崔闖飛 王 晶 齊廣海 張海軍 史兆國 武書庚*

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，蘭州 730070；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點開放實驗室，生物飼料開發(fā)國家工程研究中心，北京 100081)

目前，我國是世界上最大的雞蛋生產(chǎn)和消費大國，雞蛋產(chǎn)量和消費量約占世界總量的38%。隨著蛋雞生產(chǎn)的規(guī)?；⒓s化和機械化發(fā)展，蛋殼品質(zhì)問題日益凸顯。據(jù)統(tǒng)計，蛋雞生產(chǎn)中破殼蛋、軟殼蛋的數(shù)量占總產(chǎn)蛋量的6%～13%[1]，我國每年因此造成的經(jīng)濟損失達(dá)5億元人民幣[2]。隨著日齡的增加，蛋雞對營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力下降，導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降[3-4]；且后期蛋重增加、蛋殼變薄，破、軟蛋率超過了20%，蛋殼品質(zhì)問題嚴(yán)峻[5]。蛋殼品質(zhì)問題不僅引起消費者對雞蛋品質(zhì)的擔(dān)憂，也給蛋雞產(chǎn)業(yè)和蛋品加工業(yè)造成了巨大損失，影響了蛋雞行業(yè)的健康發(fā)展。因此，尋求改善蛋殼品質(zhì)的有效措施，尤其對于產(chǎn)蛋后期的蛋雞生產(chǎn)，具有重要的實際意義。

枯草芽孢桿菌是一種微生態(tài)添加劑，是內(nèi)生孢子的革蘭氏陽性好氧菌，具有良好的耐高溫、耐酸堿的能力[6]，在畜牧生產(chǎn)中應(yīng)用廣泛。其孢子形態(tài)可耐受飼料加工過程中溫度、壓力的變化，且在飼料貯存過程中不消耗飼料的營養(yǎng)成分，又能耐受胃酸和膽鹽，進入消化道后仍能保持較高的存活率，在適宜條件下萌發(fā)成為活細(xì)胞發(fā)揮作用[7]?？莶菅挎邨U菌可以促進蛋雞腸道中有益菌增殖，抑制致病菌生長，改善微生物區(qū)系[8]；增加小腸絨毛高度，改善腸道完整性，增強蛋雞對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用[9-10]；減少排泄物中氨、氮含量，降低雞舍有害氣體排放[11-12]。有研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加枯草芽孢桿菌使蛋雞的產(chǎn)蛋率較對照組提高了4.4%，料蛋比降低了0.5%，改善了雞生產(chǎn)性能[13]。試驗還表明，枯草芽孢桿菌能夠增加蛋殼厚度和強度，降低破軟蛋率，改善蛋殼質(zhì)量[14]。目前枯草芽孢桿菌在蛋雞生產(chǎn)上的應(yīng)用多有研究，但對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能和蛋殼品質(zhì)的影響及其機制鮮有報道。因此，本試驗以產(chǎn)蛋后期海蘭褐蛋雞為研究對象，旨在研究飼糧中枯草芽孢桿菌對蛋雞生產(chǎn)性能和蛋殼品質(zhì)的影響及機理，為生產(chǎn)實踐提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

枯草芽孢桿菌菌粉由上海牧冠企業(yè)發(fā)展有限公司提供，其中活菌含量為1.0×1010CFU/g。

1.2 試驗設(shè)計與試驗飼糧

試驗采用單因素試驗設(shè)計，選取420只52周齡產(chǎn)蛋率和體重相近的健康海蘭褐蛋雞，隨機分為4個組，每組7個重復(fù)，每個重復(fù)15只雞，階梯式籠養(yǎng)，每籠(47 cm×37 cm×47 cm)3只雞。對照組飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，試驗組分別在基礎(chǔ)飼糧中添加200、400和800 mg/kg的枯草芽孢桿菌(活菌含量分別為2×109、4×109、8×109CFU/g)。

