王阜生 遼寧省阜蒙縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所 123100

豬偽狂犬病根據(jù)疾病的臨診癥狀，結(jié)合流行病學(xué)可做出初步診斷，確診必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢查。同時(shí)要注意與豬細(xì)小病毒、流行性乙型腦炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬瘟病毒、弓形蟲(chóng)及布魯氏菌等引起的母豬繁殖障礙相區(qū)別。

1 病毒的分離鑒定

病毒的分離是診斷偽狂犬病的可靠方法?；疾?dòng)物的多種病料組織如腦、心、肝、脾、肺、腎和扁桃體等均可用于病毒的分離，但以腦組織和扁桃體最為理想。病料經(jīng)處理后可直接接種敏感細(xì)胞，如豬腎傳代細(xì)胞(PK-15和IBRS-2)、倉(cāng)鼠腎傳代細(xì)胞(BHK-21)或雞胚成纖維細(xì)胞(CEF)在接種后24～72小時(shí)內(nèi)可出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變。若初次接種無(wú)細(xì)胞病變，可盲傳3代。不具備細(xì)胞培養(yǎng)條件時(shí)，可將處理的病料接種家兔或小鼠，根據(jù)家兔或小鼠的臨診表現(xiàn)做出判定，但小鼠不如家兔敏感。分離到病毒后再用標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清做中和試驗(yàn)以確診該病。

2 組織切片熒光抗體檢測(cè)

取患病動(dòng)物的病料如腦或扁桃體的壓片或冰凍切片，用直接免疫熒光檢查。其優(yōu)點(diǎn)是快速，幾小時(shí)內(nèi)即可獲得可靠結(jié)果。新生仔豬的敏感性與病毒分離相當(dāng)，而育肥豬與成年豬，該方法不如病毒分離敏感。

3 PCR檢測(cè)豬偽狂犬病病毒

利用PCR可從患病動(dòng)物的分泌物，如鼻咽拭子或組織病料中擴(kuò)增豬偽狂犬病病毒的基因，從而對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行確診。PCR與病毒分離鑒定相比，具有快速、敏感和特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，能同時(shí)檢測(cè)大批量的樣品，并且能夠進(jìn)行活體檢測(cè)，適合于臨診診斷。

4 血清學(xué)診斷

多種血清學(xué)方法用于偽狂犬病的診斷，應(yīng)用最廣泛的有中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、乳膠凝集試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)及間接免疫熒光等。其中血清中和試驗(yàn)的特異性和敏感性都是最好的，并且被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為法定的診斷方法。但是由于中和試驗(yàn)對(duì)技術(shù)條件要求高、時(shí)間長(zhǎng)，所以主要用于實(shí)驗(yàn)室研究。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)同樣具有特異性強(qiáng)和敏感性高的特點(diǎn)，3～4小時(shí)內(nèi)可得出試驗(yàn)結(jié)果，并可同時(shí)檢測(cè)大批量樣品，廣泛用于偽狂犬病的臨診診斷。另外，近幾年來(lái)乳膠凝集試驗(yàn)以其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)在臨診上廣泛應(yīng)用。該方法操作簡(jiǎn)便，幾分鐘之內(nèi)便可得出試驗(yàn)結(jié)果。

5 鑒別診斷

豬偽狂犬病病毒鑒別診斷方法，是在使用基因標(biāo)志疫苗的基礎(chǔ)上應(yīng)用的一類(lèi)診斷方法。由于PRV中存在多個(gè)非必需糖蛋白基因，缺失這些基因的病毒突變株不能產(chǎn)生被缺失基因所編碼的糖蛋白，但又不影響病毒在細(xì)胞上的增殖與免疫原性。將這種基因缺失標(biāo)志疫苗注射動(dòng)物后，動(dòng)物不能產(chǎn)生針對(duì)缺失蛋白的抗體，因此可通過(guò)血清學(xué)方法將自然感染野毒的血清學(xué)陽(yáng)性豬與注苗豬區(qū)分開(kāi)來(lái)。目前，缺失疫苗缺失的糖蛋白基因主要為gE和gG基因，也有缺失gC和gB基因的。針對(duì)缺失的糖蛋白已利用大腸桿菌或酵母等表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)產(chǎn)物建立了相應(yīng)的鑒別診斷方法，如gE-ELISA、gG-ELISA、gC-ELISA、gB-ELISA 以 及gE-LAT、gG、LAT等，實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些方法的特異性強(qiáng)、敏感性高，可用于臨診檢測(cè)，同時(shí)乳膠凝集還具有簡(jiǎn)單和快速的特點(diǎn)。目前，在我國(guó)已有g(shù)E-ELISA、gGELISA和gE-LAT、gG-LAT問(wèn)世。