王煜恒 徐孝宙 王會(huì)聰 陳 軍 張 坤 倪新毅

(江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，畜牧獸醫(yī)學(xué)院，鎮(zhèn)江 212400)

黃芪多糖(Astragaluspolysaccharin,APS)是中藥黃芪的提取物，由葡萄糖、半乳糖等組成，具有調(diào)節(jié)體液免疫、細(xì)胞免疫等免疫調(diào)節(jié)功能，同時(shí)具有增加機(jī)體抵抗各種應(yīng)激和氧化的能力，還具有改善腸道結(jié)構(gòu)等生物學(xué)功能[5-7]。隨著黃芪多糖工業(yè)化生產(chǎn)技術(shù)的突破以及黃芪多糖藥理作用研究的深入，目前黃芪多糖已廣泛應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)，均顯示其良好的效果，并其在一些水產(chǎn)動(dòng)物上的應(yīng)用也取得了不錯(cuò)的效果。向梟等[6]研究表明飼料中添加0.040%～0.074%的黃芪多糖能提高齊口裂腹魚的生長(zhǎng)性能和免疫能力，其他學(xué)者也在鯉魚[8]、羅非魚[9]和異育銀鯽[10]上證實(shí)了黃芪多糖具有提高魚體非特異性免疫能力的作用。但是，還未見黃芪多糖在提高肉食性魚類生長(zhǎng)性能、消化性能、免疫能力和抗氧化能力等方面的報(bào)道。本試驗(yàn)通過在雜交鱧飼料中添加不同水平的黃芪多糖，來研究其對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能和機(jī)體免疫力等的影響，探討黃芪多糖增強(qiáng)機(jī)體免疫力降低疾病發(fā)生的機(jī)制，旨在開發(fā)出一種雜交鱧綠色環(huán)保、無副作用、增強(qiáng)機(jī)體免疫力的功能型配合飼料，在降低疾病爆發(fā)的同時(shí)還有一定促進(jìn)生長(zhǎng)和改善肉質(zhì)的作用。

1 材料與方法

1.1 黃芪多糖的來源和飼料制作

本試驗(yàn)中用到的黃芪多糖購(gòu)自北京生泰爾生物技術(shù)有限公司，其純度為64.5%。選用魚粉、豆粕、棉籽粕、菜籽粕為蛋白質(zhì)源，按1∶1混合的魚油和豆油作為脂肪源，面粉為糖源配制基礎(chǔ)飼料，基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、0.25、0.50、1.00、1.50和2.00 g/kg的黃芪多糖，制成6種試驗(yàn)飼料。在飼料配制過程中首先把原料粉碎并過60目篩，然后按比例稱重，接著使用混勻機(jī)混合均勻，添加適量水后加工成粒徑為2 mm的顆粒飼料，自然晾干，保存于-20 ℃冰箱中備用。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))

預(yù)混料為每千克飼料提供 Premix supplied the following for per kg of the diet:CuSO4·5H2O 20 mg，F(xiàn)eSO4·7H2O 250 mg，ZnSO4·7H2O 220 mg，MnSO4·4H2O 70 mg，Na2SeO30.4 mg，KI 0.26 mg，CoCl2·6H2O 1 mg，VA 9 000 IU，VD 2 000 IU，VE 45 mg，VK32.2 mg，VB13.2 mg，VB210.9 mg，煙酸 nicotinic acid 28 mg，VB520 mg，VB65 mg，VB120.016 mg，VC 50 mg，泛酸 pantothenate 10 mg，葉酸 folic acid 1.65 mg，膽堿 choline 600 mg。

1.2 試驗(yàn)魚

試驗(yàn)用雜交鱧購(gòu)自杭州余杭區(qū)黑魚研究所，初重為(24.5±0.5)g，試驗(yàn)魚先馴化2周，前期先用新鮮魚糜捏成團(tuán)投喂于水面，然后在魚糜中逐步添加試驗(yàn)飼料直到幼魚能全部攝食試驗(yàn)飼料。馴化攝食結(jié)束后，每個(gè)網(wǎng)箱(尺寸：1 m×1 m×1 m)挑選大小均一、健康無傷的雜交鱧魚苗30尾，共6組，每組4個(gè)網(wǎng)箱。網(wǎng)箱固定于特制的2個(gè)內(nèi)徑4 m×4 m的鋼架浮筏上，鋼架置于0.3 hm2未進(jìn)行生產(chǎn)養(yǎng)殖的池塘，池塘無增氧設(shè)施。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)和飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)開始后，6個(gè)試驗(yàn)組分別投喂在基礎(chǔ)飼料中添加0(APS0組，作為對(duì)照組)、0.25(APS0.25組)、0.50(APS0.50組)、1.00(APS1.00組)、1.50(APS1.50組)和2.00 g/kg(APS2.00組)黃芪多糖的試驗(yàn)飼料，每天投飼3次(07:00、12:00、17:00)，日投飼率為體重的3%～5%。試驗(yàn)周期為60 d。試驗(yàn)期間，水溫(27±3) ℃，pH在6.8～8.0，氨氮濃度<0.2 mg/L，溶解氧濃度>5 mg/L。