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)和我國《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)，并結(jié)合海蘭褐蛋雞飼養(yǎng)管理手冊配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

1.3 飼養(yǎng)管理

采用半開放式雞舍3層立體籠養(yǎng)，自然光照加人工補光，光照時間16 h/d、，光照強度20 lx，縱向負(fù)壓通風(fēng)。人工飼喂，每日喂料3次(06:30、13:00和17:30)，每天15:00收蛋。自由采食和飲水，每周消毒1次，常規(guī)免疫。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 生產(chǎn)性能

正試期間，每天以重復(fù)為單位記錄產(chǎn)蛋數(shù)和蛋重，計算平均蛋重和產(chǎn)蛋率。每2周以重復(fù)為單位計算平均日采食量和料蛋比。

1.4.2 蛋殼品質(zhì)

正試期第12周末，連續(xù)3 d，每天每重復(fù)選取6枚接近平均蛋重的蛋樣(去除破殼蛋、軟殼蛋后)，測定蛋品質(zhì)及蛋殼表觀品質(zhì)，保留完整蛋殼用于超微結(jié)構(gòu)的觀察及蛋殼中鈣、磷含量的測定。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1)微量元素和維生素為每千克飼糧提供 The microelements and vitamins provided the following per kg of the diet: VA 12 500 IU，VD34 125 IU，VE 15 IU，VK 2 mg，硫胺素 thiamine 1 mg，核黃素 riboflavin 8.5 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 50 mg，煙酸 niacin 32.5 mg，吡哆醇 pyridoxine 8 mg，生物素 biotin 2 mg，二氫葉酸 folic acid 5 mg，VB125 mg，膽堿choline 500 mg，Mn 65 mg，I 1 mg，F(xiàn)e 60 mg，Cu 8 mg，Zn 66 mg，Se 0.30 mg。

2)代謝能和有效磷為計算值，其余均為實測值。ME and AP were calculated values, while the others were measured values.

蛋殼表觀品質(zhì)的測定：使用分析天平測定蛋殼重量，蛋殼厚度測定儀(Egg Shell Thickness Gauge, Orka Technology Ltd.)測定蛋殼厚度，蛋殼強度分析儀(Egg Force Reader, Orka Technology Ltd.)測定蛋殼強度。

殼重比例(%)=100×蛋殼重/蛋重。

蛋殼超微結(jié)構(gòu)觀察：使用JEOL 6301F場發(fā)射掃描電子顯微鏡觀察蛋殼超微結(jié)構(gòu)。用酒精擦除蛋殼表面油脂，制成小塊樣品，用導(dǎo)電膠帶黏于樣品臺上，噴金，置于電子顯微鏡樣品倉中，在高真空環(huán)境中，在不同倍率下，分別觀察和拍照樣品各個部位。

蛋殼中鈣、磷含量測定：蛋殼用溫?zé)嵴麴s水擦洗干凈，烘干、粉碎，分別采用高錳酸鉀法和比色法測定蛋殼中鈣、磷含量。

1.5 統(tǒng)計分析

數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2010處理，采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進行組間差異顯著性檢驗，以P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，飼糧中添加不同水平的枯草芽孢桿菌對蛋雞的產(chǎn)蛋率、平均蛋重?zé)o顯著影響(P>0.05)；3個試驗組蛋雞的平均日采食量均顯著低于對照組(P<0.05)；3個試驗組蛋雞的料蛋比也低于對照組，且400和800 mg/kg組顯著低于對照組(P<0.05)。以上結(jié)果提示，飼糧中添加400和800 mg/kg枯草芽孢桿菌改善了蛋雞的生產(chǎn)性能。

