王順東 王開宇 羅小莉 林忠荔

（達(dá)州市疾病預(yù)防控制中心 四川 達(dá)州635002）

流行性感冒俗稱流感，是由于流感病毒而引發(fā)的急性上呼吸道感染疾病，其傳染性較強(qiáng)，且具有較高的發(fā)病率，極易感染免疫力較低的兒童、老年人以及免疫系統(tǒng)疾病患者，對(duì)其身體健康及生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的影響。流感疾病與其它呼吸道感染疾病的臨床癥狀相似，但其診斷和治療方法卻有很大差異，諸多的醫(yī)學(xué)研究與臨床實(shí)踐表明對(duì)流感患者及時(shí)診斷并予以早期治療的效果更好。因而，及早診斷及時(shí)治療對(duì)于防控流感，保證患者健康至關(guān)重要[1]。臨床上診斷流感病毒的方法很多，包括血清學(xué)檢測、核酸檢測、免疫熒光檢測、病毒培養(yǎng)以及抗原快速檢測等。膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR是臨床上檢測流感病毒比較常用的兩種方法[2]。此次研究以我中心所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標(biāo)本作為研究對(duì)象，分別運(yùn)用膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR兩種檢測方法對(duì)所有患者實(shí)施流感病毒檢測，然后觀察并比較兩種方法的檢測結(jié)果。現(xiàn)將整個(gè)研究報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取我中心在2016年6月—2017年8月期間所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標(biāo)本作為研究對(duì)象，所有患者均符合急性上呼吸道感染相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱，且發(fā)熱溫度在38℃以上，并根據(jù)患者自身病情差異，伴有不同程度的咳嗽及咽喉痛癢等癥狀。160例患者中男性88例，女性72例，患者年齡分布在14～76歲，平均年齡為（54.2±1.6）歲。

1.2 方法

（1）實(shí)驗(yàn)材料：RNA提取試劑、流感病毒核酸檢測試劑盒（熒光PCR法）、流感病毒抗原檢測試劑（膠體金法）以及博日FQA-48A型實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀。

（2）樣本提取

將壓舌板抵住病人舌根部，并在患者咽部同時(shí)探入兩根咽拭子，然后取下患者扁桃體隱窩位置的上皮細(xì)胞組織。將其中的一根咽拭子置于病毒專用采樣管（北京友康），而另一根咽拭子置于膠體金檢測所對(duì)應(yīng)的裂解液中。

（3）GICA檢測

對(duì)細(xì)胞裂解液予以充分的攪拌，以吸管吸取3～4滴液體放在檢測卡對(duì)應(yīng)加樣孔中，等15min以后觀察并分析檢測的結(jié)果。如果檢測區(qū)與對(duì)照區(qū)均有一條紅色帶，此時(shí)檢測結(jié)果表示為陽性；如果檢測區(qū)沒有紅色帶，而只有對(duì)照區(qū)有一條紅色帶，此時(shí)檢測結(jié)果表示為陰性。

（4）RT-PCR檢測

根據(jù)《全國流感監(jiān)測方案（2010年版）》中推薦的實(shí)時(shí)熒光RT-PCR對(duì)流感病毒的定性檢測。運(yùn)用QIAcubeHT型自動(dòng)核酸提取儀以及與其相配套的試劑對(duì)病毒核酸進(jìn)行提取，相應(yīng)檢測試劑是由上海之江所提供的甲型流感病毒核酸檢測試劑盒，并用博日FQA-48A型實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察并統(tǒng)計(jì)兩種檢測方法對(duì)患者檢測的陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法

運(yùn)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)此次研究所觀察的數(shù)據(jù)資料予以統(tǒng)計(jì)分析，其中計(jì)數(shù)資料以百分比（%）來表示，并對(duì)其施以χ2表示，若結(jié)果有P＜0.05，則表示組間比較差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

RT-PCR法對(duì)160例患者進(jìn)行檢測，結(jié)果共檢測出陽性患者118例，陽性率為73.75%；GICA法對(duì)160例患者進(jìn)行檢測，結(jié)果共檢出陽性患者127例，陽性率為79.38%，通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)兩種方法其檢測結(jié)果一致的患者數(shù)共107例，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明兩種方法的檢測結(jié)果差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。具體詳見表。

表 兩種檢測方法檢測結(jié)果比較

3.討論

流感已成為全球傳染性疾病，其傳染性極強(qiáng)，且具有較高的發(fā)病率，極易感染免疫力較低的兒童、老年人以及免疫系統(tǒng)疾病患者，患者臨床癥狀主要表現(xiàn)為突然發(fā)熱，體溫多在38～40℃，且持續(xù)時(shí)間較長，同時(shí)會(huì)出現(xiàn)咳嗽、咽喉腫痛、頭痛、畏寒、肌肉酸痛以及全身不適等癥狀，對(duì)人們的生活質(zhì)量造成嚴(yán)重的影響[3]。流感的臨床表現(xiàn)并不具有特異性，與其它呼吸道感染疾病的臨床癥狀相似，但其診斷和治療方法卻有很大的差異，諸多的醫(yī)學(xué)研究與臨床實(shí)踐表明對(duì)流感患者及時(shí)診斷并予以早期治療的效果更好。因而，及早診斷及時(shí)治療對(duì)于防控流感，保證患者健康至關(guān)重要。