1.4 樣品采集

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，計(jì)數(shù)每個(gè)網(wǎng)箱中的試驗(yàn)魚并全部稱重，然后計(jì)算增重率和成活率。統(tǒng)計(jì)每組飼料的投喂總量，計(jì)算飼料系數(shù)。每個(gè)網(wǎng)箱隨機(jī)抽取3尾魚，測(cè)量體長(zhǎng)和個(gè)體重后采血，采血部位為尾靜脈，血液采集后置于抗凝管中，其中一部分立刻用于進(jìn)行全血呼吸爆發(fā)強(qiáng)度的測(cè)定，剩余部分4 ℃下3 500 r/min離心10 min，取上清液放入-80 ℃保存；每個(gè)網(wǎng)箱另隨機(jī)取3尾魚，解剖后取肝臟和腸道，用4 ℃預(yù)冷的生理鹽水清洗后用濾紙吸干，-80 ℃保存?zhèn)溆?；每個(gè)網(wǎng)箱再隨機(jī)取2尾魚，取腸道中部切成1 mm3小塊放入固定液中，用于電鏡分析。

1.5 樣品分析

稱取全部腸道和肝臟的重量，然后按1∶4的質(zhì)量體積比加入生理鹽水進(jìn)行勻漿，勻漿后放入離心機(jī)中，在4 ℃、3 000×g條件下進(jìn)行離心，然后吸取上清液于-20 ℃保存，以備分析腸道中蛋白酶(protease)、脂肪酶(lipase)和淀粉酶(amylase)活性以及肝臟中過氧化氫酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。

腸道中脂肪酶和淀粉酶活性，血漿和肝臟中CAT、SOD活性與MDA含量以及血漿中溶菌酶(lysozyme,LSZ)、酸性磷酸酶(acid phosphatase,ACP)活性及總抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，詳細(xì)操作步驟見說明書。腸道中蛋白酶活性采用福林-酚試劑法[11]測(cè)定。血漿中補(bǔ)體3(complement 3，C3)、補(bǔ)體4(complement 4，C4)和免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)含量的測(cè)定采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒測(cè)定，詳細(xì)操作步驟見說明書。

采用Anderson等[12]所描述的硝基四氮唑藍(lán)(nitro-blue tetrazolium,NBT)方法進(jìn)行全血呼吸爆發(fā)活力的測(cè)定，具體如下：1)在100 μL抗凝血中加入100 μL 0.2%NBT(將0.2 g NBT溶于100 mL的無菌0.65%～0.70%的生理鹽水中制得NBT染液)，25 ℃孵育30 min(EP管中)。2)取50 μL上述反應(yīng)液，加入1 mL N,N-二甲基甲酰胺，混勻后在2 000 r/min下離心5 min。3)取離心后的上清液1 mL，在540 nm下讀取光密度(OD)值，以1 mL N,N-二甲基甲酰胺作為空白對(duì)照。全血呼吸爆發(fā)強(qiáng)度以NBT反應(yīng)的OD值表示。

腸道透射電鏡樣品的制備和測(cè)量：取腸道中部組織，切成0.5～1.0 mm3的小塊用磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗2次后直接加入2.5%戊二醛固定24 h；用1%的鋨酸固定直至成為黑色；送電鏡室脫水、包埋、切片后置透射電鏡(HT-7700，日立透射電子顯微鏡)下觀察。最后每組選取3個(gè)樣品進(jìn)行電鏡觀察，使用Imagepro-plus軟件測(cè)量腸道微絨毛長(zhǎng)度，每個(gè)樣品隨機(jī)測(cè)量10根，每組得出30個(gè)數(shù)據(jù)后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.6 生長(zhǎng)性能指標(biāo)計(jì)算公式

