劉　洋，孟連仲，張建雄

（1.唐山市畜牧水產(chǎn)品質量監(jiān)測中心,河北唐山 063000；2.唐山市豐南區(qū)農牧局,河北唐山 063300）

石斑魚隸屬于鱸形目鮨科生物的一種，比其他魚類具有更高的經(jīng)濟和營養(yǎng)價值上，且口感極佳，因此，受到消費者的一致好評。由于該魚類具有生長速度快、對運輸條件要求低等諸多優(yōu)勢，已成為現(xiàn)階段我國水產(chǎn)養(yǎng)殖市場中重要的一種魚類（中國水產(chǎn)養(yǎng)殖網(wǎng)，2016）。褐點石斑魚（Epinephelus fuscoguttatus），俗稱虎頭斑、老虎斑，為暖水性島礁性魚類，在我國主要分布于東海和南海，資源量稀少；由于其肉味鮮美、生長快、市場潛力大和養(yǎng)殖前景看好，已成為福建、廣東、海南等地海水養(yǎng)殖的重要名優(yōu)品種之一（王賽等，2012）。

近年來，高速發(fā)展的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)對水產(chǎn)飼料的需求不斷增加、魚粉資源不斷減少，使其價格迅速飆升，故而，探尋一種可將魚粉資源完全或部分替代的蛋白源是現(xiàn)階段水產(chǎn)飼料行業(yè)重點關注的話題之一（王學習等，2017）。隨著科研的不斷深入，部分學者在研究中指出，豆粕作為一種蛋白源，其自身含有較高的適合水產(chǎn)生物所需的氨基酸成分，因此，將其替代魚粉在石斑魚飼料中應用具有廣泛前景（漢雪梅等，2013）。但過量使用豆粕極易導致魚類死亡，造成養(yǎng)殖戶的重大損失，因此，探究豆粕適合的替代含量成為迫在眉睫的問題。鑒于此，筆者就豆粕不同替代含量對石斑魚的生長及其營養(yǎng)組成和價值展開探析。

1　材料與方法

1.1試驗飼料以魚粉為主要蛋白源，魚油為脂肪源，利用豆粕替代對照組（CK）中不同比例（20.0%、30.0%、40.0%和50.0%）魚粉蛋白，配制成5種等氮等能（粗蛋白質49.67%、粗脂肪8.08）的半精制飼料。將各原料粉碎過60目網(wǎng)篩，按配方比例混合均勻，再將其擠壓成直徑1.0 mm的顆粒，風干后保存于-20 ℃冰箱中備用（殷海成等，2014）。試驗飼料組成及營養(yǎng)成分見表1。

1.2試驗魚及飼養(yǎng)管理選擇初始重量（3.47±0.03）g的石斑魚795尾，使用含量為200 mg/L的甲醛溶液進行消毒0.5 h后，隨機分成CK、R20、R30、R40和 R50共 5個試驗組，其中每組3個重復，每個重復飼喂53尾魚。分別于（長、寬、高）2.5 m×1.2 m×1.0 m的鋼化桶中飼養(yǎng)。每天投喂 3次（早上 08：10、中午 12：10、晚上17：10），采取人工投餌方式投喂，試驗期56 d。養(yǎng)殖期間換水的頻率為2次/d，保持水體溶解氧＞5.0 mg/L，水溫（23±1）℃。石斑魚換水過程中，水量應嚴格控制在養(yǎng)殖水體的3/5左右，嚴格觀察石斑魚進食情況，統(tǒng)計每日死亡數(shù)，在測量進食量時主要采用以下方法進行：對石斑魚吃剩下的飼料使用烘干儀60 ℃左右烘干，并使用電子秤稱重、計算（毛盼等，2013）。

表1　試驗飼料組成及營養(yǎng)水平（干物質基礎）

1.3測定指標及方法

1.3.1觀察指標56 d后對5組養(yǎng)殖魚生長性能進行分析，具體計算公式如下：

增重率=（平均終末體質量-平均初始體質量）/平均初始體質量×100；

特定生長率=（ln平均終末體質量-ln平均初始體質量）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料效率=（平均終末體質量-平均初始體質量）/平均每尾魚飼料攝入總量（王亞軍等，2013）。

試驗飼料及全魚常規(guī)營養(yǎng)成分的測定方法為：105℃烘箱干燥法（GB/T6435-2006）測定水分；凱氏定氮法（GB/T6432-1994）測定粗蛋白質；索氏抽提法（GB/T6433-1994）測定粗脂肪；550℃灼燒法（GB/T6438-1992）測定粗灰分。

1.3.2消化酶活力測定待養(yǎng)殖試驗結束后，在各組中隨機選取石斑魚2尾，提取腸道，并將其外部依附物剔除，去離子水洗凈后濾干。取樣品稱重，將10倍體積的高純水勻漿置入，離心取上清，4℃保存。上述指標的測定均采用考馬斯藍染色法進行（張俊智等，2015）。并嚴格遵循試劑盒上的相關要求，以確保檢驗結果的準確性。

1.3.3血清免疫指標測定各組隨機選取石斑魚2尾進行麻醉，抽取靜脈血，將其于溫度為4℃的環(huán)境下保存靜置，時間為3 h，并4000 r/min低溫離心（4℃）10 min后取上清液，置于溫度為-80℃的保存，24 h內完成血清免疫學指標的測定。血清免疫學指標的測定完全以試劑盒相關要求進行（姜俊等，2015）。

1.4統(tǒng)計學處理使用SPSS 21.0完成試驗數(shù)據(jù)處理分析，計數(shù)資料采用的表述方式為“%”，檢驗方式為“χ2”；計量資料采用的表述方式為“x±s”，檢驗方式為“T”。設定P＜0.05為統(tǒng)計學差異成立的必要條件。

2　結果

2.1豆粕替代魚粉對褐點石斑魚生長性能的影響由表2可知，在本試驗條件下，褐點石斑魚存活率均在96%以上，豆粕替代水平未對成活率產(chǎn)生顯著影響（P＞0.05）。R20和R30組在增重率、特定生長率、飼料效率指標上，較CK組有所提升，但無顯著差異（P＞0.05）；與其他組相比，R40和R50組兩組增重率、特定生長率、飼料效率顯著降低（P＜0.05）。由圖1可知，豆粕替代水平（x）與增重率（y）的回歸方程為y=-0.1529x2+4.2456x+614.82，R2=0.9899。在本試驗條件下，據(jù)回歸方程計算，最大增重率的最適豆粕替代量為13.88%。

圖1　不同替代水平對褐點石斑魚增重率的影響

由表3可知，隨著替代水平升高，褐點石斑魚幼魚水分、粗蛋白質和灰分含量均無顯著影響（P＞0.05），但粗脂肪含量呈顯著下降趨勢（P＜0.05），其中R40和R50組魚體的粗脂肪含量均顯著低于CK和R20組（P＜0.05）。

2.2豆粕替代魚粉對褐點石斑魚消化酶活性的影響由表4可知，與CK相比，替代組R20、R30、R40和R50的消化酶活性指標無顯著差異（P＞0.05），但均呈現(xiàn)消化酶活力降低的趨勢。

2.3豆粕替代魚粉對褐點石斑魚免疫指標的影響由表5可知，與對照組相比，替代組R20、R30、R40和R50在免疫球蛋白M（IgM）、血清溶菌酶、補體C3及超氧化物歧化酶指標上無顯著差異（P ＞ 0.05）。

3　討論

目前，利用豆粕替代魚粉對魚類生長性能方面影響的相關研究很多（張帆等，2012；趙海祥等，2011）。本試驗各組存活率無顯著差異，這表明在一定替代比例內，豆粕對魚粉的替代不會產(chǎn)生影響（艾慶輝等，2005）。同樣的效果出現(xiàn)在大口黑鱸（陳乃松等，2013）、尼羅羅非魚（聶國興，2007）研究中。吳釗等（2013）研究發(fā)現(xiàn)，豆粕能替代飼料中40%的魚粉，而對大黃魚生長未造成負面影響。但本試驗替代達到40%時開始出現(xiàn)生長顯著下降的現(xiàn)象。原因可能是豆粕替代比例過大，而豆粕有抗營養(yǎng)因素、氨基酸組成不平衡等問題，易導致魚體生長性能嚴重下降（劉興旺等，2016）。相關研究報道顯示，在用植物蛋白源替代魚粉的過程中，大豆作為主要蛋白源，其含有大量營養(yǎng)頡頏因子（大豆凝集素、皂角甙等），營養(yǎng)頡頏因子會影響魚類消化、吸收植物蛋白，降低魚類生長性能（周歧存等，2005）。

表2　不同替代水平對褐點石斑魚生長性能的影響

表3　不同替代水平對褐點石斑魚肌肉營養(yǎng)成分的影響（干重） %

表4　不同替代水平對褐點石斑魚消化酶活力影響

表5　不同替代水平對褐點石斑魚血清免疫指標影響

曾有學者報道，豆粕成分中的抗胰蛋白酶、異黃酮等均會嚴重的影響機體免疫功能，此外，豆粕中的氨基酸含量不平衡，降低魚類消化和吸收飼料的功能，進而對魚類營養(yǎng)、免疫等功能造成負面影響（馮建等，2016）。在本試驗中，褐點石斑魚免疫指標均未受到豆粕替代的影響，這與以往褐點石斑魚（鄒文超等，2014）的研究基本一致，有別于異育銀鯽（王崇等，2009）和奧尼羅非魚（劉勇等，2009）的報道。這可能與植物蛋白源、魚種類和規(guī)格及原料加工工藝等因素有關；同時，本試驗飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸，這在一定程度上降低了抗營養(yǎng)因子和補充必需氨基酸平衡的作用，關于豆粕替代魚粉對褐點石斑魚免疫功能的影響有待于進一步研究。根據(jù)數(shù)據(jù)結果可以看出，30%魚粉蛋白被豆粕替代時，褐點石斑魚生長性能無顯著變化，消化酶活性、免疫功能等受到的影響不大。為使褐點石斑魚生長性能、免疫功能及消化酶活性等指標不受到影響，同時結合替代水平對增重量影響的數(shù)據(jù)分析，建議在豆粕替代魚粉蛋白時，其比例最好不超過30%（李學麗等，2017）。本次研究因樣本數(shù)據(jù)量過少存在一定的局限性，用豆粕替代魚粉對不同魚類免疫功能影響未做詳細研究，有待下一步深入研究。

[1]艾慶輝，謝小軍.水生動物對植物蛋白源利用的研究進展[J].中國海洋大學學報，2005，35（6）：925～935.

