陳　宇，　郭春華，　徐　旭，　王小強(qiáng)，　傅昌秀，　柏　雪*

（1.西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，四川成都 610041；2.四川省畜牧總站，四川成都 610041）

四川是我國農(nóng)業(yè)大省，每年會(huì)產(chǎn)生大量農(nóng)作物秸稈，油菜秸稈占其中的20%～30%，大部分油菜秸稈的處理方式為就地還田或焚燒，這造成了極大的環(huán)境污染。由于油菜秸稈整體的營養(yǎng)價(jià)值及動(dòng)物對(duì)其的消化利用率偏低，CP含量為2.06% ～6.92%，NDF含量為50.51% ～82.12%，消化率僅為35% ～50%（王芳彬，2016；李晟，2015；黎力之，2014），且油菜秸稈適口性較差，采食率低，自然狀態(tài)下體積大、易霉變，這些都制約油菜秸稈飼用化的發(fā)展（翟明仁，2013）。改善油菜秸稈營養(yǎng)價(jià)值水平，提高消化利用率，使其作為反芻動(dòng)物的粗飼料來源，目前主要有氨化及添加微生物發(fā)酵劑兩種方法。孟春花 （2016）等在油菜秸稈中添加不同比例（10%、15%、20%）硫酸氫銨氨化處理，使油菜秸稈CP含量均增加了2倍以上，NDF、ADF含量下降 10% 以上。陳麗園等（2010）研究表明，在油菜秸稈中添加微生物 （自篩菌種BF14）并混合麩皮和食鹽，可有效降低秸稈纖維素的含量。許蘭嬌等（2016）利用乳酸糞腸球菌微貯油菜秸稈與皇竹草飼喂錦江黃牛，其采食量、日增重有一定提高。成都麻羊是南方亞熱帶濕潤山地陵丘山羊，具有生長發(fā)育快、早熟、適應(yīng)性強(qiáng)、耐濕熱、耐粗放飼養(yǎng)等特性。四川地區(qū)多為丘陵，油菜秸稈難以機(jī)械化收獲和運(yùn)輸，如能就地轉(zhuǎn)化，將有利于飼料資源利用與環(huán)境保護(hù)，而油菜秸稈在山羊上的應(yīng)用報(bào)道較少。

本試驗(yàn)通過比較發(fā)酵過程中油菜秸稈營養(yǎng)成分、總霉菌數(shù)量及黃曲霉毒素B1含量，研究以油菜秸稈為發(fā)酵底物，硫酸銨為氮源，添加發(fā)酵劑與自然發(fā)酵對(duì)油菜秸稈營養(yǎng)成分、總霉菌數(shù)量及黃曲霉毒素B1含量的影響；同時(shí)選擇成都麻羊作為試驗(yàn)對(duì)象，采用添加發(fā)酵劑的發(fā)酵油菜秸稈替代部分粗飼料進(jìn)行飼喂試驗(yàn)，研究其在肉羊上的應(yīng)用。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料油菜秸稈從四川省成都市周邊兩個(gè)縣、市收集；發(fā)酵劑由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)提供，為乳酸菌、酵母菌、解淀粉芽孢桿菌混合菌劑。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵試驗(yàn)試驗(yàn)于2016年5月23日在西南民族大學(xué)動(dòng)物營養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，收集干秸稈，粉碎，采用二因素有重復(fù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照發(fā)酵方式A（加菌發(fā)酵A1、自然發(fā)酵 A2）和秸稈類型 B（無根 B1、帶根 B2）分為 4組，如表 1所示。處理組 A1B1、A1B2加菌量為 100 mg/kg，處理組A2B1、A2B2不加菌，每個(gè)處理組按總重量的4%添加硫酸銨，且總含水量為50%～60%，混勻，用密封袋包裝后抽真空，室溫（28～30℃）堆放發(fā)酵，每個(gè)處理設(shè)15個(gè)重復(fù)，分別于0、20、30、40、50 d 采集樣品，每次采樣單獨(dú)開袋（3袋），進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。

