張南南 李蘭蘭 張曉昀 聞?wù)?鄒曉庭*

(1.浙江大學(xué)飼料科學(xué)研究所，農(nóng)業(yè)部動(dòng)物營養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州 310058；2.浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，舟山 316022)

抗生素的禁用和有效疫苗的缺乏，在一定程度上促進(jìn)了益生菌、益生元、免疫增強(qiáng)劑、植物提取物等的應(yīng)用[1]。殼寡糖(chitosan oligosaccharide,COS)屬于益生元的一種，它作為自然界中唯一一種帶正電荷的堿性氨基多糖[2]，具有較好的溶解度和中性pH下的低黏度，且在胃腸道內(nèi)不易被分解，可被直接吸收入血發(fā)揮作用[3]，引起了研究人員的普遍關(guān)注。最近的研究多集中于報(bào)道COS的多種生物學(xué)效應(yīng)，包括促生長、抗感染、抗腫瘤、降血壓、降低膽固醇等。研究表明，飼糧中添加COS可提高斷奶仔豬的腸道絨毛高度并降低隱窩深度，進(jìn)而提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化率，對(duì)仔豬的生長性能有積極的改善作用[4]；進(jìn)一步研究表明，COS可提高吉富羅非魚幼魚血清中溶菌酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及抗嗜水氣單胞菌感染的能力，進(jìn)而對(duì)生長性能和免疫性能具有一定的調(diào)節(jié)作用[5]；大量體外研究表明COS可刺激巨噬細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)等細(xì)胞因子[6-8]，進(jìn)而增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的活性，COS是否可引起正常動(dòng)物分泌細(xì)胞因子的研究報(bào)道不多；此外，在哺乳動(dòng)物中COS的抗氧化研究多集中于妊娠后期母豬階段和仔豬階段等易發(fā)生應(yīng)激的時(shí)間段[9]，在普通時(shí)間段的研究較少。因此，本試驗(yàn)擬研究在正常生理狀態(tài)下COS對(duì)小鼠生長性能、免疫功能和抗氧化性能的改善作用，以期為利用COS生產(chǎn)功能性食品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用COS由浙江維豐生物科技有限公司提供，純度為99%，分子質(zhì)量為1 000 u，脫乙酰度為85%～90%，聚合度為5～10，溶于水，為黃色粉末狀固體，生產(chǎn)批號(hào)為KG-1503029。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物為4周齡、體重14～16 g的雄性無特定病原體(SPF)級(jí)ICR小鼠，購買于上海萊克斯生物科技有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(滬)2002-0002。65只小鼠隨機(jī)分籠適應(yīng)1周后，選取體重均一、健康的60只小鼠，隨機(jī)分為6組，每組10只。試驗(yàn)設(shè)置1個(gè)對(duì)照組和5個(gè)試驗(yàn)組，殼寡糖劑量分別為0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 g/kg BW，采用灌胃的方式給藥，灌胃時(shí)以生理鹽水(NS)為溶劑將殼寡糖配成0、10、20、30、40和50 mg/mL濃度的溶液，按0.02 mL/g BW給予相應(yīng)劑量組動(dòng)物灌胃，每天定時(shí)灌胃。每周稱量1次體重，根據(jù)體重的大小來控制灌胃體積，灌胃42 d，試驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)于浙江大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心半封閉通風(fēng)系統(tǒng)環(huán)境，控制環(huán)境溫度在(24±1) ℃，濕度為(50±10)%，自由清潔飲水、采食(小鼠基礎(chǔ)飼糧由浙江大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，每周換2次墊料，小鼠飼養(yǎng)試驗(yàn)過程按照國家《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》執(zhí)行。

1.3 測定指標(biāo)與方法

1.3.1 體重測定

在試驗(yàn)第1天、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天和第43天清晨對(duì)每只小鼠分別進(jìn)行空腹稱重，分析體重變化。

1.3.2 免疫器官指數(shù)的測定

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食24 h(自由飲水)后稱重，每組10只小鼠全部摘眼球取血收集血液后，斷頭脫臼處死，剝離出胸腺和脾臟，稱重并計(jì)算免疫器官指數(shù)。