表2 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

2.2 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋殼品質(zhì)的影響

由表3可知，與對照組相比，飼糧中添加不同水平的枯草芽孢桿菌均能顯著增加蛋雞蛋殼厚度(P<0.05)，顯著降低破軟蛋率(P<0.05)，但3個試驗組之間差異不顯著(P>0.05)；3個試驗組蛋雞蛋殼強度均高于對照組，其中800 mg/kg組顯著高于對照組(P<0.05)；蛋雞蛋殼強度隨著飼糧中枯草芽孢桿菌添加水平的增加呈線性增加(P<0.05)；飼糧中添加不同水平的枯草芽孢桿菌雖有增加蛋雞蛋殼重量的作用，但是各組間差異不顯著(P>0.05)；3個試驗組的蛋雞殼重比例均高于對照組，其中400和800 mg/kg組顯著高于對照組(P<0.05)。以上結(jié)果提示，飼糧中添加400和800 mg/kg枯草芽孢桿菌改善了蛋殼表觀品質(zhì)。

因800 mg/kg組的蛋殼厚度和蛋殼強度均顯著高于對照組(P<0.05)，故觀察該組和對照組的蛋殼超微結(jié)構(gòu)。由圖1可以看出，800 mg/kg組的蛋殼乳突層乳突較多且排列緊密，乳突高度和間隙較小，而對照組乳突層乳突較少且形狀與排列不規(guī)則。此外，在相同放大倍數(shù)下，800 mg/kg組蛋殼的有效厚度與總厚度均高于對照組，表明枯草芽孢桿菌能夠改善蛋殼的超微結(jié)構(gòu)。

由表4可知，各組間蛋殼中磷含量無顯著差異(P>0.05)，但800 mg/kg組蛋殼中鈣含量顯著高于對照組(P<0.05)，說明蛋殼內(nèi)鈣的沉積量增加。

表3 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋殼表觀品質(zhì)的影響

圖1 枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋殼超微結(jié)構(gòu)的影響

%

3 討 論

3.1 飼糧中添加枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能的影響

有研究表明，飼糧中添加枯草芽孢桿菌可以改善動物的生產(chǎn)性能，但其相關(guān)研究結(jié)論不盡相同。王翔宇[15]分別在54和60周齡海蘭褐蛋雞飼糧中添加1×1010CFU/g枯草芽孢桿菌，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，試驗組蛋雞的平均日采食量和料蛋比較對照組有所降低，但差異不顯著。也有試驗發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加1×108和8×105CFU/g枯草芽孢桿菌對蛋雞平均日采食量和料蛋比無顯著影響[16-17]。而丁海[18]和Xu等[19]研究則表明，3×109、6×109和9×109CFU/g對蛋雞產(chǎn)蛋率無顯著影響，但可以顯著降低蛋雞的平均日采食量和料蛋比，改善蛋雞生產(chǎn)性能。該現(xiàn)象可能與枯草芽孢桿菌的添加水平及蛋雞的品種和年齡不同有關(guān)。

本試驗中，飼糧中添加200～800 mg/kg(2×109～8×109CFU/g)枯草芽孢桿菌均降低了蛋雞的平均日采食量，其中飼糧中添加400和800 mg/kg(4×109和8×109CFU/g)枯草芽孢桿菌降低了料蛋比。這可能是由于枯草芽孢桿菌能消耗腸道內(nèi)多余的氧，產(chǎn)生細(xì)菌素及揮發(fā)性抑菌物質(zhì)[20]，創(chuàng)造利于乳酸菌、雙歧桿菌等有益菌的生長環(huán)境，降低腸道pH，從而抑制有害菌的生長，調(diào)節(jié)腸道的微生態(tài)平衡[21-22]；枯草芽孢桿菌還能改善腸道完整性，增強小腸的消化吸收功能[23-24]；可以產(chǎn)生多種消化酶及乳酸、乙酸、丙酸等有益代謝物質(zhì)[25-26]，在消化過程中起到協(xié)同與促進體內(nèi)酶活性的作用，有利于降解飼料中的營養(yǎng)物質(zhì)，提高飼料的轉(zhuǎn)化率，從而降低動物的采食量和料蛋比。

