董艷珍， 鄧思紅， 肖文淵

(1.西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，四川西昌 615013； 2.涼山科華水生態(tài)工程有限公司，四川西昌 615000)

花斑裸鯉(GymnocypriseckloniHerzenstein)，別稱大嘴湟魚、大嘴魚、花魚、豹子魚等，隸屬鯉形目鯉科裂腹魚亞科裸鯉屬[1]，主要分布在青海省境內(nèi)黃河干支流和柴達(dá)木盆地格爾木河干支流及修溝湖，是青海省黃河上游扎陵湖、鄂陵湖的重要經(jīng)濟(jì)魚類，也是青海省重要的水生野生動(dòng)物種質(zhì)資源，具有良好的開(kāi)發(fā)前景，1992年被列入省級(jí)保護(hù)種類[2]。

花斑裸鯉肉質(zhì)細(xì)嫩，營(yíng)養(yǎng)豐富，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和開(kāi)發(fā)潛力[3-4]。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)花斑裸鯉的分子生物學(xué)以及人工馴養(yǎng)、人工繁殖方面做了研究[5-8]，并在全人工繁殖方面初步獲得了成功，但有關(guān)花斑裸鯉胚胎發(fā)育的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究于2015年4—5月以及2016年4—5月對(duì)花斑裸鯉的胚胎發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了詳細(xì)的觀察，并記錄了其發(fā)育特征及發(fā)育時(shí)序，旨在完善高原土著魚類生物學(xué)資料，為今后開(kāi)展該魚的人工繁殖提供一定的參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1　受精卵的獲取

對(duì)3～4齡的野生花斑裸鯉親魚(雌魚體質(zhì)量1.2～1.5 kg，雄魚體質(zhì)量0.4～0.6 kg)使用促黃體素生成素類似物(LRH-A2)和馬來(lái)酸地歐酮(DOM)進(jìn)行人工催產(chǎn)，雌魚注射劑量為20 μg/kg LRH-A2+2 μg/kg DOM，采用2針注射法，第1次注射1/10，第2次注射余下劑量，2次注射時(shí)間間隔48 h。雄魚注射劑量為雌魚的1/2，采用一針注射法，在雌魚注射第2針時(shí)注射。采取干法受精的方式獲得受精卵。

1.2　試驗(yàn)方法

將受精卵置于孵化盆中流水孵化，孵化水源為井水，孵化水溫14～16 ℃，溶氧量6.5～7.5 mg/L，pH值7.0～7.4，流速0.2～0.3 m/s，孵化期間每天清除死卵。

受精卵入孵后隨即取卵用體視鏡(NiKon Eclipse E100，目鏡10×，物鏡4×)進(jìn)行分階段不定時(shí)觀察。在卵裂階段，每0.5 h左右取卵觀察1次，以后階段每1～2 h取卵觀察1次，拍照記錄觀察到的胚胎發(fā)育特征圖片，每次觀察卵數(shù)5～10粒，當(dāng)其50%以上的個(gè)體發(fā)育進(jìn)入某個(gè)時(shí)期，則將該時(shí)期作為該發(fā)育階段的起始時(shí)間，前一發(fā)育階段的起始時(shí)間到下一發(fā)育階段的起始時(shí)間為階段時(shí)間。

2　結(jié)果與分析

2.1　胚胎發(fā)育過(guò)程

在水溫14～16 ℃的條件下，花斑裸鯉胚胎發(fā)育歷時(shí) 140 h 17 min。胚胎發(fā)育分為受精階段、卵裂階段、囊胚階段、原腸胚階段、神經(jīng)胚階段、器官形成階段以及出膜階段7個(gè)階段，以胚胎發(fā)育的主要特征為依據(jù)，共劃分為22個(gè)胚胎發(fā)育期，胚胎發(fā)育時(shí)序見(jiàn)表1。

表1　花斑裸鯉胚胎發(fā)育時(shí)序

2.1.1受精階段花斑裸鯉魚卵呈淡黃色，卵徑2.1～2.6 mm，遇水后變微黏，沉性。受精49 min后吸水膨脹，卵徑達(dá)3.5～4.1 mm(圖1-a)。受精后2 h 16 min，卵子原生質(zhì)向動(dòng)物極流動(dòng)，形成胚盤，胚盤隨著卵膜的膨脹逐漸隆起(圖1-b)。

2.1.2卵裂階段受精3 h 17 min后，胚盤發(fā)生第1次卵裂，為經(jīng)裂，將胚盤分成大小相等的2個(gè)卵裂球，進(jìn)入2細(xì)胞期(圖1-c)。受精后4 h 47 min，發(fā)生與第1次卵裂溝垂直的分裂，進(jìn)入4細(xì)胞期(圖1-d)。5 h 25 min后，進(jìn)行第3次卵裂，卵裂成8個(gè)大小相似的細(xì)胞，進(jìn)入8細(xì)胞期(圖1-e)。受精后6 h 10 min，進(jìn)行第4次卵裂，卵裂成4行×4列的16個(gè)細(xì)胞，進(jìn)入16細(xì)胞期(圖1-f)。受精后8 h 55 min，進(jìn)入第5次卵裂，仍為經(jīng)裂，分裂成32個(gè)細(xì)胞，進(jìn)入32細(xì)胞期(圖1-g)。受精后12 h 5 min，隨著不斷的卵裂，細(xì)胞逐漸多到不可數(shù)，胚盤逐漸隆起成團(tuán)，形似桑葚，進(jìn)入多細(xì)胞期(圖1-h)。