胸腺指數(shù)(mg/g)=胸腺重(mg)/體重(g)；

脾臟指數(shù)(mg/g)=脾臟重(mg)/體重(g)。

1.3.3 血清免疫指標(biāo)的測定

收集的每組10只小鼠的血液，室溫靜置2 h，3 000 r/min離心10 min，收集血清，用以測定免疫球蛋白含量、細(xì)胞因子水平和抗氧化酶活性，每組10個(gè)重復(fù)。

1.3.3.1 血清免疫球蛋白含量的測定

血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)和免疫球蛋白M(IgM)含量均采用試劑盒測定，試劑盒購自于武漢博士德生物工程有限公司，并按其說明書進(jìn)行試劑配制和指標(biāo)測定。

1.3.3.2 血清細(xì)胞因子水平的測定

血清IL-6、白細(xì)胞介素-10(IL-10)、IL-1β、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)和TNF-α水平均采用試劑盒測定，試劑盒購自于武漢博士德生物工程有限公司，并按其說明書進(jìn)行試劑配制和指標(biāo)測定。

1.3.3.3 血清抗氧化酶活性的測定

血清SOD、髓過氧化物酶(MPO)、過氧化物酶(POD)和堿性磷酸酶(AKP)活性均采用試劑盒測定，試劑盒購自于南京建成生物工程研究所，并按其說明書進(jìn)行試劑配制和指標(biāo)測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件分析試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析(one-way ANOVA)比較各組間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，差異顯著時(shí)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，測定結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠體重變化

在連續(xù)灌胃COS 42 d中，各組小鼠均未出現(xiàn)任何異常反應(yīng)和死亡現(xiàn)象。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，灌胃不同劑量的COS對(duì)小鼠生長性能未產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)(表1)，對(duì)照組、0.2 g/kg BW COS組、0.4 g/kg BW COS組、0.6 g/kg BW COS組、0.8 g/kg BW COS組和1.0 g/kg BW COS組小鼠體重分別增長了6.12、5.51、5.29、5.15、6.44、5.21 g，其中0.8 g/kg BW COS組小鼠體增重較對(duì)照組提高了5.23%，其他試驗(yàn)組體增重較對(duì)照組略有降低。

2.2 COS對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響

從表2中可以看出，0.6 g/kg BW COS組胸腺指數(shù)較對(duì)照組顯著提高(P<0.05)，提高了32.87%，其他劑量組胸腺指數(shù)較對(duì)照組有所提高，但未至顯著水平(P>0.05)；灌胃不同劑量的COS對(duì)小鼠的脾臟指數(shù)無顯著影響(P>0.05)。

表1 試驗(yàn)期間各組小鼠體重變化

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。表2同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as Table 2.

表2 COS對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響

2.3 COS對(duì)小鼠血清免疫球蛋白含量的影響

從表3中可以看出，隨COS灌胃劑量的增加，血清IgA、IgG和IgM含量總體呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，且都在灌胃劑量為0.6g/kg BW時(shí)達(dá)到最大值。其中，0.6 g/kg BW COS組血清IgA、IgG和IgM含量較對(duì)照組分別提高了12.14%(P<0.05)、6.89%(P>0.05)和20.69%(P<0.05)。

表3 COS對(duì)小鼠血清免疫球蛋白含量的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same column, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.4 COS對(duì)小鼠血清細(xì)胞因子水平的影響

從表4中可以看出，灌胃不同劑量的COS對(duì)小鼠血清IL-6、IL-10、IL-1β、TGF-β和TNF-α水平均無顯著影響(P>0.05)，但各試驗(yàn)組血清IL-6、IL-1β、TGF-β水平與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)下降的趨勢，且均在0.6 g/kg BW COS組有最小值，較對(duì)照組分別降低了6.92%、20.27%和9.34%(P>0.05)；血清IL-10水平較對(duì)照組整體呈現(xiàn)上升趨勢，且在0.4 g/kg BW COS組有最大值，較對(duì)照組提高了34.00%(P>0.05)。