[2]陳乃松，馬秀麗，趙明，等.大口黑鱸幼魚飼料中白魚粉與兩種豆粕的適宜配比[J].水產(chǎn)學報，2013，（9）：1389～1400．

[3]馮建，王萍，何嬌嬌，等.發(fā)酵豆粕替代魚粉對大黃魚幼魚生長性能、體成分、血清生化指標及肝臟組織形態(tài)的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2016，28（11）：3493 ～ 3502．

[4]漢雪梅，張曦，陶琳麗，等.豆粕替代魚粉對魚類膽固醇代謝影響的研究進展[J].云南農業(yè)大學學報，2013，28（5）：734～740．

[5]姜俊，周小秋，銀龍，等.膨化飼料中豆粕替代魚粉對建鯉生長性能、體成分和消化吸收功能的影響[J].華北農學報，2015，30（s1）：107～ 111．

[6]李學麗，王際英，宋志東，等.酶解豆粕替代魚粉對珍珠龍膽石斑魚幼魚生長和主要代謝酶活力的影響[J].海洋漁業(yè)，2017，39（5）：529～ 538．

[7]劉興旺，王華朗，張海濤，等.豆粕和發(fā)酵豆粕替代魚粉對卵形鯧鲹攝食生長的影響[J].中國飼料，2010，（18）：27～29．

[8]劉勇，冷向軍，李小勤，等.豆粕替代魚粉對奧尼羅非魚生長，表觀消化率及血清非特異性免疫的影響[J].中國糧油學報，2009，（12）：95～ 100．

[9]毛盼，胡毅，李金龍，等.豆粕替代魚粉對青魚幼魚生長及生理生化指標的影響[J].淡水漁業(yè)，2013，43（5）：50～56．

[10]聶國興，王俊麗，周洪琪.飼料中添加木聚糖酶對尼羅羅非魚生長及血清激素水平的影響[J].中國水產(chǎn)科學，2007，（2）：249～ 256．

[11]石斑魚的營養(yǎng)需求研究[EB/OL].http：//www.shuichan.cc/article_view-42672.html，2016-06-29.

[12]王崇，雷武，解綬啟，等.飼料中豆粕替代魚粉蛋白對異育銀鯽生長、代謝及免疫功能的影響[J].水生生物學報，2009，33（4）：740～747.

[13]王賽，陳剛，張健東，等.不同蛋白質源部分替代魚粉對褐點石斑魚幼魚生長性能、體組成以及血清生化指標的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2012，24（1）：160～ 167．

[14]王學習，周銘文，黃巖，等.飼料?；撬崴綄Σ煌L階段斜帶石斑魚幼魚生長性能和體成分的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2017，29（5）：1810～ 1820．

[15]王亞軍，林文輝，楊智慧，等.發(fā)酵豆粕部分替代魚粉對日本鰻鱺生長性能和體內礦物元素的影響[J].南方水產(chǎn)科學，2013，9（3）：39～43.

[16]吳釗，陳乃松，華雪銘，等.4種豆粕替代魚粉對大黃魚生長、抗氧化及抗菌能力的影響 [J].海洋漁業(yè)，2016，38（5）：495～506.

[17]殷海成，賈峰，張哲，等.飼料中發(fā)酵豆粕替代魚粉對黃河鯉生長及消化酶活性的影響[J].糧食與飼料工業(yè)，2014，12（3）：48～51．

[18]張帆，張文兵，麥康森，等.飼料中豆粕替代魚粉對大黃魚生長、消化酶活性和消化道組織學的影響[J].中國海洋大學學報：自然科學版，2012，（1）：75～ 82．

[19]張俊智，呂富，郇志利，等.膨化豆粕替代不同比例魚粉對黃鱔生長性能、體成分、腸道消化酶活力及血清生化指標的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2015，27（11）：3567 ～ 3576．

[20]趙海祥，馮健，寧毅，等.大豆粕替代魚粉在吉富羅非魚稚魚實用飼料中的效果評價[J].動物營養(yǎng)學報，2011，23（10）：1840～ 1846．

[21]周歧存，麥康森，劉永堅，等.動植物蛋白源替代魚粉研究進展 [J].水產(chǎn)學報，2005，29（3）：404～ 410．

[22]鄒文超，閆洋洋，楊紅玲，等.豆粕部分替代魚粉對斜帶石斑魚生長、消化酶活力和免疫功能的影響[J].飼料研究，2014，（19）：61～64．