增重率(weight gain rate,WGR,%)=100×(末重-初重)/初重；成活率(survival rate,SR,%)=100×終末成活尾數(shù)/初始投放尾數(shù)；飼料系數(shù)(feed conversion ratio,FCR)=攝食量/(末重-初重)。

1.7 攻毒試驗(yàn)

采樣結(jié)束后，在每個(gè)網(wǎng)箱中選擇規(guī)格基本相近的試驗(yàn)魚15尾進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，每組3個(gè)網(wǎng)箱。攻毒使用的嗜水氣單胞菌由中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院淡水漁業(yè)研究中心提供，將其用無菌生理鹽水稀釋至1×106CFU/mL(通過預(yù)試驗(yàn)得出的雜交鱧半致死濃度)。按每100 g腹腔注射菌液1 mL的劑量注射后放回網(wǎng)箱，繼續(xù)正常投餌，觀察其在96 h內(nèi)的累積死亡率，每天觀察3次。

累積死亡率(%)=100×死亡魚尾數(shù)/攻毒魚尾數(shù)。

1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析

采用SPSS 18.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，并采用Duncan氏法進(jìn)行組間的多重比較，顯著水平為P<0.05。數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 黃芪多糖對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能的影響

從表2中可以得出，APS1.50和APS2.00組的末重和增重率顯著高于APS0、APS0.25、APS0.50和APS1.00組(P<0.05)，APS1.00組的末重和增重率顯著高于APS0.25組(P<0.05)，APS0、APS0.50和APS1.00之間末重和增重率無顯著差異(P>0.05)。飼料系數(shù)在各組之間無顯著差異(P>0.05)，但是隨著飼料中黃芪多糖添加量的增加，飼料系數(shù)先有下降趨勢(shì)，在APS1.50組達(dá)到最低，當(dāng)黃芪多糖添加量再增加后飼料系數(shù)則略有上升。成活率在各組之間無顯著差異(P>0.05)。

表2 黃芪多糖對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能的影響

同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。下表同。

Values in the same column with different letter superscripts were significantly different (P<0.05). The same as below.

2.2 黃芪多糖對(duì)雜交鱧腸道消化酶活性和微絨毛長(zhǎng)度的影響

由表3可知，在飼料中添加不同水平的黃芪多糖對(duì)雜交鱧腸道淀粉酶活性沒有產(chǎn)生顯著影響(P>0.05)。腸道蛋白酶和脂肪酶活性均隨飼料中黃芪多糖添加量的增加呈先上升后下降趨勢(shì)，APS1.50組顯著高于APS0和APS0.25組(P<0.05)，但與APS1.00和APS2.00組差異不顯著(P>0.05)。

圖1和表3可以看出，隨著飼料中黃芪多糖添加量的增加，雜交鱧腸道微絨毛長(zhǎng)度先隨之增長(zhǎng)，在添加量為1.50 g/kg時(shí)有最高值，繼續(xù)增加添加量則出現(xiàn)下降，同時(shí)APS1.50和APS2.00組顯著高于APS0、APS0.50和APS0.25組(P<0.05)。

表3 黃芪多糖對(duì)雜交鱧腸道消化酶活性和微絨毛長(zhǎng)度的影響

2.3 黃芪多糖對(duì)雜交鱧血液免疫指標(biāo)的影響

由表4可知，血漿中LSZ活性與C3、C4含量以及全血呼吸爆發(fā)活力均隨著飼料中黃芪多糖添加量的增加先升高后降低，最高值均出現(xiàn)在APS1.50組，顯著高于APS0組(P<0.05)，除C3含量與APS1.00組差異顯著(P<0.05)外，其他指標(biāo)與APS1.00和APS2.00組差異均不顯著(P>0.05)。血漿中ACP活性的變化趨勢(shì)與LSZ類似，但ACP活性最高值出現(xiàn)在APS1.00組，顯著高于APS0組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。