表4 COS對(duì)小鼠血清細(xì)胞因子水平的影響

2.5 COS對(duì)小鼠血清抗氧化酶活性的影響

從表5中可以看出，灌胃COS具有提高小鼠血清SOD和POD活性的趨勢，其中SOD活性在0.4 g/kg BW COS組最高，與對(duì)照組相比提高了11.31%(P>0.05)，POD活性在0.8 g/kg BW COS組最高，與對(duì)照組相比提高了45.08%(P<0.05)；隨COS灌胃劑量的增加，血清MPO和AKP活性呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其中MPO活性在0.6 g/kg BW COS組最高，與對(duì)照組相比提高了27.61%(P<0.05)，AKP活性在0.4 g/kg BW COS組最高，較對(duì)照組提高了21.30%(P>0.05)。

表5 COS對(duì)小鼠血清抗氧化酶活性的影響

3 討 論

3.1 COS對(duì)小鼠生長性能的影響

有關(guān)COS對(duì)動(dòng)物生長性能的影響報(bào)道不盡相同，一些研究者認(rèn)為在基礎(chǔ)飼糧中添加COS對(duì)仔豬的生長性能具有促進(jìn)作用[10-11]，但喬麗紅等[12]認(rèn)為COS對(duì)斷奶仔豬的生長性能無顯著影響，產(chǎn)生這些差異的原因可能是因?yàn)椴煌囼?yàn)所選用的COS的分子質(zhì)量和溶解度不同，也可能是因?yàn)閯?dòng)物種類及生活環(huán)境不同。從上述討論得知，COS的促生長效果不穩(wěn)定，受飼養(yǎng)環(huán)境衛(wèi)生條件的影響較大。同時(shí)，在COS具有促生長作用的研究中發(fā)現(xiàn)，隨著COS劑量的增加，生長性能并不是呈線性增加，而是有一個(gè)最佳值，隨后呈現(xiàn)下降趨勢[13]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)前期(第1～22天)，低灌胃劑量COS組(0.2 g/kg BW COS組)小鼠體重增加量高于對(duì)照組，中、高灌胃劑量COS組(0.6 g/kg BW COS組、0.8 g/kg BW COS組和1.0 g/kg BW COS組)體重增加量低于對(duì)照組。這表明，在0.6～0.8 g/kg BW的灌胃劑量范圍內(nèi)，COS對(duì)小鼠的生長性能具有提高的趨勢，當(dāng)COS灌胃劑量至1.0 g/kg BW時(shí)，生長性能反而具有降低的趨勢，這與上述研究結(jié)果類似。可見，COS的添加劑量有一個(gè)適宜的范圍，過量添加可能會(huì)對(duì)動(dòng)物的生長性能產(chǎn)生不利影響，目前對(duì)COS副作用的研究尚未見報(bào)道，具體原因有待于進(jìn)一步的研究。目前研究認(rèn)為，哺乳動(dòng)物對(duì)碳水化合物的消化主要限于以α-1,4糖苷鍵連接而成的多糖，對(duì)其他形式的糖苷鍵不分解或分解能力弱，而COS是由β-1,4-糖苷鍵連接而成的，在哺乳動(dòng)物小腸內(nèi)不能被消化酶分解，直接被小腸吸收，過量添加會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物不良性腹瀉，對(duì)生長產(chǎn)生負(fù)效應(yīng)[14]。試驗(yàn)后期(第22～43天)，中、高灌胃劑量組(0.6 g/kg BW COS組、0.8 g/kg BW COS組)小鼠體重增加量高于對(duì)照組及低灌胃劑量組(0.2 g/kg BW COS組、0.4 g/kg BW COS組)，可能是試驗(yàn)后期小鼠對(duì)COS產(chǎn)生了適應(yīng)性，具體原因有待進(jìn)一步研究。