表1　發(fā)酵試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案

1.2.2現(xiàn)場(chǎng)發(fā)酵試驗(yàn)試驗(yàn)于2016年5月23日在成都市西嶺雪農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司成都麻羊種羊場(chǎng)進(jìn)行，選用無根秸稈加菌發(fā)酵，采用地下發(fā)酵池發(fā)酵方式，上下覆膜，上方采用泥土壓實(shí)，發(fā)酵量約為12 t，發(fā)酵配方與實(shí)驗(yàn)室一致，發(fā)酵時(shí)間為50 d。

1.2.3飼喂試驗(yàn)試驗(yàn)于2016年9月15日在成都市西嶺雪農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司成都麻羊種羊場(chǎng)進(jìn)行。飼喂所用的油菜秸稈為現(xiàn)場(chǎng)發(fā)酵試驗(yàn)所出。選擇體重11.6 kg左右的公肉羊40只，分為2個(gè)處理組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只羊。本試驗(yàn)采用先飼喂精料，后飼喂粗料的飼喂方式，對(duì)照組和試驗(yàn)組精料飼喂量為每日120 g，配方一致；對(duì)照組粗料為新鮮羊草，試驗(yàn)組以20%的油菜秸稈發(fā)酵飼料替代對(duì)照組中粗料。飼養(yǎng)方式為舍飼，試驗(yàn)期2個(gè)月。在試驗(yàn)期間記錄每天飼喂日糧的數(shù)量和剩余量。預(yù)試期對(duì)測(cè)試羊只進(jìn)行驅(qū)蟲和傳染性疾病的免疫注射。每周進(jìn)行一次圈舍消毒，每兩天清除羊糞一次，保持羊舍清潔衛(wèi)生。

1.3指標(biāo)測(cè)定及方法

1.3.1營養(yǎng)成分的測(cè)定用Van Soest法測(cè)定中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）含量，烘箱干燥法測(cè)定干物質(zhì)（DM）含量，凱氏定氮法測(cè)定粗蛋白質(zhì)（CP）的含量，具體方法詳見張麗英主編的《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》。

1.3.2霉菌數(shù)量的測(cè)定采用平皿計(jì)數(shù)法測(cè)定樣品中總霉菌數(shù)量，所用培養(yǎng)基為虎紅瓊脂培養(yǎng)基。方法如下：稱取1 g發(fā)酵秸稈樣品，裝入盛有9mL 0.9%滅菌生理鹽水的無菌管內(nèi)，搖勻，放入搖床振蕩30 min，逐級(jí)稀釋，吸取適宜濃度的稀釋液100μL于倒有虎紅瓊脂培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿內(nèi)，均勻涂布。進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)，每次重復(fù)試驗(yàn)7個(gè)平行，取平均值。計(jì)測(cè)單位為：每克鮮樣所含菌落數(shù)，萬個(gè)/g鮮樣。

1.3.3曲霉毒素B1含量的測(cè)定采用ELISA試劑盒測(cè)定樣品中黃曲霉毒素B1的含量。試劑盒為深圳三方圓生物科技有限公司產(chǎn)的黃曲霉毒素B1酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，具體檢測(cè)方法參考其使用說明書。

1.3.4羊育肥效果測(cè)定測(cè)定羊只的采食量，在試驗(yàn)初期、中期、末期各測(cè)一次體重。

1.4數(shù)據(jù)分析采用SAS 9.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二因素有重復(fù)方差分析，方差分析差異顯著時(shí)采用LSD法對(duì)各組合平均值進(jìn)行多重比較，統(tǒng)計(jì)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示；采用SPSS 18.0軟件對(duì)肉羊飼喂試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行T檢驗(yàn)。

2　結(jié)果與分析

2.1發(fā)酵過程中油菜秸稈營養(yǎng)水平的變化

2.1.1油菜秸稈NDF含量的變化由表2看出，除0 d，其余時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵方式與秸稈類型的互作效應(yīng)顯著（P＜0.05），且加菌發(fā)酵無根油菜秸稈組效果最好；從發(fā)酵方式來看，加菌發(fā)酵油菜秸稈NDF含量（除0 d）顯著低于自然發(fā)酵油菜秸稈（P＜0.01）；從秸稈類型來看，無根油菜秸稈NDF含量顯著低于帶根油菜秸稈（P＜0.01）。無根、帶根加菌發(fā)酵油菜秸稈NDF含量發(fā)酵結(jié)束后較發(fā)酵前均降低15%左右；無根、帶根自然發(fā)酵油菜秸稈NDF含量均無明顯變化。

表2　不同時(shí)間點(diǎn)油菜秸稈NDF含量%DM

2.1.2油菜秸稈ADF含量的變化從表3可以看出，各時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵方式與秸稈類型的互作效應(yīng)顯著（P＜0.01），效果最好的為加菌發(fā)酵無根油菜秸稈組；從發(fā)酵方式來看，加菌發(fā)酵油菜秸稈ADF含量顯著低于自然發(fā)酵油菜秸稈 （P＜0.01）；從秸稈類型來看，除0 d，無根油菜秸稈ADF含量顯著低于帶根油菜秸稈（P＜0.01）。無根加菌發(fā)酵油菜秸稈ADF含量發(fā)酵結(jié)束后較發(fā)酵前降低約20%，帶根加菌發(fā)酵油菜秸稈ADF含量降低約8%，無根、帶根自然發(fā)酵油菜秸稈ADF含量均無明顯變化。

2.1.3油菜秸稈CP含量的變化由表4可知，發(fā)酵第30、40天，發(fā)酵方式與秸稈類型的互作效應(yīng)顯著 （P＜0.01），CP含量最高的為加菌發(fā)酵無根油菜秸稈組；從發(fā)酵方式來看，加菌發(fā)酵油菜秸稈CP含量顯著高于自然發(fā)酵油菜秸稈 （P＜0.01）；從秸稈類型來看，除第 0、50天，無根油菜秸稈CP含量顯著高于帶根油菜秸稈（P＜0.01）。加菌發(fā)酵無根、帶根油菜秸稈發(fā)酵結(jié)束后較發(fā)酵前CP含量有所提高，自然發(fā)酵無根、帶根油菜秸稈發(fā)酵前后CP含量均無明顯變化。

表3　不同時(shí)間點(diǎn)油菜秸稈ADF含量%DM

表4　不同時(shí)間點(diǎn)油菜秸稈CP含量%DM

2.2發(fā)酵過程中油菜秸稈總霉菌數(shù)量的變化根據(jù)表5可以看出，各時(shí)間點(diǎn)（除0 d）發(fā)酵方式與秸稈類型的互作效應(yīng)顯著（P＜0.01），總霉菌數(shù)量最少的是加菌發(fā)酵無根油菜秸稈組；從發(fā)酵方式來看，各時(shí)間點(diǎn)（除0 d）加菌發(fā)酵油菜秸稈總霉菌數(shù)量顯著低于自然發(fā)酵油菜秸稈（P＜0.01）；從秸稈類型來看，無根油菜秸稈總霉菌數(shù)量顯著低于帶根油菜秸稈（P＜0.01）。無根加菌發(fā)酵油菜秸稈（除0 d）未檢測(cè)出霉菌；帶根加菌發(fā)酵油菜秸稈則從第40天未檢出霉菌；自然發(fā)酵油菜秸稈各時(shí)間點(diǎn)均有霉菌檢出，但數(shù)量呈下降趨勢(shì)。

表5　不同時(shí)間點(diǎn)油菜秸稈中總霉菌數(shù)量（萬個(gè)/g鮮樣）

2.3發(fā)酵過程中油菜秸稈黃曲霉毒素B1含量的變化對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)發(fā)酵油菜秸稈黃曲霉毒素B1的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果如表6所示。各時(shí)間點(diǎn)，無根加菌發(fā)酵油菜秸稈、帶根加菌發(fā)酵油菜秸稈其黃曲霉毒素B1的含量均 ＜5μg/kg；無根、帶根自然發(fā)酵油菜秸稈黃曲霉毒素B1的含量先上升再下降，但均 ＜15μg/kg，且無根油菜秸稈黃曲霉毒素B1含量低于帶根油菜秸稈。

表6　不同時(shí)間點(diǎn)油菜秸稈中黃曲霉毒素B1含量　μg/kg

2.4規(guī)?；l(fā)酵油菜秸稈營養(yǎng)成分含量變化從表7可以看出，干油菜秸稈經(jīng)發(fā)酵以后，干物質(zhì)狀態(tài)下CP和真蛋白質(zhì)的含量可提高1倍多，NDF含量降低約50%，ADF含量降低約30%，木質(zhì)素含量降低約8%，極大改善油菜秸稈的營養(yǎng)價(jià)值。

2.5肉羊飼喂試驗(yàn)結(jié)果由表8可知，在肉羊飼喂試驗(yàn)中對(duì)照組與20%發(fā)酵油菜秸稈組飼喂的精料與粗料總重量在干物質(zhì)重量上差異均不顯著（P ＞ 0.05），總采食量的差異也不顯著（P ＞ 0.05）。肉羊的增重情況如表9所示，肉羊在試驗(yàn)初期、中期、末期的重量差異均不顯著（P＞0.05）；中期日增重與全期日增重20%發(fā)酵油菜秸稈組低于對(duì)照組，但差異均不顯著（P＞0.05）。

表7規(guī)?；l(fā)酵無根油菜秸稈營養(yǎng)成分變化（DM）%

表8發(fā)酵油菜秸稈對(duì)肉羊采食量的影響（DM）kg

表9　發(fā)酵油菜秸稈飼喂肉羊增重情況kg

3　討論

3.1發(fā)酵過程中油菜秸稈營養(yǎng)水平變化油菜秸稈 CP含量為 2.06%～6.92%，NDF含量為50.51%～82.12%，整體營養(yǎng)價(jià)值偏低，對(duì)油菜秸稈進(jìn)行發(fā)酵，可提高油菜秸稈的營養(yǎng)價(jià)值。在發(fā)酵過程中，微生物使得部分纖維素和半纖維素被降解，轉(zhuǎn)換成可利用的可溶性碳水化合物，而可溶性碳水化合物的合成及添加的硫酸銨可促進(jìn)微生物的生長繁殖，從而增加菌體蛋白的含量。與自然發(fā)酵相比，添加微生物如乳酸菌等，對(duì)油菜秸稈進(jìn)行發(fā)酵是近幾年來研究與應(yīng)用較多的方式。萬楚筠（2010）用混合菌劑發(fā)酵油菜秸稈，纖維素、半纖維素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較自然發(fā)酵的油菜秸稈分別減少了15.2%、6.5%；呂育財(cái)（2012）等發(fā)現(xiàn)，加菌發(fā)酵與自然發(fā)酵相比，加菌發(fā)酵能有效提高油菜秸稈的降解，纖維素降解率最高為22.47%，半纖維素為9.16%。

本試驗(yàn)中加菌發(fā)酵油菜秸稈NDF含量在發(fā)酵結(jié)束后較未發(fā)酵時(shí)降低約20%，ADF含量降低10% ～ 20%。與孟春花（2016）、王亮（2013）、陳麗園（2010）等的試驗(yàn)結(jié)果基本一致。本試驗(yàn)中加菌發(fā)酵油菜秸稈CP含量較自然發(fā)酵油菜秸稈提高40%～50%，加菌發(fā)酵油菜秸稈在發(fā)酵結(jié)束后較未發(fā)酵時(shí)提高約40%。與龔劍明 （2015）、王亮（2013）、Tuyen（2013）等的試驗(yàn)結(jié)果一致。 在油菜秸稈發(fā)酵過程中添加乳酸菌、酵母菌、解淀粉芽孢桿菌或不同真菌，CP含量都可提高。無根油菜秸稈發(fā)酵效果優(yōu)于帶根油菜秸稈，這可能因?yàn)榻斩捀磕举|(zhì)化程度更高，發(fā)酵過程中更難被降解利用?，F(xiàn)場(chǎng)發(fā)酵試驗(yàn)油菜秸稈營養(yǎng)水平優(yōu)于實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵結(jié)果，這可能是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室發(fā)酵所用的油菜秸稈量少，在堆放發(fā)酵過程中中心溫度低于現(xiàn)場(chǎng)發(fā)酵試驗(yàn)。

