董 麗 王淑楠 劉 軍 毛俊舟 彭 眾 霍永久 魏瑧武 包文斌 喻禮懷

(揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，揚(yáng)州 225009)

茶樹(shù)油(tea tree oil, TTO)是從桃金娘科(Myrtaceae)白千層屬(Melaleuca)植物互葉白千層(Melaleucaahemifolia)的新鮮枝葉中蒸餾提取所得的芳香精油。茶樹(shù)油具廣譜抗菌、抗腫瘤、解除焦慮和提高機(jī)體免疫功能等功效[10-11]。本實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果表明，在飼糧中添加適量茶樹(shù)油可一定程度促進(jìn)斷奶仔豬生長(zhǎng)，降低腹瀉，促進(jìn)肝臟和胸腺的發(fā)育，且具有一定的調(diào)節(jié)脂肪代謝作用，可一定程度替代抗生素的使用，且添加100 mg/kg茶樹(shù)油效果較好。茶樹(shù)油在抗氧化方面也具有積極作用。有研究表明，茶樹(shù)油中含有的某些成分能與自由基結(jié)合，進(jìn)而可以清除機(jī)體內(nèi)的自由基以達(dá)到減緩人體衰老、治療疾病的作用[12]。因此，本試驗(yàn)在實(shí)驗(yàn)室前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬血清、肝臟、空腸和回腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響，并與抗生素的添加效果進(jìn)行對(duì)比，從而為新型無(wú)公害飼料添加劑的開(kāi)發(fā)提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用茶樹(shù)油為粉狀飼料添加劑，由無(wú)錫晨芳生物科技有限公司提供，其主要成分含量為：松油醇-4>60%，對(duì)傘花烴5%～10%，桉葉素2%～10%，α-松油醇>3%，α-松油烯<10%，α-派烯<0.5%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取21日齡體重[(6.73±0.12) kg]相近的健康“杜×長(zhǎng)×大”三元雜交斷奶仔豬120頭，采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，隨機(jī)分為5組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)4頭仔豬，公母各占1/2。5個(gè)組分別為對(duì)照組(CON組，飼喂基礎(chǔ)飼糧)、抗生素組[(ANT組，飼喂基礎(chǔ)飼糧+200 mg/kg硫酸黏菌素(10%)+75 mg/kg金霉素(15%)]、低茶樹(shù)油組(LTO組，飼喂基礎(chǔ)飼糧+50 mg/kg茶樹(shù)油)、中茶樹(shù)油組(MTO組，飼喂基礎(chǔ)飼糧+100 mg/kg茶樹(shù)油)和高茶樹(shù)油組(HTO組，飼喂基礎(chǔ)飼糧+150 mg/kg茶樹(shù)油)。試驗(yàn)期21 d。基礎(chǔ)飼糧參照NRC(2012)仔豬營(yíng)養(yǎng)需要標(biāo)準(zhǔn)并結(jié)合生產(chǎn)實(shí)踐配制，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1)預(yù)混料為每千克飼糧提供 The premix provided the following per kilogram of the diet: VA 6 000 IU，VD 3 400 IU，VE 50 IU，VK32 mg，VB13.5 mg，VB25.5 mg，VB63.5 mg，VB1225.0 μg，生物素 biotin 0.05 mg，葉酸 folic acid 0.3 mg，D-泛酸D-pantothenic acid 20 mg，煙酸niacin 20 mg，氯化膽堿 choline chloride 500 mg，F(xiàn)e 110 mg，Zn 100 mg，Cu 20 mg，Mn 15 mg，Se 0.30 mg，I 0.40 mg。

2)消化能為計(jì)算值，其余為實(shí)測(cè)值。DE was a calculated value, while the others were measured values.

