李穎平，耿 丹，楊繼生，郭春燕，聶存喜，程發(fā)祥

（1.晉中職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程系,山西晉中 030600；2.石河子大學(xué)動物科技學(xué)院,新疆石河子 832003；3.威海經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展局,山東威海 264205）

肉雞飼料中添加脂肪或油能夠?qū)崿F(xiàn)最佳生長性能和飼料報(bào)酬，但植物油富含不飽和脂肪酸，特別容易氧化。油脂氧化過程會產(chǎn)生自由基，自由基與分子氧結(jié)合引起脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，產(chǎn)生過氧化自由基，進(jìn)而導(dǎo)致日糧的能量和脂溶性營養(yǎng)物質(zhì)利用率下降，影響肉雞健康和生長（Fellenberg等，2006）。此外，氧化產(chