謝文惠 姜 寧 王 鑫 張愛忠

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，大慶 163319)

復(fù)合益生菌制劑是由對(duì)動(dòng)物機(jī)體有益的單體活性微生物制成的復(fù)合生物活性制劑，在畜禽生產(chǎn)中，復(fù)合益生菌制劑不僅能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育，還能改善動(dòng)物腸道菌群平衡，提高飼料利用率和動(dòng)物免疫力，復(fù)合益生菌制劑菌種主要包括芽孢桿菌類、乳酸菌類、腸球菌類和酵母菌類幾種。其中枯草芽孢桿菌作為一種新型的表達(dá)載體，它可以表達(dá)酶類和生長(zhǎng)因子等多種蛋白質(zhì)[1]，是分子微生物學(xué)研究中常用的基因工程菌。孫錫鳳[2]研究表明，在基礎(chǔ)飼糧中添加不同濃度的復(fù)合益生菌(主要由海洋紅酵母菌BSH、枯草芽孢桿菌和乳酸菌組成)，肉雞的平均日增重和日采食量顯著提高，能量、干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的表觀利用率顯著提升，小腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)得到改善，各腸段的絨腺比(V/C)顯著上升。趙建文等[3]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合菌制劑(主要由乳酸桿菌和芽孢桿菌組成)，可以在一定程度上降低雞舍氨氣濃度，使機(jī)體血液中總蛋白和球蛋白含量升高，同時(shí)可以增強(qiáng)機(jī)體體液免疫能力，但對(duì)細(xì)胞免疫的影響效果不顯著。欒超[4]利用小泛素相關(guān)修飾物(small ubiquitin-related modifier，SUMO)融合技術(shù)在枯草芽孢桿菌中表達(dá)出了抗菌肽Cathelicidin-BF(CBF)，后續(xù)研究表明抗菌肽CBF不僅具有高效的廣譜抗菌活性和免疫調(diào)節(jié)功能，而且安全性好、不易產(chǎn)生耐藥性，是良好的新型抑菌物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)室采用蠅蛆抗菌肽的基因片段，通過重疊延伸PCR法融合到枯草芽孢桿菌工程菌中表達(dá)出了含抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌[5]。目前在畜禽方面關(guān)于單獨(dú)使用益生菌或抗菌肽的研究較多，未見益生菌與含抗菌肽的基因工程菌聯(lián)合應(yīng)用于肉雞生產(chǎn)的報(bào)道。因此，本試驗(yàn)以含有抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌與釀酒酵母、嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌組成的復(fù)合益生菌為試驗(yàn)材料，將前期人工模擬胃腸道消化液耐受性試驗(yàn)所確定的3種不同配比的復(fù)合益生菌制劑分別加入到肉仔雞基礎(chǔ)飼糧中，觀察其對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀利用率、血清生化指標(biāo)和腸道黏膜形態(tài)的影響，探尋最佳復(fù)合益生菌制劑配比，為復(fù)合益生菌制劑在肉雞產(chǎn)業(yè)鏈中的現(xiàn)實(shí)推廣應(yīng)用提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用益生菌制劑均為固體粉末，其中枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為9.00×108CFU/g，釀酒酵母活菌數(shù)為4.00×108CFU/g，嗜酸乳桿菌活菌數(shù)為1.00×1010CFU/g，乳雙歧桿菌活菌數(shù)為1.00×1010CFU/g。乳雙歧桿菌由陜西森弗生物技術(shù)有限公司提供，枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和嗜酸乳桿菌均為本實(shí)驗(yàn)室制備，其中枯草芽孢桿菌為含抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌，它是以重疊延伸PCR原理為基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)2對(duì)4條引物合成抗菌肽基因，每條抗菌肽基因都要經(jīng)過2步重疊延伸完成，回收最后一次PCR產(chǎn)物與pMD18-T Vector相連，成功構(gòu)建克隆載體pMD18-T/CC34；選擇表達(dá)載體pHT43構(gòu)建重組表達(dá)載體，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)化到枯草芽孢桿菌WB800N中，得到基因工程菌pHT43/CC34/WB800N；在LB培養(yǎng)基中，經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)刺激表達(dá)，成功表達(dá)出雜合抗菌肽CC34，表達(dá)產(chǎn)物采用高效液相色譜(HPLC)法純化蛋白，純化后的蛋白利用質(zhì)譜(MS)法鑒定為目的蛋白，分子質(zhì)量為3.7 ku，且表達(dá)量為31.98 mg/L；同時(shí)，通過抑菌圈法與最小抑菌濃度(MIC)及最小殺菌濃度(MBC)相結(jié)合檢測(cè)出抗菌肽對(duì)致病菌具有抑菌效應(yīng)[5]。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及基礎(chǔ)飼糧

試驗(yàn)動(dòng)物選取1日齡健康的雄性愛撥益加(AA)肉仔雞，購(gòu)自吉林省德惠市某孵化場(chǎng)。

本試驗(yàn)所用基礎(chǔ)飼糧依照NRC(1994)肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，并結(jié)合我國(guó)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。飼料原料購(gòu)于大慶禾豐八一農(nóng)大動(dòng)物科技有限公司，飼糧形態(tài)為粉狀料，由本實(shí)驗(yàn)室粉碎及攪拌混合而成。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

續(xù)表1項(xiàng)目Items1～21日齡1to21daysofage22～42日齡22to42daysofage有效磷AP0.460.48賴氨酸Lys1.221.18蛋氨酸Met0.350.38

1)礦物質(zhì)預(yù)混料為每千克飼糧提供The mineral premix provided the following per kg of diets:1～21日齡 1 to 21 days of age，Cu (CuSO4·5H2O) 16 mg，F(xiàn)e (FeSO4·7H2O) 100 mg，Zn (ZnSO4·7H2O) 90 mg，Mn (MnSO4·H2O) 130 mg，Se (Na2SeO3) 2 mg，Ca(IO3)22 mg，Ca3(PO4)20.4 mg；22～42日齡 22 to 42 days of age，Cu (CuSO4·5H2O) 32 mg，F(xiàn)e (FeSO4·7H2O) 200 mg，Zn (ZnSO4·7H2O) 180 mg，Mn (MnSO4·H2O) 260 mg，Se (Na2SeO3) 4 mg，Ca(IO3)24 mg，Ca3(PO4)20.8 mg。

2)復(fù)合多維為每千克飼糧提供The multi-vitamins provided the following per kg of diets:1～21日齡 1 to 21 days of age，VA 80 000 IU，VD322 000 IU，VE 160 IU，VK324 mg，VB120 mg，VB244 mg，VB630 mg，VB120.2 mg，葉酸 folic acid 8 mg，生物素 biotin 0.6 mg，煙酰胺 niacinamide 200 mg，泛酸鈣 pantothenic acid 100 mg，抗氧化劑 antioxidant 1 mg；22～42日齡 22 to 42 days of age，VA 120 000 IU，VD333 000 IU，VE 240 IU，VK336 mg，VB130 mg，VB266 mg，VB645 mg，VB120.3 mg，葉酸 folic acid 12 mg，生物素 biotin 0.9 mg，煙酰胺 niacinamide 300 mg，泛酸鈣 pantothenic acid 150 mg，抗氧化劑 antioxidant 1.5 mg。

3)代謝能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。ME was a calculated value, while the other nutrient levels were measured values.

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

本試驗(yàn)使用單因素完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用320只1日齡健康的雄性AA肉仔雞，隨機(jī)分為4組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只，各組試雞體重差異不顯著(P>0.05)。Ⅰ組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)飼糧；Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組為試驗(yàn)組，飼喂基礎(chǔ)飼糧+1 000 mg/kg復(fù)合益生菌制劑，復(fù)合益生菌制劑中枯草芽孢桿菌∶釀酒酵母∶嗜酸乳桿菌∶乳雙歧桿菌分別為2∶1∶1∶1、1∶2∶1∶1和1.0∶1.0∶1.5∶1.5。試驗(yàn)期為42 d。

1.4 飼養(yǎng)管理

進(jìn)雛雞前對(duì)雞舍實(shí)施無死角沖洗、消毒。由于是春季飼養(yǎng)，雞舍進(jìn)雛前2天開始預(yù)熱升溫。在試驗(yàn)雛雞到達(dá)2 h之內(nèi)，采用低濃度(5%)的葡萄糖水溶液進(jìn)行開飲，水溫適中。試驗(yàn)雞采用籠養(yǎng)方式進(jìn)行飼養(yǎng)，1～21日齡飼養(yǎng)密度為20只/m2，22～42日齡飼養(yǎng)密度為10只/ m2，自由飲水和自由采食。舍內(nèi)溫度、濕度和光照時(shí)間按照常規(guī)飼養(yǎng)管理要求進(jìn)行嚴(yán)格控制，保證良好通風(fēng)。每日換水前對(duì)水槽進(jìn)行清洗以及殺菌消毒，試驗(yàn)期間飲用涼開水。按常規(guī)免疫程序?qū)﹄r雞進(jìn)行新城疫及法氏囊免疫。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 養(yǎng)分表觀利用率的測(cè)定

于飼養(yǎng)試驗(yàn)第35天，從各組每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)挑選1只體況良好、體重相近的肉仔雞，單籠飼養(yǎng)，進(jìn)行全收糞代謝試驗(yàn)。于飼養(yǎng)試驗(yàn)第37天20：00代謝雞開始禁食，以消除肉仔雞腸道內(nèi)容物對(duì)代謝試驗(yàn)的影響，禁食期間自由飲水，其他飼養(yǎng)條件不變。于飼養(yǎng)試驗(yàn)第39天08:00開始為期3 d的全收糞代謝試驗(yàn)，在此期間準(zhǔn)確記錄采食量，每天定時(shí)收取全部排泄物(注意剔除毛屑雜物)，收集后按每100 g排泄物加10%鹽酸10 mL，然后立即置于-20 ℃冰箱保存。飼養(yǎng)試驗(yàn)最后1天晚上對(duì)代謝雞進(jìn)行絕食代謝，排泄物收集完畢后，將其解凍混勻，并在65 ℃條件下烘干至恒重，室溫回潮24 h后稱重，再粉碎過40目篩，裝袋密封，以便后續(xù)試驗(yàn)分析使用。

按照常規(guī)方法測(cè)定飼糧和排泄物中的各養(yǎng)分含量，干物質(zhì)含量采用103～105 ℃烘干失重法(GB/T 6435—2014)測(cè)定，粗灰分含量采用高溫灼燒法(GB/T 6438—2007)測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用半微量凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(GB/T 6433—2006)測(cè)定，粗纖維含量采用過濾法(GB/T 6434—2006)測(cè)定，鈣含量采用高錳酸鉀滴定法(GB/T 6436—2002)測(cè)定，磷含量采用分光光度計(jì)法(GB/T 6437—2002)測(cè)定[6]。

養(yǎng)分表觀利用率的計(jì)算公式如下：

養(yǎng)分表觀利用率(%)=100×(養(yǎng)分食入量-排泄物中養(yǎng)分量)/養(yǎng)分食入量。

1.5.2 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

分別在21和42日齡時(shí)，從各組每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)選取3只肉仔雞，心臟采集血樣5 mL，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，分離血清于1.5 mL EP管中，-20 ℃冷凍保存?zhèn)錅y(cè)。使用試劑盒測(cè)定血清中總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)含量與尿素氮(UN)濃度及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性，測(cè)定方法嚴(yán)格按照所購(gòu)試劑盒說明書進(jìn)行，試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.5.3 腸道黏膜形態(tài)的測(cè)定

于飼養(yǎng)試驗(yàn)第42天，從各組每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)挑選3只體況良好、體重相近的肉仔雞，屠宰后立即取出完整腸道，將各腸道剖開分離，取十二指腸、空腸和回腸中部各2～3 cm，用裝有0.9%生理鹽水的洗瓶將腸道食糜輕輕沖凈，置于10%中性甲醛溶液中固定24 h后，采用常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)對(duì)小腸組織進(jìn)行染色處理，制成石蠟切片。在光學(xué)顯微鏡低倍鏡(40倍)下用ML-50顯微圖像采集分析系統(tǒng)分別在十二指腸、空腸和回腸的組織切片上隨機(jī)選擇多個(gè)非連續(xù)性視野觀察切片，并挑選典型視野拍攝成圖片，測(cè)量小腸絨毛高度和隱窩深度，取其平均值作為固定數(shù)據(jù)，并計(jì)算絨腺比。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

本試驗(yàn)中，養(yǎng)分表觀利用率以重復(fù)為單位，對(duì)每組共4個(gè)平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，血清生化指標(biāo)和腸道黏膜形態(tài)以每組12個(gè)樣本進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2007表格進(jìn)行初步統(tǒng)計(jì)與整理，運(yùn)用SAS 8.0軟件開展單因素方差分析(one-way ANOVA)，運(yùn)用Duncan氏法進(jìn)行顯著性分析，結(jié)果均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。以P<0.05為顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀利用率的影響

由表2可知，各組間粗纖維和磷的表觀利用率差異不顯著(P>0.05)；與對(duì)照組相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組的干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和磷的表觀利用率均顯著提高(P<0.05)，其中干物質(zhì)表觀利用率分別提高了1.83%、1.95%和1.43%，粗蛋白質(zhì)表觀利用率分別提高了6.75%、8.60%和5.25%，粗脂肪觀利用率分別提高了9.64%、13.89%和10.15%，鈣表觀利用率分別提高了14.70%、15.19%和14.24%。

表2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀利用率的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)無字母或相同字母表示差異不顯著(P>0.05)，不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

In the same row, values with no letter or the same letter superscripts mean no significant difference (P>0.05), while with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). The same as below.

2.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

由表3可知，在21日齡時(shí)，各組血清總蛋白、白蛋白含量與尿素氮濃度及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性均差異不顯著(P>0.05)。在42日齡時(shí)，各組血清白蛋白含量、尿素氮濃度及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性差異不顯著(P>0.05)；與對(duì)照組相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組血清總蛋白含量顯著提高(P<0.05)，分別提高了13.84%、14.79%和14.04%。

表3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道黏膜形態(tài)的影響

由表4可知，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度、隱窩深度和絨腺比均優(yōu)于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0.05)。

表4 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道黏膜形態(tài)的影響

圖1顯示的是各組肉仔雞十二指腸、空腸和回腸的腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)。從圖中可以看出，對(duì)照組有的腸絨毛頂端上皮細(xì)胞脫落，而Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組腸絨毛都較長(zhǎng)，其完整性也更好。

3 討 論

3.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞養(yǎng)分表觀利用率的影響

養(yǎng)分表觀利用率是作為衡量畜禽是否能夠充分利用飼糧營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的最重要的指標(biāo)之一，也是評(píng)價(jià)肉仔雞機(jī)體健康的最直觀的試驗(yàn)結(jié)果，它受到飼糧營(yíng)養(yǎng)水平、飼料加工工藝、動(dòng)物生長(zhǎng)階段以及動(dòng)物腸道健康狀況等因素的影響[7]。復(fù)合益生菌制劑進(jìn)入畜禽腸道后，各菌種制劑之間、菌種制劑與腸道微生物之間以及菌種制劑與宿主之間可以產(chǎn)生協(xié)同共生、優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的作用[8]。孫錫風(fēng)等[9]研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加不同濃度復(fù)合益生菌組與對(duì)照組相比，肉雞前期和后期能量、粗蛋白質(zhì)、干物質(zhì)和粗脂肪的表觀利用率均有不同程度的提高。Mountzouris等[10]研究表明，在肉雞基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合益生菌可以提高肉雞對(duì)某些養(yǎng)分的消化率。