5組試驗(yàn)豬飼養(yǎng)在同一豬舍，各重復(fù)皆分隔為相同的圈，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件一致。試驗(yàn)期間試驗(yàn)豬沒(méi)有進(jìn)行免疫接種，全期無(wú)死淘。特別申明：試驗(yàn)于2016年6月在太倉(cāng)市金諸種豬場(chǎng)進(jìn)行，當(dāng)時(shí)農(nóng)業(yè)部有關(guān)禁用硫酸黏菌素作為飼料添加劑的文件尚未出臺(tái)，本試驗(yàn)旨在研究可替代硫酸黏菌素等抗生素的飼料添加劑，故設(shè)計(jì)了添加了硫酸黏菌素的對(duì)照組，所有飼喂抗生素的豬后期都僅用于科研。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)

試驗(yàn)結(jié)束前1天空腹24 h，采集血樣，試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)日，每個(gè)重復(fù)選取1頭斷奶仔豬進(jìn)行稱重屠宰，采集血液用于分離血清，采集肝臟，另沖洗腸道內(nèi)容物并刮取空腸和回腸黏膜。測(cè)定血清、肝臟、空腸黏膜和回腸黏膜中相關(guān)抗氧化指標(biāo)。

1.3.1 血清抗氧化指標(biāo)檢測(cè)

試驗(yàn)第21天，每個(gè)重復(fù)選取1頭仔豬(即每個(gè)試驗(yàn)組選取6頭，公母各占1/2)，前腔靜脈采血10 mL，靜置15 min后離心(3 000 r/min，10 min)取上清得到血清，分裝后置于-20 ℃冰箱冷凍保存待測(cè)。測(cè)定血清中總抗氧化能力(total-antioxidant capacity, T-AOC)，超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidases,GSH-Px)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)活性，丙二醛(malondialdehyde,MDA)、還原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、H2O2含量。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.2 肝臟抗氧化指標(biāo)檢測(cè)

取樣品肝臟用生理鹽水按1∶9(質(zhì)量體積比)制成勻漿，充分混勻后離心(3 000 r/min、10 min)，吸取上清液即酶提取液。離心的上清液用于測(cè)定肝臟T-AOC，SOD、GSH-Px、CAT活性，GSH、H2O2、MDA含量。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3.3 腸黏膜抗氧化指標(biāo)檢測(cè)

空腸、回腸測(cè)量稱重后，用生理鹽水沖洗腸道，剪開(kāi)腸段，去除空腸中內(nèi)容物，用吸水紙吸干表面的水質(zhì)以及其他雜質(zhì)，用載玻片刮取空腸、回腸黏膜，置于-80 ℃保存。取待測(cè)樣品用生理鹽水按1∶9(質(zhì)量體積比)勻漿，充分混勻后離心(3 000 r/min、10 min)，吸取上清液，用于測(cè)定空腸、回腸黏膜中T-AOC，SOD、GSH-Px、CAT活性，GSH、H2O2、MDA含量。試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定步驟按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)Excel 2013初步計(jì)算處理后，采用SPSS 19.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)，用Duncan氏法對(duì)各組間進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表2可知，HTO組仔豬血清T-AOC顯著高于LTO和MTO組(P<0.05)，MTO組仔豬血清SOD活性顯著高于HTO、CON和ANT組(P<0.05)，LTO組仔豬血清H2O2含量顯著低于MTO、HTO和CON組(P<0.05)。

2.2 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可知，LTO組仔豬肝臟T-AOC顯著高于MTO組(P<0.05)，且LTO和MTO組仔豬肝臟T-AOC顯著高于CON和ANT組(P<0.05)；LTO和MTO組仔豬肝臟GSH-Px活性顯著高于HTO、CON和ANT組(P<0.05)，且HTO組仔豬肝臟GSH-Px活性顯著高于ANT組(P<0.05)；LTO和MTO組仔豬肝臟SOD活性顯著高于CON組(P<0.05)；LTO組仔豬肝臟CAT活性顯著高于HTO組(P<0.05)，且LTO、MTO和HTO組仔豬肝臟CAT活性均顯著高于CON組(P<0.05)；HTO組仔豬肝臟GSH含量顯著高于CON和ANT組(P<0.05)；LTO和MTO組仔豬肝臟H2O2含量顯著高于CON、ANT和HTO組(P<0.05)。

2.3 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

由表4可知，HTO組仔豬空腸黏膜GSH-Px和SOD活性顯著高于MTO和ANT組(P<0.05)；LTO、MTO和HTO組之間仔豬空腸黏膜H2O2含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于CON組(P<0.05)。