3.2 飼糧中添加枯草芽孢桿菌對產(chǎn)蛋后期蛋雞蛋殼品質(zhì)的影響

蛋殼屬性包含結(jié)構(gòu)屬性和物質(zhì)屬性2部分，均影響蛋殼品質(zhì)[27]。蛋殼的結(jié)構(gòu)屬性包括蛋殼厚度、蛋殼強度、蛋殼比例及蛋殼超微結(jié)構(gòu)等；物質(zhì)屬性則主要為蛋殼有機和無機組分等。蛋殼中含有約1.6%的水、3.3%～3.5%的有機物和95%左右的無機礦物[28-29]，后者主要是碳酸鈣，含量約94%，其余為碳酸鎂和磷酸鈣等。蛋殼鈣含量約為37.5%，其中60%～75%源于飼糧，其余則來自于髓質(zhì)骨鈣的釋放[30]。

改善蛋殼品質(zhì)是蛋雞生產(chǎn)中的重要問題，也是目前國內(nèi)外科研工作者的研究熱點。飼糧中添加枯草芽孢桿菌能提高雞蛋的蛋殼厚度和蛋殼強度，改善蛋殼品質(zhì)，降低破軟蛋率，提高經(jīng)濟效益[19,31]。王翔宇[15]試驗發(fā)現(xiàn)，枯草芽孢桿菌可以改善蛋雞產(chǎn)蛋后期(54周齡之后)的蛋殼表觀品質(zhì)及超微結(jié)構(gòu)，但對蛋白高度、哈氏單位等指標(biāo)無顯著影響。試驗結(jié)果表明，飼糧中添加不同水平的枯草芽孢桿菌均顯著增加了試驗組的蛋殼厚度，顯著降低了破軟蛋率，其中，800 mg/kg組的蛋殼強度和殼重比例較對照組顯著提高。也有研究認(rèn)為，飼糧添加枯草芽孢桿菌能改善蛋雞生產(chǎn)性能，但對蛋殼品質(zhì)無顯著影響[32]，這可能與蛋雞品種、年齡和試驗周期等不同有關(guān)。本試驗中，各組間蛋殼中磷含量無顯著差異，但800 mg/kg組蛋殼中鈣含量顯著高于其他各組，說明鈣在蛋殼內(nèi)的沉積增加。枯草芽孢桿菌改善蛋殼品質(zhì)的作用機理尚不明確，但老齡雞蛋殼品質(zhì)的降低與腸道對鈣吸收效率的降低有關(guān)[33-34]，枯草芽孢桿菌在腸道內(nèi)發(fā)揮作用后，使得腸道對營養(yǎng)物質(zhì)特別是鈣、磷的吸收效率提高，從而改善蛋殼品質(zhì)。腸道對鈣、磷的吸收效率與腸道內(nèi)的酸堿度有關(guān)，酸度的增加，促進鈣鹽溶解，從而有利于腸道對鈣的吸收[35]?？莶菅挎邨U菌可能通過促進乳酸菌的生長及產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物降低腸道pH，從而促進腸道對鈣的吸收效率。研究表明，微生態(tài)制劑能促進蛋雞對飼糧中鈣的吸收[36]，腸道鈣吸收利用率的提高是枯草芽孢桿菌改善蛋殼品質(zhì)的主要原因[37]。

本試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，800 mg/kg組蛋殼的超微結(jié)構(gòu)中乳突層乳突較多，乳突高度、寬度和間隙較小，且蛋殼內(nèi)晶體均勻且排列緊密，而對照組蛋殼乳突層乳突較少，且排列不規(guī)則，這與王翔宇[15]試驗結(jié)果一致，乳突層的緊密排列可有效防止裂縫的產(chǎn)生和延伸。這說明枯草芽孢桿菌還能通過改善蛋殼的微觀結(jié)構(gòu)，改善蛋殼品質(zhì)。

4 結(jié) 論

① 飼糧中添加400和800 mg/kg枯草芽孢桿菌對蛋雞的產(chǎn)蛋率和平均蛋重?zé)o顯著影響，但顯著降低了蛋雞的平均日采食量、料蛋比及破軟蛋率。

② 飼糧中添加800 mg/kg枯草芽孢顯著增加了蛋殼厚度，顯著提高了蛋殼強度，顯著增加了蛋殼重中鈣含量，改善了蛋殼的超微結(jié)構(gòu)。

參考文獻(xiàn)：

[1] ROLAND D A.Research note:egg shell problems:estimates of incidence and economic impact[J].Poultry Science,1988,67(12):1801-1803.