3.2 COS對(duì)小鼠免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官包括中樞免疫器官和外周免疫器官兩部分，中樞免疫器官包括骨髓和胸腺，外周免疫器官包括淋巴結(jié)、脾臟和黏膜相關(guān)淋巴組織等。胸腺是T細(xì)胞分化和發(fā)育成熟的主要場所，其作用是誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生成熟的免疫細(xì)胞進(jìn)行免疫應(yīng)答；脾臟是機(jī)體最大的外周免疫器官，是機(jī)體進(jìn)行免疫應(yīng)答的主要場所[15]。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)可作為基本的免疫指標(biāo)直接反映機(jī)體的免疫功能[16-17]。目前認(rèn)為COS對(duì)免疫器官發(fā)育存在著一定作用，本試驗(yàn)結(jié)果顯示灌胃0.6 g/kg BW COS可顯著提高胸腺指數(shù)，灌胃0.6～0.8 g/kg BW COS對(duì)脾臟指數(shù)具有提高趨勢。鄧陽勇等[18]研究表明蘆薈多糖可使胸腺皮質(zhì)增厚，皮質(zhì)和髓質(zhì)分解明顯，淋巴細(xì)胞更密集。推測本次試驗(yàn)中0.6 g/kg BW COS組小鼠胸腺指數(shù)顯著提高的原因可能是添加COS可促進(jìn)小鼠胸腺中淋巴細(xì)胞的發(fā)育，提高胸腺中淋巴細(xì)胞數(shù)目，進(jìn)而促進(jìn)免疫器官發(fā)育，提高免疫機(jī)能。

3.3 COS對(duì)小鼠血清免疫球蛋白含量的影響

體外研究表明COS可以刺激巨噬細(xì)胞分泌多功能的細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子刺激T細(xì)胞和B細(xì)胞的分化，并促進(jìn)免疫球蛋白的產(chǎn)生[19]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示灌胃0.6 g/kg BW COS可顯著提高小鼠血清中IgA和IgM含量，推測其原因可能是COS的活性基團(tuán)直接刺激了小鼠的免疫應(yīng)答反應(yīng)[20]。此外，免疫球蛋白是化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似或具有抗體活性的一類糖蛋白，其結(jié)構(gòu)中的大部分糖是以聚糖的形式結(jié)合形成的，聚糖有2種類型，N-乙酰基半乳糖和N-乙?；咸烟牵珻OS可以提供N-乙?；咸烟堑臍埢⒖梢越Y(jié)合到具有免疫活性的存在于細(xì)胞表面的殘基受體，進(jìn)而提高免疫能力；此外，COS攜帶的正電荷可與T淋巴細(xì)胞及巨噬細(xì)胞表面的負(fù)電荷相互吸引，激發(fā)免疫細(xì)胞向B細(xì)胞發(fā)出指令，產(chǎn)生免疫球蛋白[21]。另有研究表明，在動(dòng)物胃腸道內(nèi)寄居的乳酸桿菌、雙歧桿菌等有益菌可以分泌打開β-1，4糖苷鍵的酶，進(jìn)而利用COS[4]。雙歧桿菌和乳酸菌利用COS可產(chǎn)生琥珀酸、乳酸、短鏈脂肪酸，降低腸道的pH，產(chǎn)生酸性的腸道環(huán)境，有利于乳酸菌的增殖[22]。腸道內(nèi)的有害菌如沙門氏菌、大腸桿菌等由于不能分泌分解COS的酶類而不能利用COS，COS可通過攜帶正電荷的游離氨基與細(xì)菌細(xì)胞壁或者細(xì)胞表面所攜帶的陰離子物質(zhì)相結(jié)合，阻止?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的進(jìn)入或使細(xì)胞變形，進(jìn)而干擾其正常的物質(zhì)代謝，發(fā)揮抑制有害菌增殖的作用[23]。因此，COS也可能是通過促進(jìn)有益菌的生長和抑制有害菌的生長來提高免疫機(jī)能。

