王曉潤

(青海省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，青海 西寧 810001)

包蟲病(hydatid disease)，又稱細(xì)粒棘球絳蟲病，犬為終末宿主、家畜是中間宿主；其傳播途徑主要是犬的小腸寄生的細(xì)粒棘球絳蟲發(fā)育成熟后排出的大量蟲卵，而被蟲卵污染的土壤、草地、水源、犬的皮毛，被人和家畜食入，在家畜和人體內(nèi)的臟器中發(fā)育成包蟲囊，囊內(nèi)有無數(shù)的原頭蚴，當(dāng)感染動(dòng)物屠宰后，含原頭蚴的家畜肝、肺囊被犬生食，囊中的許多原頭蚴在犬的小腸寄生發(fā)育，45 d 發(fā)育成成蟲，成蟲排出大量蟲卵，周而復(fù)始，造成包蟲病的傳播流行。要在傳播途徑上切斷傳播源，主要手段：一是對(duì)家畜進(jìn)行包蟲病疫苗免疫，使之包蟲卵不能在家畜肝、肺、脾等實(shí)質(zhì)器官上寄生，形成包囊，對(duì)含有包蟲囊的家畜臟器要嚴(yán)禁生食喂犬，切斷包蟲對(duì)犬的感染；二是對(duì)野犬撲殺，對(duì)家犬拴養(yǎng)并采取“犬犬投藥、月月驅(qū)蟲”的管理辦法，對(duì)排出的犬糞進(jìn)行焚燒、深埋，控制犬對(duì)包蟲病的感染和傳播。

2016年我們對(duì)省內(nèi)8個(gè)州(市)、24個(gè)縣(市)的960只羔羊，進(jìn)行了羔羊包蟲免疫抗體檢測試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集 在省內(nèi)12個(gè)縣，采集3月齡注射了包蟲免疫疫苗的羔羊血清960份，進(jìn)行羔羊免疫抗體檢測。

1.2 診斷試劑 重慶澳龍生物制品有限公司生產(chǎn)的羊棘球蚴(包蟲)ELISA抗體檢測試劑盒。

1.3 方法 羔羊包蟲病免疫抗體檢測，按常規(guī)方法制備血清。

濃縮的洗滌液恢復(fù)至室溫(25 ℃左右)，并搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作25倍稀釋。

試劑稀釋和樣品稀釋：在血清稀釋板中按1∶100的體積稀釋待檢血清樣品(198 μL樣品稀釋液中加2 μL待檢血清樣品)。對(duì)照稀釋：在血清稀釋板中按1∶100分別稀釋陽性對(duì)照和陰性對(duì)照血清。 二抗稀釋：用樣品稀釋液按1∶50～100稀釋酶標(biāo)二抗。取抗原包被板，分別將稀釋好的待檢血清和對(duì)照各取100 μL加入到抗原包被板孔中，待檢樣品做1孔，陰性對(duì)照和陽性對(duì)照各設(shè)2孔，每孔100 μL。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)，置37 ℃溫育60 min。甩掉板中的溶液，每孔加入稀釋好的洗滌液200 μL，靜置3分鐘倒掉，再在吸水紙上拍干，共洗5次。每孔加入稀釋好的兔抗山羊酶標(biāo)二抗100 μL，置37 ℃恒溫箱溫育60 min。洗滌5次,方法同前。每次在干凈吸水紙上拍干。每孔先加底物液A50 μL、再加底物液B 50 μL，室溫避光顯色10 min。每孔加終止液50 μL，10 min內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定：在酶標(biāo)儀上測各孔OD450nm值。試驗(yàn)成立的條件是陽性對(duì)照孔平均OD450nm值≥0.6，陰性對(duì)照孔平均OD450nm值<0.3。樣品OD450nm值>0.6，判為陽性；樣品OD450nm值<0.3，判為陰性；0.3～0.6之間為疑似。

2 結(jié)果

2016年本省級(jí)動(dòng)物疫控機(jī)構(gòu)共檢測24個(gè)縣(市、區(qū))免疫包蟲羔羊血清960份，合格784份，合格率81.67%，見表1。

表1 2016年青海部分地區(qū)羔羊細(xì)粒棘球絳蟲疫苗免疫抗體檢測結(jié)果 單位：份

3 討論

根據(jù)本次羔羊血清檢測，羔羊免疫血清抗體24縣總體達(dá)到81.67%，達(dá)到國家規(guī)定的70%免疫抗體標(biāo)準(zhǔn)要求，總體上西寧、海東市等農(nóng)區(qū)都達(dá)到了抗體合格標(biāo)準(zhǔn)，但是牧區(qū)海西州都蘭縣、海北州門源縣、海北州剛察縣、玉樹州稱多縣、雜多縣、海南州興海等6縣未達(dá)到國家規(guī)定免疫抗體合格70%標(biāo)準(zhǔn)，占被檢測24個(gè)縣的25%，我們分析原因：一是農(nóng)業(yè)區(qū)犬少于牧區(qū)，羊感染包蟲機(jī)率低；二是牧區(qū)犬的控制存在一定困難，特別是流浪犬，無法對(duì)其驅(qū)蟲，撲殺又有當(dāng)?shù)啬撩褡钄r，很不好處理；三是牧區(qū)不達(dá)標(biāo)的這6縣，鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)站歸鄉(xiāng)鎮(zhèn)府管理，對(duì)羔羊的包蟲免疫疫苗注射可能不到位，需要對(duì)這6個(gè)縣的包蟲羔羊免疫加強(qiáng)補(bǔ)免工作，落實(shí)責(zé)任，不留死角。我們一定要將此項(xiàng)工作做細(xì)，早日完成中央和省政府安排部署的包蟲病防控工作，為下一步完全控制青海省內(nèi)動(dòng)物包蟲病的流行而努力。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李祥瑞.動(dòng)物寄生蟲病彩色圖譜[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：36-38.