[2] 宋慧芝,王俊,葉均安.雞蛋蛋殼受載特性的有限元研究[J].浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2006,32(3):350-354.

[3] SCHEIDELER S E,AL-BATSHAN H.Basics of calcium,phosphorus nutrition in layers studied[J].Feedstuffs (USA),1994,66(14):15-16.

[4] ROLAND D A.Further studies of effects of sodium aluminosilicate on egg shell quality[J].Poultry Science,1988,67(4):577-584.

[5] NYS Y.Recent developments in layer nutrition for optimising shell quality[C]//Proceedings of 13th European Symposium on Poultry Nutrition.Blankenberge,Belgium:[s.n.],2001:42-52.

[6] 王曉閣.枯草芽孢桿菌研究進展與展望[J].中山大學(xué)研究生學(xué)刊(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版),2012,33(3):14-23.

[7] CENCI G,TROTTA F,CALDINI G.Tolerance to challenges miming gastrointestinal transit by spores and vegetative cells ofBacillusclausii[J].Journal of Applied Microbiology,2006,101(6):1208-1215.

[8] OH J K,PAJARILLO E A B,CHAE J P,et al.Protective effects ofBacillussubtilisagainst Salmonella infection in the microbiome of Hy-Line brown layers[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,2017,30(9):1332-1339.

[9] 張愛武,薛軍.枯草芽孢桿菌在動物生產(chǎn)中的應(yīng)用效果[J].中國畜牧獸醫(yī),2011,38(4):234-238.

[10] 馬春陽,羅正,李鴻博,等.微生態(tài)制劑對蛋雞生長性能和腸道菌群及抗體效價的影響[J].中國畜牧雜志,2015,51(5):60-64.

[11] SANTOSO U,OHTANI S,TANAKA K,et al.DriedBacillussubtilisculture reduced ammonia gas release in poultry house[J].Asian-Australasian Journal of Animal Sciences,1999,12(5):806-809.

[12] KIM H J,WOO J S,KWON O S,et al.Effects ofBacillussubtilissupplementation on egg quality,blood characteristics and fecal NH3-N in laying hens[J].Korean Journal of Poultry Science,2005,32(1):9-14.

[13] ABDELQADER A,AL-FATAFTAH A R,DAG.Effects of dietaryBacillussubtilisand inulin supplementation on performance,eggshell quality,intestinal morphology and microflora composition of laying hens in the late phase of production[J].Animal Feed Science and Technology,2013,179(1/2/3/4):103-111.

[14] GUO J R,DONG X F,LIU S,et al.Effects of long-termBacillussubtilisCGMCC 1.921 supplementation on performance,egg quality,and fecal and cecal microbiota of laying hens[J].Poultry Science,2016,96(5):1280-1289.

[15] 王翔宇.枯草芽孢桿菌對蛋雞生產(chǎn)性能及蛋品質(zhì)的影響[D].碩士學(xué)位論文.長春:吉林大學(xué),2015.

[16] RIBEIRO V,Jr,ALBINO L F T,ROSTAGNO H S,et al.Effects of the dietary supplementation ofBacillussubtilis,levels on performance,egg quality and excreta moisture of layers[J].Animal Feed Science and Technology,2014,195:142-146.

[18] 丁海.枯草芽孢桿菌對蛋雞生產(chǎn)性能及盲腸菌群區(qū)系影響的研究[D].碩士學(xué)位論文.銀川:寧夏大學(xué),2013.

[19] XU C L,JI C,MA Q,et al.Effects of a driedBacillussubtilisculture on egg quality[J].Poultry Science,2006,85(2):364-368.

[20] 翟茹環(huán).枯草芽孢桿菌G8抗菌物質(zhì)的理化性質(zhì)分析及分離純化[D].碩士學(xué)位論文.泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2008.

[21] KNARREBORG A,BROCKMANN E,H?YBYE K,et al.Bacillussubtilis(DSM17299) modulates the ileal microbial communities and improves growth performance in broilers[J].International Journal of Probiotics & Prebiotics,2008,3(2):83-88.

[22] KNAP I,KEHLET A B,BENNEDSEN M,et al.Bacillussubtilis(DSM17299) significantly reducesSalmonellain broilers[J].Poultry Science,2011,90(8):1690-1694.

[23] SAMANYA M,YAMAUCHI K E.Histological alterations of intestinal villi in chickens fed driedBacillussubtilisvar. natto[J].Comparative Biochemistry and Physiology Part A:Molecular & Integrative Physiology,2002,133(1):95-104.

[24] TEO A Y,TAN H M.Evaluation of the performance and intestinal gut microflora of broilers fed on corn-soy diets supplemented withBacillussubtilisPB6 (CloSTAT)[J].The Journal of Applied Poultry Research,2007,16(3):296-303.

[25] 江國忠.高產(chǎn)纖維素酶枯草芽孢桿菌的篩選、應(yīng)用及其產(chǎn)酶條件研究[D].碩士學(xué)位論文.南昌:南昌大學(xué),2010.

[26] SCHOLZ-AHRENS K E,ADE P,MARTEN B,et al.Prebiotics,probiotics,and synbiotics affect mineral absorption,bone mineral content,and bone structure[J].The Journal of Nutrition,2007,137(3):838S-846S.

[27] BAIN M M.Recent advances in the assessment of eggshell quality and their future application[J].World,s Poultry Science Journal,2005,61(2):268-277.

[28] AGRONOMIQUE F.Egg formation and chemistry[M]//NYS Y,BAIN M,VAN IMMERSEEL F.Improving the safety and quality of eggs and egg products:egg chemistry,production and consumption.Cambridge:Woodhead Publishing,2011:83.

[29] TSAI W T,YANG J M,LAI C W,et al.Characterization and adsorption properties of eggshells and eggshell membrane[J].Bioresource Technology,2006,97(3):488-493.

[30] MICHAEL B C.Involvement of calcium and phosphorus in bone and shell quality of early maturing commercial layers[J].World Poultry,2001,6:16-19.

[31] ABDELQADER A,IRSHAID R,AL-FATAFTAH A R.Effects of dietary probiotic inclusion on performance,eggshell quality,cecal microflora composition,and tibia traits of laying hens in the late phase of production[J].Tropical animal health and production,2013,45(4):1017-1024.

[32] 裴躍明,邵強,吳桂龍,等.枯草芽孢桿菌制劑對產(chǎn)蛋后期蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、免疫及腸道菌群的影響[J].中國畜牧雜志,2016,52(7):61-65,70.

[33] AL-BATSHAN H A,SCHEIDELER S E,BLACK B L,et al.Duodenal calcium uptake,femur ash,and eggshell quality decline with age and increase following molt[J].Poultry Science,1994,73(10):1590-1596.

[34] GROBAS S,MENDEZ J,DE BLAS C,et al.Influence of dietary energy,supplemental fat and linoleic acid concentration on performance of laying hens at two ages[J].British Poultry Science,1999,40(5):681-687.

[35] ASHMEAD H D,GRAFF D J,ASHMEAD H H.Factors affecting mineral absorption from the intestine[M]//CHARLES C.Intestinal absorption of metal ions.Springfield:Thomas Pub.,1985:13-29.

[36] NAHASHON S N,NAKAUE H S,MIROSH L W.Production variables and nutrient retention in single comb white leghorn laying pullets fed diets supplemented with direct-fed microbials[J].Poultry Science,1994,73(11):1699-1711.