2.4 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬回腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

由表5可知，HTO組仔豬回腸黏膜SOD活性和GSH含量顯著高于CON組(P<0.05)；LTO、MTO和HTO組之間仔豬空腸黏膜MDA含量差異不顯著(P>0.05)，但均顯著低于CON組(P<0.05)。

表2 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)，相同或無(wú)字母表示差異不顯著(P>0.05)。下表同。

In the same row, values with different small letter superscripts mean significant difference (P<0.05), while with the same or no letter superscripts mean no significant difference (P>0.05). The same as below.

表3 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

表4 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬空腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬血清抗氧化指標(biāo)的影響

表5 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬回腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

3.2 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬肝臟抗氧化指標(biāo)的影響

3.3 茶樹(shù)油對(duì)斷奶仔豬小腸黏膜抗氧化指標(biāo)的影響

有研究表明，早期斷奶對(duì)血清中抗氧化狀態(tài)影響稍弱，但更容易對(duì)仔豬腸道造成氧化損傷[20]。研究表明，氧化應(yīng)激對(duì)斷奶仔豬的危害主要表現(xiàn)為腸道黏膜受損、屏障功能降低，從而引發(fā)嚴(yán)重腹瀉、養(yǎng)分消化利用率降低[21]。本研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加茶樹(shù)油和抗生素，斷奶仔豬空腸黏膜H2O2含量和回腸黏膜MDA含量顯著降低；飼糧添加150 mg/kg茶樹(shù)油，斷奶仔豬回腸黏膜SOD活性和GSH含量顯著高于CON組，空腸黏膜GSH-Px和SOD活性顯著高于ANT組。這些結(jié)果說(shuō)明，在斷奶仔豬飼糧中添加茶樹(shù)油和抗生素，均可減少其空腸H2O2含量，緩解其回腸的脂質(zhì)過(guò)氧化，添加150 mg/kg茶樹(shù)油仔豬空腸黏膜清除自由基的能力強(qiáng)于添加抗生素，仔豬回腸黏膜清除自由基的能力顯著增強(qiáng)。這與我們實(shí)驗(yàn)室前期的研究結(jié)果相一致，前期研究表明，飼糧中添加適量茶樹(shù)油可一定程度促進(jìn)斷奶仔豬生長(zhǎng)，降低腹瀉，這可能與茶樹(shù)油可提高斷奶仔豬腸道黏膜抗氧化功能有關(guān)。另有研究表明，茶樹(shù)油可抑制黏膜炎癥，在手帕上滴2滴茶樹(shù)油，把手帕放在鼻子下面，5 min后鼻子通暢，暗示了茶樹(shù)油對(duì)黏膜的抗氧化功能和免疫功能的改善。目前茶樹(shù)油主要作為外用產(chǎn)品用于護(hù)膚、消炎抗菌，或者用作食品添加劑來(lái)調(diào)味，但其作為飼料添加劑用于畜禽養(yǎng)殖的研究尚未見(jiàn)報(bào)道，茶樹(shù)油對(duì)腸道黏膜抗氧化功能的研究也尚未報(bào)道。茶樹(shù)油的原產(chǎn)國(guó)是澳大利亞，目前，我國(guó)的廣東、廣西、云南等省份也開(kāi)始規(guī)模種植加工茶樹(shù)油，每年在廣西的產(chǎn)量就達(dá)數(shù)十噸，未來(lái)茶樹(shù)油有望作為一種飼料添加劑應(yīng)用于養(yǎng)豬生產(chǎn)，提高斷奶仔豬抗氧化應(yīng)激的能力，減少腹瀉和緩解斷奶應(yīng)激。

4 結(jié) 論

飼糧中添加茶樹(shù)油可提高斷奶仔豬血清、肝臟和小腸黏膜抗氧化酶活性，減少血清和空腸黏膜H2O2含量，進(jìn)而提高斷奶仔豬的機(jī)體抗氧化功能，建議添加量為100 mg/kg。

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*Contributed equally