3.2發(fā)酵過程中油菜秸稈總霉菌數(shù)量及黃曲霉毒素B1含量變化霉菌是導(dǎo)致有氧腐敗最主要的有害微生物。在發(fā)酵過程中，未壓實(shí)或未密封好都可能導(dǎo)致霉菌大量生長。大量生長的霉菌不僅消耗營養(yǎng)物質(zhì)，抑制其他有益菌生長，部分的霉菌在其生長過程中還會(huì)產(chǎn)生一些毒素，這不僅導(dǎo)致發(fā)酵品質(zhì)降低，甚至?xí)绊懠倚蠼】?。本試?yàn)中，發(fā)酵后期加菌發(fā)酵油菜秸稈未檢出霉菌，這可能是因?yàn)榘l(fā)酵過程中乳酸菌等的生長降低了pH，從而抑制霉菌的生長。這和楊云貴等（2012）在玉米青貯、陶雅等（2015）在大麥草青貯、司丙文等（2012）在尖葉胡枝子青貯試驗(yàn)中的結(jié)果一致。本試驗(yàn)自然發(fā)酵油菜秸稈雖檢測(cè)出霉菌，但檢出的總霉菌數(shù)量 ＜1000個(gè)。加菌發(fā)酵油菜秸稈所使用的發(fā)酵劑為乳酸菌、酵母菌、解淀粉芽孢桿菌混合菌劑，這相對(duì)于自然發(fā)酵而言額外添加了乳酸菌等有益微生物，抑制了霉菌的生長，故加菌發(fā)酵油菜秸稈總霉菌數(shù)量更低甚至未檢出。

黃曲霉毒素B1是最常見、毒性最強(qiáng)的倉儲(chǔ)型毒素。其可以直接危害家畜的健康及生產(chǎn)性能，還會(huì)殘留在各種動(dòng)物產(chǎn)品中，通過食物鏈進(jìn)入人體，影響人類健康。微生物可破壞黃曲霉毒素毒性基團(tuán)從而達(dá)到去毒的目的（張玲玲，2015；馮鵬，2011；韓麗英，2010）。 本試驗(yàn)中，各處理組不同時(shí)間點(diǎn)均檢出黃曲霉毒素B1，但含量均 ＜15μg/kg，遠(yuǎn)低于飼料原料標(biāo)準(zhǔn)。馮鵬（2011）等發(fā)現(xiàn)，青貯后沙打旺單貯處理黃曲霉毒素含量最高達(dá)到8.21μg/kg；韓立英（2010）等試驗(yàn)中青貯玉米未檢出黃曲霉毒素。其原因可能是在發(fā)酵過程中微生物降解了大部分黃曲霉毒素，使其含量低于標(biāo)準(zhǔn)安全限，甚至未檢出。

3.3肉羊飼喂試驗(yàn)結(jié)果本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比，當(dāng)發(fā)酵油菜秸稈替代粗料比例為20%時(shí)，山羊的采食量有所下降，但在干物質(zhì)基礎(chǔ)下相當(dāng)；日增重?zé)o論是中期還是全期均無明顯差異。其原因可能是本試驗(yàn)所選用羊只較小，對(duì)粗料的適應(yīng)性較差。

4　結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，加菌發(fā)酵油菜秸稈品質(zhì)優(yōu)于自然發(fā)酵油菜秸稈，無根油菜秸稈品質(zhì)優(yōu)于帶根油菜秸稈，品質(zhì)最優(yōu)為加菌發(fā)酵無根油菜秸稈。另外，以20%的發(fā)酵油菜秸稈替代粗料對(duì)肉羊生長性能無明顯影響。

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