A、B、C、D分別為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的十二指腸切片，E、F、G、H分別為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的空腸切片，I、J、K、L分別為Ⅰ組、Ⅱ組、Ⅲ組、Ⅳ組的回腸切片。

A, B, C and D were duodenum slices of groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ and Ⅳ; E, F, G and H were jejunum slices of groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ and Ⅳ; I, J, K and L were ileum slices of groups Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ and Ⅳ.

圖1肉仔雞腸組織結(jié)構(gòu)圖

Fig.1 Intestinal tissue structure graphs of broilers (40×)

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼糧中添加不同配比的復(fù)合益生菌制劑后，與對(duì)照組相比，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組肉仔雞對(duì)飼糧中養(yǎng)分的表觀利用率均有不同程度的提高，因?yàn)閺?fù)合益生菌和含有抗菌肽的基因工程菌以及其所產(chǎn)生的各種代謝產(chǎn)物和抗菌肽，可以改善腸道內(nèi)微生態(tài)環(huán)境，有助于消化利用飼糧的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。枯草芽孢桿菌會(huì)調(diào)節(jié)機(jī)體氮代謝的關(guān)鍵限速酶如黃嘌呤氧化酶和谷氨酰胺合成酶，從而調(diào)節(jié)機(jī)體的氮代謝[11]，其還有較強(qiáng)的生物奪氧能力[12]，為腸道內(nèi)有益菌和共同添加的乳酸桿菌、雙歧桿菌和酵母菌提供有利環(huán)境，從而產(chǎn)生協(xié)同共生、優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的作用，加上本試驗(yàn)用的是能分泌抗菌肽的枯草芽孢桿菌基因工程菌，其所分泌的抗菌肽能夠抑制和減少腸道內(nèi)有害菌的增殖。釀酒酵母細(xì)胞原生質(zhì)中含有豐富的核苷酸和必需氨基酸(尤其是賴氨酸)，其還含有豐富的消化酶，能夠促進(jìn)腸道對(duì)大分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；釀酒酵母細(xì)胞壁中的多糖主要由葡聚糖和甘露寡糖(MOS)組成[13]，這2種多糖進(jìn)入小腸后能被雙歧桿菌產(chǎn)生的酶分解而成為雙歧桿菌的碳源，促進(jìn)雙歧桿菌的增殖，酸化腸道環(huán)境，降低腸道還原電位，抑制有害菌生長(zhǎng)。乳酸菌和雙歧桿菌是動(dòng)物腸道內(nèi)主要維持微生物區(qū)系平衡的菌群，還能代謝產(chǎn)生有機(jī)酸，促進(jìn)腸道蠕動(dòng)和消化液分泌，有利于養(yǎng)分的消化吸收，并且這種偏酸環(huán)境也有利于被結(jié)合或螯合的礦物質(zhì)元素以游離態(tài)釋放，從而提高鈣、磷等的利用率。其中Ⅲ組肉仔雞對(duì)飼糧中各養(yǎng)分的表觀利用率最高，可能是因?yàn)楸驹囼?yàn)采用的是粉狀飼料，與以釀酒酵母為主的復(fù)合益生菌制劑充分混合，肉仔雞采食之后，在胃腸道中酵母菌發(fā)揮發(fā)酵特性，將飼糧中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行分解、轉(zhuǎn)化和合成，生成肉仔雞機(jī)體所需要的酶、菌體和各種代謝產(chǎn)物，從而提高肉仔雞對(duì)飼糧中養(yǎng)分的利用率。