圖1 雜交鱧的腸道微絨毛的透射電鏡顯微圖

組別Groups血漿Plasma溶菌酶LSZ/(μg/mL)酸性磷酸酶ACP/(U/dL)補(bǔ)體3C3/(μg/mL)補(bǔ)體4C4/(μg/mL)全血呼吸爆發(fā)Wholebloodrespiratoryburst(OD540nm)APS05.20±0.10a350.42±6.37a75.7±5.8a144±5a0.36±0.02aAPS0.255.35±0.08ab361.90±7.47ab80.5±3.2ab147±4a0.42±0.02abAPS0.505.45±0.08b364.76±7.51ab88.6±2.4ab148±8ab0.47±0.03abAPS1.005.52±0.05b374.00±3.76b90.3±8.3ab153±7ab0.46±0.06abAPS1.505.52±0.06b367.54±4.54ab108.1±1.3c165±6b0.50±0.04bAPS2.005.43±0.06b362.31±7.31ab101.3±2.8c161±4ab0.42±0.03ab

2.4 黃芪多糖對(duì)雜交鱧血漿中IgM含量的影響

由圖2可知，血漿中IgM含量在APS0組最低(1.22 g/L)，顯著低于APS0.50、APS1.00、APS1.50和APS2.00組(P<0.05)，但與APS0.25組差異不顯著(P>0.05)。血漿中IgM含量最高值出現(xiàn)在APS1.50組，為1.75 g/L，顯著高于APS0和APS0.25組(P<0.05)，與其他各組差異不顯著(P>0.05)。

2.5 黃芪多糖對(duì)雜交鱧血漿和肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，雜交鱧血漿中CAT活性隨著飼料中黃芪多糖添加量的增加先不斷升高，當(dāng)添加量達(dá)到0.25 g/kg后又有所降低，APS0.50、APS1.00、APS1.50和APS2.00組均顯著高于APS0和APS0.25組(P<0.05)，同時(shí)APS1.00和APS1.50組還顯著高于APS0.50和APS2.00組(P<0.05)。血漿中SOD活性和T-AOC的變化趨勢(shì)與CAT相似，表現(xiàn)為APS1.00和APS1.50組顯著高于其他4組(P<0.05)，其中APS1.50組有最高值。血漿中MDA含量隨飼料中APS添加量的增加先降低后升高，最低值出現(xiàn)在APS1.50組，顯著低于APS0、APS0.25和APS0.50組(P<0.05)，但與APS1.00和APS2.00組差異不顯著(P>0.05)。

由表6可知，雜交鱧肝臟中CAT活性隨飼料中黃芪多糖添加量的增加先升高后降低，當(dāng)添加量為1.50 g/kg時(shí)達(dá)到最高，APS1.50組顯著高于APS0、APS0.25、APS0.50組(P<0.05)，略高于APS1.00和APS2.00組(P>0.05)。APS2.00組雜交鱧肝臟中SOD活性最高，顯著于其他5組(P<0.05)。肝臟中MDA含量隨飼料中黃芪多糖添加量的增加先降低后增加，APS1.50組為所有組中最低，且APS1.50和APS2.00組顯著低于其他4組(P<0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)注不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

Date columns with different letters were significantly different (P<0.05).

圖2黃芪多糖對(duì)雜交鱧血漿中IgM含量的影響

Fig.2 Effects of APS on plasma IgM content of

hybrid snakehead

2.6 黃芪多糖對(duì)雜交鱧累積死亡率的影響

注射嗜水氣單胞菌后雜交鱧累積死亡率的趨勢(shì)如圖4所示，雜交鱧累積死亡率最低的為APS1.50組，顯著低于APS0、APS0.50和APS0.25組(P<0.05)，但與APS1.00和APS2.00組差異不顯著(P>0.05)。