2.1.3囊胚階段受精后16 h 21 min，細(xì)胞在動(dòng)物極堆積，胚盤明顯隆高，形成囊胚，進(jìn)入囊胚早期(圖1-i)。受精后18 h 22 min，細(xì)胞更加細(xì)密，胚盤變扁，進(jìn)入囊胚中期(圖1-j)。受精后25 h 4 min，胚盤繼續(xù)下降變薄，進(jìn)入囊胚晚期(圖1-k)。

2.1.4原腸胚階段受精后31 h 54 min，胚層下包卵黃的1/3，形成胚環(huán)，為原腸早期(圖1-l)。其后2 h 0 min，胚層繼續(xù)下包卵黃1/2，進(jìn)入原腸中期(圖1-m)。受精后37 h 12 min，胚層繼續(xù)下包卵黃達(dá)4/5，進(jìn)入原腸晚期(圖1-n)。

2.1.5神經(jīng)胚階段受精后38 h 59 min，胚層下包至卵黃囊的底部，約覆蓋卵黃表面9/10，裸露在胚環(huán)以外的部分為卵黃栓，進(jìn)入神經(jīng)胚期(圖1-o)。受精后39 h 19 min，胚孔進(jìn)一步縮小并閉合，進(jìn)入胚孔封閉期(圖1-p)。

2.1.6器官形成階段此后3 h 22 min，胚體出現(xiàn)3～4對(duì)肌節(jié)，胚體一端微微隆起，可分辨出頭尾部，進(jìn)入肌節(jié)出現(xiàn)期(圖1-q)。受精后66 h 14 min，胚體尾部出現(xiàn)1小段細(xì)長(zhǎng)尾芽，進(jìn)入尾芽期(圖1-r)。受精后80 h 6 min，胚體出現(xiàn)蠕動(dòng)，平均2～3次/min，進(jìn)入肌肉效應(yīng)期(圖1-s)。受精后 96 h 53 min，心臟開(kāi)始跳動(dòng)，胚體尾部變粗，扭動(dòng)變頻繁，左右扭動(dòng)，平均17～18次/min，進(jìn)入心臟跳動(dòng)期(圖1-t)。受精后106 h 45 min，尾部繼續(xù)變粗壯并伸長(zhǎng)與頭部接觸，扭動(dòng)不如之前劇烈，進(jìn)入出膜前期(圖1-u)。

2.1.7出膜階段器官形成后期，卵膜開(kāi)始軟化。受精后118 h 34 min，胚體尾部首先從卵膜中伸出，繼而仔魚掙脫卵膜完成出膜，進(jìn)入出膜期(圖1-v)，初孵仔魚平均全長(zhǎng)7.6～8.0 mm。21 h 43 min后全部完成出膜，整個(gè)胚胎發(fā)育過(guò)程用時(shí)140 h 17 min。

3　討論

3.1　花斑裸鯉的受精卵特點(diǎn)

花斑裸鯉成熟卵徑為2.1～2.6 mm，沉性，微黏性，受精后黏性消失。受精卵吸水膨脹后卵徑達(dá)到3.5～4.1 mm，略大于申志新等報(bào)道的結(jié)果[5]，與裸鯉屬的青海湖裸鯉卵徑大小(卵徑1.9～2.3 mm，吸水后卵徑3.9～4.1 mm)[9]相近，大于裂腹魚屬的小裂腹魚的相應(yīng)值(卵徑1.9 mm，吸水后卵徑3.0 mm)[10]。

3.2　花斑裸鯉的胚胎發(fā)育特點(diǎn)

花斑裸鯉的受精卵卵徑大，卵黃物質(zhì)豐富，孵化時(shí)間長(zhǎng)，在14～16 ℃水溫條件下140 h左右完成孵化，而在7～8 ℃條件下花斑裸鯉需要120 h進(jìn)入原腸期，360 h開(kāi)始破膜，504 h 破膜結(jié)束。這說(shuō)明在7～16 ℃條件下，花斑裸鯉均能孵化，且孵化率相差不大，在7～8 ℃條件下孵化率為 78.4%[5]，在14～16 ℃條件下孵化率為77.9%[7]。但低溫條件下孵化時(shí)間長(zhǎng)，且出膜不整齊，從破膜開(kāi)始到結(jié)束所需時(shí)間長(zhǎng)。關(guān)于花斑裸鯉胚胎發(fā)育的適宜溫度還需進(jìn)一步研究。

花斑裸鯉初孵仔魚平均全長(zhǎng)7.6～8.0 mm，與松潘裸鯉(8.0 mm)[11]、祁連山裸鯉(8.2 mm)[12]相近，而小于青海湖裸鯉[8](8.9 mm)、雅魯藏布江尖裸鯉(10.27 mm)[13]。

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