3.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞血清生化指標(biāo)的影響

血液是機(jī)體內(nèi)環(huán)境的重要組成部分，是物質(zhì)交換與代謝的主要場(chǎng)所，其指標(biāo)的變化受到肉仔雞生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)水平以及自身分泌情況等因素的影響，只有當(dāng)血液中各生化指標(biāo)保持相對(duì)穩(wěn)定的狀態(tài)，機(jī)體代謝才能正常進(jìn)行，從而獲得較好的生產(chǎn)性能[14]，因此血液或血清生化指標(biāo)可作為反映機(jī)體生理狀態(tài)與健康情況的重要指標(biāo)。血清蛋白、尿素氮含量和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性是反映肉雞機(jī)體蛋白質(zhì)代謝水平和的常用指標(biāo)。血清總蛋白和白蛋白含量可反映機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的消化狀況和機(jī)體免疫力，血清蛋白質(zhì)是血液的重要組成部分，它不僅反映機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況，還有維持體液的膠體滲透壓，并發(fā)揮離子運(yùn)轉(zhuǎn)、免疫及修補(bǔ)組織等作用[15]。良好的營(yíng)養(yǎng)狀況可使血清總蛋白和白蛋白含量維持在一個(gè)較高水平，二者含量升高表明機(jī)體代謝活動(dòng)旺盛[16]。尿素氮是反映家禽氮代謝一個(gè)重要的指標(biāo)，它是蛋白質(zhì)代謝后的產(chǎn)物，其濃度可以比較準(zhǔn)確地反映動(dòng)物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況[17]，尿素氮濃度越低，說明機(jī)體蛋白質(zhì)代謝越好[18]。唐志剛等[19]研究發(fā)現(xiàn)益生菌顯著降低了肉雞前期尿素氮濃度，也在一定程度上提高了血清總蛋白、白蛋白和球蛋白含量，說明益生菌對(duì)機(jī)體蛋白質(zhì)的代謝有調(diào)節(jié)作用。劉小龍等[20]研究發(fā)現(xiàn)，在AA肉雞飼糧中單獨(dú)或者聯(lián)合添加抗菌肽或合生素(由植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、釀酒酵母和殼寡糖組成)都能顯著提高血清總蛋白和白蛋白含量，降低谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性。

養(yǎng)分表觀利用率的提高說明肉仔雞吸收飼糧中的各養(yǎng)分(蛋白質(zhì)、脂肪和糖類)的能力得到了提升，所以對(duì)血清總蛋白和白蛋白的含量具有提高作用，并且能在一定程度上降低尿素氮濃度和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，不同比例的復(fù)合益生菌制劑均顯著提高了肉仔雞42日齡血清總蛋白含量，血清白蛋白含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和尿素氮濃度雖與對(duì)照組差異不顯著，但在數(shù)值上均高于對(duì)照組。這說明機(jī)體蛋白質(zhì)的代謝可以被復(fù)合益生菌制劑所調(diào)節(jié)，血清總蛋白和白蛋白含量的上升以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性和血清尿素氮濃度的下降，可能是由于飼喂復(fù)合益生菌制劑可以平衡腸道的微生物群，降低腸道pH，同時(shí)還能產(chǎn)生微生物蛋白，分泌蛋白酶；枯草芽孢桿菌基因工程菌所分泌的抗菌肽，在一定程度上也能夠改善肉仔雞胃腸道的消化酶活性，提高肉仔雞蛋白質(zhì)與氨基酸的利用率，使體內(nèi)蛋白質(zhì)的合成代謝作用加強(qiáng)[21]。這與陳靜等[22]在基礎(chǔ)飼糧中添加復(fù)合微生態(tài)制劑能夠顯著提高肉雞血清總蛋白含量，同時(shí)在一定程度上降低了肉雞血清尿素氮濃度的研究結(jié)果一致。