3 討 論

3.1 黃芪多糖對(duì)雜交鱧生長(zhǎng)性能的影響

從已發(fā)表的研究結(jié)果來看，黃芪多糖在水產(chǎn)動(dòng)物上的應(yīng)用具有顯著的促生長(zhǎng)作用，如在齊口裂腹魚[6]、羅非魚[13]、克氏原螯蝦[14]和尼羅羅非魚[15]上。本試驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)黃芪多糖的添加量為1.50或2.00 g/kg時(shí)，雜交鱧的生長(zhǎng)性能顯著高于未添加黃芪多糖的對(duì)照組。這可能與以下幾個(gè)方面有關(guān)：1)黃芪多糖是從中藥黃芪中提取的具有特殊生物活性的多糖，在飼料中適量添加能促進(jìn)腸道內(nèi)乳酸菌、酵母菌、假單胞菌、雙歧桿菌等有益菌的增殖，而有益菌自身能產(chǎn)生各種消化酶，最終提高了魚體的消化酶活性[16]；2)黃芪多糖通過促進(jìn)魚體消化液的分泌，提高了機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收[17]；3)黃芪多糖可顯著提高腸道絨毛長(zhǎng)度、皺褶深度和肌層厚度，增加腸道黏液細(xì)胞和上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量[18]，從而提高魚體的消化吸收能力，促進(jìn)生長(zhǎng)；4)黃芪多糖中某些活性物質(zhì)可促進(jìn)動(dòng)物蛋白質(zhì)的合成，使動(dòng)物所吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)合成其本身蛋白質(zhì)能力增強(qiáng)，從而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)速度[6,19]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，黃芪多糖能促進(jìn)雜交鱧腸道微絨毛的發(fā)育，同時(shí)增強(qiáng)了腸道消化酶的活性，提高了機(jī)體對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收，加快了生長(zhǎng)速度，并降低了飼料系數(shù)。作為肉食性魚類的雜交鱧，在本試驗(yàn)條件下促生長(zhǎng)效果較佳的黃芪多糖添加量為1.50～2.00 g/kg，與其他學(xué)者得出的齊口裂腹魚[6]飼料中適宜黃芪多糖添加量為0.040%～0.074%、羅非魚需要黃芪多糖脂質(zhì)體100～200 mL/kg[13]、克氏原螯蝦飼料中黃芪多糖適宜添加量為0.40%～0.80%[14]和尼羅羅非魚添加1 500 mg/kg的黃芪多糖生長(zhǎng)速度最快[15]的結(jié)果存在差異，這可能與試驗(yàn)魚的食性、生長(zhǎng)階段以及黃芪多糖的純度等有關(guān)，因此在生產(chǎn)養(yǎng)殖中添加應(yīng)用時(shí)還需對(duì)以上因素進(jìn)行考慮。

表5 黃芪多糖對(duì)雜交鱧血漿抗氧化指標(biāo)的影響

表6 黃芪多糖對(duì)雜交鱧肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

數(shù)據(jù)點(diǎn)標(biāo)注不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

Date points with different letters were significantly different (P<0.05).

圖3黃芪多糖對(duì)雜交鱧累積死亡率的影響

Fig.3 Effects of APS on cumulative mortality of

hybrid snakehead

3.2 黃芪多糖對(duì)雜交鱧免疫能力的影響

魚類的特異性免疫系統(tǒng)相對(duì)不完善，因此主要是非特異性免疫在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮主要作用，其主要包括LSZ、ACP、補(bǔ)體和抗菌肽等物質(zhì)。LSZ能水解致病菌中的黏多糖，起到殺滅外界細(xì)菌的作用，是動(dòng)物機(jī)體重要的非特異性免疫因子[20]，它的活性是衡量動(dòng)物體非特異性免疫力的一個(gè)重要量化指標(biāo)[21]。ACP是巨噬細(xì)胞內(nèi)溶酶體的標(biāo)志酶，在動(dòng)物血細(xì)胞進(jìn)行吞噬和包圍化的免疫反應(yīng)中，會(huì)伴隨有ACP的釋放[22]。補(bǔ)體是魚類免疫系統(tǒng)的重要組成部分，具有對(duì)抗微生物侵入和清除免疫復(fù)合物的功能[23]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加適量的黃芪多糖能促進(jìn)雜交鱧機(jī)體的非特異性免疫力，增強(qiáng)機(jī)體的抗病力，當(dāng)添加量為1.50 g/kg時(shí)效果達(dá)到最佳。這與在羅非魚飼料中添加1 000和 1 500 mg/kg的黃芪多糖能提高魚體的非特異性免疫力的研究結(jié)果[24]相似。柏冬志等[25]認(rèn)為黃芪多糖能提高機(jī)體免疫能力的原因在于黃芪多糖能增加細(xì)胞的代謝能力，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育，對(duì)體內(nèi)T細(xì)胞、B細(xì)胞、自然殺傷(NK)細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能和活性有促進(jìn)作用。在基因?qū)用鎰t表現(xiàn)為黃芪多糖能促進(jìn)細(xì)胞中DNA及RNA的合成與轉(zhuǎn)錄，以及蛋白質(zhì)的合成與表達(dá)，尤其是與某些疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)水平[26]。