3.4 COS對(duì)小鼠血清細(xì)胞因子水平的影響

作為免疫促進(jìn)劑的COS可與淋巴細(xì)胞或吞噬細(xì)胞的特異性受體結(jié)合，通過與細(xì)胞因子的協(xié)同作用，有效刺激機(jī)體的免疫應(yīng)答[24]，此過程中釋放的細(xì)胞因子包括白細(xì)胞介素類、干擾素類等。有關(guān)COS對(duì)細(xì)胞因子水平的影響報(bào)道不一致，Deng等[25]研究表明COS可刺激巨噬細(xì)胞釋放IL-1β、IL-6和TNF-α，從而提高肉雞的免疫力；而Walsh等[26]在斷奶仔豬上的研究發(fā)現(xiàn)COS并沒有影響IL-6、IL-10、TNF-α等的表達(dá)。本試驗(yàn)結(jié)果表明試驗(yàn)組小鼠血清中IL-6、IL-1β、TGF-β水平與對(duì)照組相比總體呈現(xiàn)下降的趨勢，血清IL-10水平較對(duì)照組整體呈現(xiàn)上升趨勢。COS分子結(jié)構(gòu)中含有的氨基可被機(jī)體的免疫系統(tǒng)識(shí)別，結(jié)合到巨噬細(xì)胞表面的受體，刺激巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，同時(shí)可引起T細(xì)胞表面的白細(xì)胞介素-2(IL-2)受體的表達(dá)，加速T細(xì)胞成熟而釋放IL-2，其與受體結(jié)合后進(jìn)一步加速了T細(xì)胞的成熟和分化，刺激血液循環(huán)中抗體的產(chǎn)生[21]。賈培媛等[27]研究發(fā)現(xiàn)COS可顯著增加小鼠脾臟中CD8+T淋巴細(xì)胞的比例，而CD8+T淋巴細(xì)胞在IL-10產(chǎn)生的過程中發(fā)揮重要作用[28]，IL-10在體內(nèi)是免疫系統(tǒng)的中央調(diào)節(jié)器[29]，它的缺失不僅會(huì)造成小鼠結(jié)腸性炎癥，而且還可導(dǎo)致上皮滲透性炎癥[30]。本試驗(yàn)中，灌胃不同劑量COS后小鼠血清IL-10水平整體呈現(xiàn)上升趨勢，不會(huì)引發(fā)炎癥反應(yīng)。IL-10作為重要的抗炎性細(xì)胞因子，能過抑制活化的T細(xì)胞的產(chǎn)生過量的IL-6、IL-1β等炎性細(xì)胞因子，從而防止過度免疫應(yīng)答對(duì)機(jī)體造成的傷害[31]。本試驗(yàn)顯示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組小鼠血清IL-6、IL-1β水平整體呈現(xiàn)下降趨勢，不會(huì)引發(fā)過度的免疫反應(yīng)，同時(shí)這也與試驗(yàn)組小鼠血清IL-10水平的升高相吻合。本研究結(jié)果與Walsh等[26]的研究結(jié)果相符，與Deng等[25]的結(jié)果不同，因豬和小鼠同屬于哺乳動(dòng)物，而雞屬于鳥類，因而推測COS在哺乳動(dòng)物和鳥類上產(chǎn)生的效果可能不同。

3.5 COS對(duì)小鼠血清中抗氧化酶活性的影響

4 結(jié) 論

在本試驗(yàn)條件下，灌胃不同劑量COS對(duì)小鼠的生長性能、脾臟指數(shù)以及血清IgG含量、細(xì)胞因子水平、SOD和AKP活性均無顯著影響，但灌胃劑量為0.6～0.8 g/kg BW時(shí)，小鼠脾臟指數(shù)有增加的趨勢，且胸腺指數(shù)以及血清IgA和IgM含量、MPO和POD活性均有不同程度提高。

參考文獻(xiàn)：

[1] ELALA N M A,RAGAA N M.Eubiotic effect of a dietary acidifier (potassium diformate) on the health status of culturedOreochromisniloticus[J].Journal of Advanced Research,2015,6(4):621-629.

[2] WAN J,JIANG F,XU Q S,et al.New insights into the role of chitosan oligosaccharide in enhancing growth performance,antioxidant capacity,immunity and intestinal development of weaned pigs[J].RSC Advances,2017,7(16):9669-9679.

[3] 譚利偉,管昶,周魯寧,等.殼寡糖在動(dòng)物營養(yǎng)中的研究與應(yīng)用[J].中國畜牧雜志,2016,52(17):91-97.