3.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)肉仔雞腸道黏膜形態(tài)的影響

腸道是肉仔雞對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收的重要器官，小腸絨毛高度、隱窩深度和絨腺比的變化是反映消化道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收能力的重要指標(biāo)，所以小腸黏膜形態(tài)對(duì)養(yǎng)分表觀利用率有重要的影響。絨毛高度是細(xì)胞增殖的結(jié)果，絨毛高度越高，越利于小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收；隱窩即腸腺，其深度反映細(xì)胞的生成率，隱窩越淺，細(xì)胞發(fā)育越成熟[23]；絨腺比則綜合反映小腸的功能狀況，絨腺比下降，腸道的吸收能力減弱，絨腺比上升，表明黏膜結(jié)構(gòu)改善，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收能力增強(qiáng)[24]。祁鳳華等[25]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加枯草芽孢桿菌和嗜酸乳桿菌制劑均能顯著降低十二指腸、空腸、回腸隱窩深度，顯著提高絨腺比。張彩鳳等[26]研究發(fā)現(xiàn)，在基礎(chǔ)飼糧中添加1 000 mg/kg由乳酸菌和酵母菌組成的復(fù)合菌制劑可使肉仔雞的空腸絨毛高度和絨腺比顯著升高，改善腸道黏膜形態(tài)，利于維持腸道黏膜形態(tài)健康。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，Ⅱ組、Ⅲ組和Ⅳ組十二指腸、空腸和回腸的絨毛高度、隱窩深度和絨腺比差異不顯著，但均優(yōu)于對(duì)照組。其原因可能是枯草芽孢桿菌為需氧菌，在前胃腸道氧氣較多，能夠使其增殖，分泌抗菌肽，枯草芽孢桿菌隨著小腸后移，氧氣稀薄，停止增殖，抗菌肽分泌減少，其作用也逐漸減弱，所以對(duì)十二指腸的作用大于空腸和回腸。復(fù)合益生菌制劑隨著飼糧一同進(jìn)入消化道后，除了幫助機(jī)體分解和利用飼糧中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之外，還能不斷刺激小腸黏膜，促進(jìn)小腸黏膜的生長(zhǎng)發(fā)育，增加絨毛高度；此外，復(fù)合益生菌還能改善腸道黏液分泌，增強(qiáng)腸道上皮細(xì)胞的緊密連接，調(diào)節(jié)腸道上皮細(xì)胞增殖與分化，修復(fù)受損腸道，降低隱窩深度，從而達(dá)到提高絨腺比的目的；最后，當(dāng)復(fù)合益生菌進(jìn)入體內(nèi)后通過消耗腸腔氧氣、競(jìng)爭(zhēng)抑制和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物等作用方式抑制有害菌在胃腸道內(nèi)的增殖，從而避免有害菌對(duì)腸道黏膜的損害，維持良好的腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)和完善腸道屏障功能[27]。Lam等[28]研究結(jié)果顯示益生菌能通過誘導(dǎo)表皮生長(zhǎng)因子受體的磷酸化水平來促進(jìn)受損腸道的恢復(fù)，還能通過調(diào)節(jié)丁二胺、精胺等聚胺類物質(zhì)的分泌和鳥氨酸脫羧酶的基因表達(dá)來促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞的增殖與分化。本試驗(yàn)中，飼糧中添加不同配比的復(fù)合益生菌制劑均可改善肉仔雞小腸黏膜形態(tài)，具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步的研究與探討。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加不同配比的復(fù)合益生菌制劑均可顯著提高肉仔雞對(duì)干物質(zhì)、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和鈣的表觀利用率，其中Ⅲ組肉仔雞對(duì)飼糧中養(yǎng)分的表觀利用率最高。

② 飼糧中添加不同配比的復(fù)合益生菌制劑均可顯著提高42日齡肉仔雞血清總蛋白含量。

③ 飼糧中添加不同配比的復(fù)合益生菌制劑均可不同程度地改善肉仔雞十二指腸、空腸和回腸的絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度和絨腺比。

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