免疫球蛋白主要參與魚類的體液免疫，而IgM是魚體內(nèi)重要的免疫球蛋白，在免疫應(yīng)激中發(fā)揮著重要的作用，其含量的上升代表著機(jī)體免疫機(jī)能的提高。陳強(qiáng)等[27]的研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中添加300 mg/kg的黃芪多糖，在21日齡時(shí)，其血清中IgM的含量較其他各組有顯著增加。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)雜交鱧血漿中IgM的含量隨飼料中黃芪多糖添加量的增加先升高后降低，在添加量為1.50 g/kg時(shí)達(dá)到最高值，由此可見適宜添加量的黃芪多糖能提高雜交鱧的體液免疫能力。

3.3 黃芪多糖對(duì)雜交鱧抗氧化能力的影響

當(dāng)魚體處在病理或者應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生過量的活性氧和自由基，它們能夠通過攻擊蛋白質(zhì)、DNA和細(xì)胞膜等，從而使機(jī)體的代謝系統(tǒng)出現(xiàn)紊亂，最終將導(dǎo)致魚體的生長(zhǎng)發(fā)育緩慢、免疫機(jī)能下降、飼料系數(shù)增加，并危害水產(chǎn)品的質(zhì)量[28-29]。當(dāng)機(jī)體內(nèi)活性氧和自由基含量上升時(shí)，血液中SOD和CAT的活性都會(huì)出現(xiàn)升高以清除這些有害物質(zhì)[30]。張偉妮等[24]研究發(fā)現(xiàn)，在羅非魚飼料中添加適量黃芪多糖能顯著提高其血漿中SOD和CAT的活性，提高肝臟和心臟等各組織中SOD和CAT的活性，同時(shí)還能降低這些組織中MDA的含量；Jia等[31]研究顯示，在羅非魚飼料中添加1.5、3.0 g/kg的黃芪多糖可以顯著降低四氯化碳(CCl4)損傷肝細(xì)胞培養(yǎng)液和血清中SOD的活性和T-AOC，并且能顯著抑制肝臟組織中MDA的合成量；陳亞軍等[32]研究表明，黃芪多糖能顯著降低環(huán)磷酰胺(一種免疫抑制劑)對(duì)大鱗副泥鰍肝胰臟抗氧化體系的損傷作用，對(duì)機(jī)體免疫功能具有較好的調(diào)節(jié)作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中添加適量的黃芪多糖能夠顯著提高雜交鱧血漿和肝臟中SOD和CAT活性，同時(shí)能顯著抑制血漿和肝臟中MDA合成，這些表明在飼料中添加適量的黃芪多糖能提高雜交鱧機(jī)體抗氧化酶的活性，降低氧自由基對(duì)機(jī)體的損傷，從而增加機(jī)體的抗氧化能力，與Yan等[33]、Li等[34]和Elabd等[35]所得結(jié)論類似。

3.4 黃芪多糖對(duì)雜交鱧抗病力的影響

魚類急性攻毒試驗(yàn)可通過統(tǒng)計(jì)短期內(nèi)累積死亡率來評(píng)價(jià)魚體的抗病力。洪徐鵬等[36]在給克氏原螯蝦注射白斑病毒(WSSV)后，與陽性對(duì)照組相比，添加0.8%的黃芪多糖可提高26.67%的存活率，因此表明黃芪多糖可提高克氏原螯蝦抗WSSV的能力；此外，在鯉魚[9]和鯰魚[37]上的攻毒試驗(yàn)也證明黃芪多糖同樣起到了增強(qiáng)魚體抗病力的作用。本試驗(yàn)結(jié)果與之類似，飼料中添加黃芪多糖能降低雜交鱧經(jīng)嗜水氣單胞菌攻毒后的累積死亡率，進(jìn)一步說明黃芪多糖在提高魚體的免疫能力和抗氧化能力后，增強(qiáng)了對(duì)疾病的抵抗能力，降低了發(fā)病率和死亡率。許明等[38]發(fā)現(xiàn)在草魚飼料中添加黃芪多糖和維生素等對(duì)出血病能起到很好的治療效果，這又從實(shí)踐應(yīng)用上驗(yàn)證了黃芪多糖能提高魚體的抗病能力。

4 結(jié) 論

在飼料中添加黃芪多糖能提高雜交鱧的生長(zhǎng)性能、免疫能力、抗氧化能力和抗病力，當(dāng)添加量大于1.00 g/kg時(shí)表現(xiàn)出較明顯的效果，但達(dá)到2.00 g/kg時(shí)作用效果又略有下降，因此，雜交鱧飼料中黃芪多糖的適宜添加量為1.50 g/kg。

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Author, WANG Yuheng, lecturer, E-mail: yuhengyg@163.com