[4] ZHOU T X,CHO J H,KIM I H.Effects of supplementation of chito-oligosaccharide on the growth performance,nutrient digestibility,blood characteristics and appearance of diarrhea in weanling pigs[J].Livestock Science,2012,144(3):263-268.

[5] 孫立威,文華,蔣明,等.殼寡糖對(duì)吉富羅非魚幼魚生長性能、非特異性免疫及血液學(xué)指標(biāo)的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(3):43-49.

[6] YOON H J,MOON M E,IM S Y,et al.Chitosan oligosaccharide (COS) inhibits LPS-induced inflammatory effects in RAW 264.7 macrophage cells[J].Biochemical & Biophysical Research Communications,2007,358(3):954-959.

[7] MA P,LIU H T,WEI P,et al.Chitosan oligosaccharides inhibit LPS-induced over-expression of IL-6 and TNF-α in RAW264.7 macrophage cells through blockade of mitogen-activated protein kinase (MAPK) and PI3K/Akt signaling pathways[J].Carbohydrate Polymers,2011,84(4):1391-1398.

[8] 麻攀,于煒婷,魏鵬,等.殼寡糖作用于巨噬細(xì)胞的機(jī)制初探[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012(5):660-662.

[9] 湯峻,黃皓源,周樂禮,等.殼寡糖對(duì)妊娠后期母豬免疫功能和仔豬初生重的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2016,44(6):174-176.

[10] 張玲,陳代文,楊繼文,等.殼寡糖對(duì)環(huán)磷酰胺應(yīng)激仔豬生產(chǎn)性能和免疫功能的影響[J].中國畜牧雜志,2013,49(17):58-62.

[11] 李陽,常文環(huán),張姝,等.飼糧添加殼寡糖和干酪乳桿菌對(duì)肉雞生長性能、肌肉品質(zhì)及抗氧化性能的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2016,28(5):1450-1461.

[12] 喬麗紅,趙穎,倪紅玉,等.低聚殼聚糖對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)、抗氧化性能和糞便微生物的影響[J].糧食與飼料工業(yè),2013(3):47-50.

[13] 徐小龍,周魯寧,張斌,等.殼寡糖替代抗生素對(duì)肉仔雞生長性能及免疫功能的影響[J].飼料廣角,2016(17):33-37.

[14] 黃欽成,申光榮,譚北平,等.飼料中添加殼寡糖和/或霉菌毒素吸附劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長性能、非特異性免疫力及抗病力的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2017,29(11):4036-4047.

[15] 侯改鳳,李瑞,黃興國.寡糖的免疫調(diào)節(jié)作用及其在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].中國飼料,2015(4):28-30.

[16] CHEN B,LIU L F,XU H Y,et al.Effectiveness of immune therapy combined with chemotherapy on the immune function and recurrence rate of cervical cancer[J].Experimental and Therapeutic Medicine,2015,9(3):1063-1067.

[17] YU G P,CHEN G Q,HUANG B,et al.Effect of early enteral nutrition on postoperative nutritional status and immune function in elderly patients with esophageal cancer or cardiac cancer[J].Chinese Journal of Cancer Research,2013,25(3):299-305.

[18] 鄧陽勇,伍參榮,楊旭麗,等.蘆薈多糖對(duì)衰老小鼠胸腺組織結(jié)構(gòu)的影響[J].中南醫(yī)學(xué)科學(xué)雜志,2011,39(6):626-628.

[19] DANG Y B,LI S,WANG W X,et al.The effects of chitosan oligosaccharide on the activation of murine spleen CD11c+dendritic cells via Toll-like receptor 4[J].Carbohydrate Polymers,2011,83(3):1075-1081.

[20] 崔健,康鵬天.殼寡糖的生理功能及在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用[J].甘肅畜牧獸醫(yī),2015,45(4):21-24.

[21] 陳虹,臧素敏,侯偉革.不同濃度殼寡糖對(duì)蛋用鵪鶉免疫功能的影響[J].中國畜牧獸醫(yī),2013,40(1):108-111.

[22] 占秀安,胡彩虹,許梓榮.果寡糖對(duì)肉雞生長、腸道菌群和腸形態(tài)的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào),2003,23(2):196-198.

