值，侵襲和遷移的能力。但是IL-6及IL-6R在促進(jìn)人體膽管癌細(xì)胞的侵襲和遷移是否通過(guò)該信號(hào)通路，也是需要的進(jìn)一步的組織學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證及探索。

綜上所述，IL-6及IL-6R在惡性腫瘤中的作用可能是一種機(jī)體對(duì)腫瘤產(chǎn)生反饋，IL-6及IL-6R是促進(jìn)膽管癌生長(zhǎng)作用過(guò)程中的重要分子，有望成為診斷及治療膽管癌的新靶點(diǎn)。

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