目前，臨床上對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測的方法較多，如血清學(xué)檢測、核酸檢測、免疫熒光檢測、病毒培養(yǎng)以及抗原快速檢測等。咽拭子診斷是最原始的實(shí)驗(yàn)室診斷方式，接種雞胚、狗腎臟傳代細(xì)胞分離病毒，并定型判斷，但這種檢測方式費(fèi)時(shí)費(fèi)力，而且流感病毒治療藥物的最佳時(shí)期為2天內(nèi)，尤其是在暴發(fā)疫情的處理中，診斷的及時(shí)性極為重要。隨著醫(yī)療技術(shù)和檢驗(yàn)技術(shù)的發(fā)展，膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR是臨床上檢測流感病毒比較常用的兩種方法。病毒培養(yǎng)對(duì)于病毒檢測具有較高的準(zhǔn)確率，其需要分別實(shí)施病毒分型以及抗原變異分析，因而檢測周期較長，且操作相當(dāng)繁雜，對(duì)檢測人員的要求比較嚴(yán)格，因而不適宜對(duì)爆發(fā)式疫情實(shí)施快速的檢測和診斷。RT-PCR檢測法在疫情監(jiān)測和臨床上比較常用，其具有諸多優(yōu)點(diǎn)，從標(biāo)本處理開始只需3～4小時(shí)可完成檢測，在流感等病毒性傳染病快速確診中可快速確診，是實(shí)驗(yàn)室快速診斷流感等病毒的重要手段，但其檢測需要大型的專用設(shè)備和儀器，且對(duì)實(shí)驗(yàn)室的潔凈度要求比較嚴(yán)格，這將大大增加檢測成本。GICA檢測是以膠體金作為示蹤物，從而對(duì)抗原抗體之間的反應(yīng)進(jìn)行跟蹤和標(biāo)記，這一檢測方法具有操作簡便、快速、準(zhǔn)確率高、操作誤差較小、穩(wěn)定性好以及檢驗(yàn)成本不高等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應(yīng)用于疾病的臨床診斷和鑒別。近年來，諸多醫(yī)學(xué)研究表明以膠體金免疫層析法（GICA法）對(duì)流感病毒進(jìn)行檢測，表現(xiàn)出較高的準(zhǔn)確率、特異性及穩(wěn)定性，且其靈敏度也可以滿足臨床應(yīng)用方面的要求，從而能夠?yàn)榕R床診斷與治療提供準(zhǔn)確可靠的參考依據(jù)。

此次研究以我市中心醫(yī)院流感監(jiān)測點(diǎn)所監(jiān)測的160例急性呼吸道感染患者標(biāo)本作為研究對(duì)象，分別運(yùn)用膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR兩種檢測方法對(duì)所有患者實(shí)施流感病毒檢測，然后觀察并比較兩種方法的檢測結(jié)果。結(jié)果表明，RT-PCR法對(duì)160例患者進(jìn)行檢測，結(jié)果共檢測出陽性患者118例，陽性率為73.75%；GICA法對(duì)160例患者進(jìn)行檢測，結(jié)果共檢出陽性患者127例，陽性率為79.38%，通過對(duì)比發(fā)現(xiàn)兩種方法其檢測結(jié)果一致的患者數(shù)共107例，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明兩種方法的檢測結(jié)果差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這與相關(guān)的研究結(jié)果相似，表明膠體金免疫層析技術(shù)（GICA）與實(shí)時(shí)熒光RT-PCR均能有效檢測流感病毒，而膠體金免疫層析技術(shù)比實(shí)時(shí)熒光法具有更高的穩(wěn)定性、準(zhǔn)確性，且操作方便，同時(shí)省時(shí)省力，減少污染，可作為一種快速的流感病毒檢測方法。

綜上所述，GICA與RT-PCR是流感病毒兩種常用的檢測方法，而GICA法操作更為方便，檢驗(yàn)快速，且準(zhǔn)確率較高，因而在流感病毒的檢測中具有更為廣闊的臨床應(yīng)用價(jià)值，對(duì)于及時(shí)發(fā)現(xiàn)變異毒株、掌握流感流行規(guī)律，快速準(zhǔn)確地處置流感疫情有著重大的意義。

】

[1]王文碧.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法快速檢測流感病毒的效果分析[J].醫(yī)藥前沿，2015，16(21)：136-138.

[2]姚秀林.實(shí)時(shí)熒光RT-PCR與細(xì)胞培養(yǎng)法在流感病毒檢測中的應(yīng)用效果觀察[J].中國醫(yī)藥指南，2016，18(4)：47-48.

[3]周雪花.實(shí)時(shí)熒光定量PCR在流感病毒核酸檢測中的應(yīng)用[J].中國衛(wèi)生產(chǎn)業(yè)，2014，26(28)：178-179.