[23] 孫忠保,閻宏,馬永軍.寡糖在動(dòng)物生產(chǎn)中的應(yīng)用[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)研究,2004,25(4):80-84.

[24] 孟曉,王紀(jì)亭,萬文菊,等.低分子質(zhì)量殼寡糖對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、血清生化指標(biāo)、盲腸微生物數(shù)量及脾臟白細(xì)胞介素-2、腫瘤壞死因子-α基因表達(dá)的影響[J].動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào),2017,29(5):1590-1599.

[25] DENG X Z,LI X J,LIU P,et al.Effect of chito-oligosaccharide supplementation on immunity in broiler chickens[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,2008,21(11):1651-1658.

[26] WALSH A M,SWEENEY T,BAHAR B,et al.The effect of chitooligosaccharide supplementation on intestinal morphology,selected microbial populations,volatile fatty acid concentrations and immune gene expression in the weaned pig[J].Animal,2012,6(10):1620-1626.

[27] 賈培媛,李海霞,巫亞俊,等.殼寡糖對(duì)豬藍(lán)耳病滅活疫苗的佐劑活性研究[C]//中國酶工程與糖生物工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集.鎮(zhèn)江:中國微生物學(xué)會(huì)酶工程專業(yè)委員會(huì),2015:66-68.

[28] GELFANOVA V,LAI Y,GELFANOV V,et al.Modulation of cytokine responses of murine CD8+αβ intestinal intraepithelial lymphocytes by IL-4 and IL-12[J].Journal of Biomedical Science,1999,6(4):269-276.

[29] BERG D J,ZHANG J,WEINSTOCK J V,et al.Rapid development of colitis in NSAID-treated IL-10-deficient mice[J].Gastroenterology,2002,123(5):1527-1542.

[30] BERG D J,DAVIDSON N,KüHN R,et al.Enterocolitis and colon cancer in interleukin-10-deficient mice are associated with aberrant cytokine production and CD4+TH1-like responses[J].Journal of Clinical Investigation,1996,98(4):1010-1020.

[31] SUN X Y,YANG H,NOSE K,et al.Decline in intestinal mucosalIL-10 expression and decreased intestinal barrier function in a mouse model of total parenteral nutrition[J].American Journal of Physiology：Gastrointestinal and Liver Physiology,2008,294(1):G139-G147.

[32] XIE W M,XU P X,LIU Q.Antioxidant activity of water-soluble chitosan derivatives[J].Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters,2001,11(13):1699-1701.

[33] 王振偉,申森.超聲波輔助酶法制備殼寡糖及抗氧化活性研究[J].中國食品添加劑,2014(4):70-75.

[34] 張吉,劉洪濤,李秀英,等.殼寡糖對(duì)自由基的清除及對(duì)N9小膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)作用[J].食品科學(xué),2010,31(7):81-85.

[35] JOODI G,ANSARI N,KHODAGHOLI F.Chitooligosaccharide-mediated neuroprotection is associated with modulation ofHspsexpression and reduction of MAPK phosphorylation[J].International Journal of Biological Macromolecules,2011,48(5):726-735.

[36] 孫立威,文華,蔣明,等.殼寡糖對(duì)吉富羅非魚幼魚生長性能、非特異性免疫及血液學(xué)指標(biāo)的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào),2011,31(3):43-49.

[37] 李振達(dá),陳小娥,廖智,等.殼寡糖對(duì)三疣梭子蟹免疫力的影響[J].浙江海洋學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2011,30(1):27-32.

[38] 李桂峰,錢沛鋒,孫際佳,等.維生素C對(duì)胡子鯰血清免疫相關(guān)酶活性的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院報(bào),2004,19(4):301-305.

[39] 鐘佳,劉進(jìn)輝,肖定福,等.殼寡糖及其衍生物的抗氧化活性[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2015,36(7):118-121.

[40] FENG T,DU Y M,LI J,et al.Antioxidant activity of half N-acetylated water-soluble chitosaninvitro[J].European Food Research and Technology,2007,225(1):133-138.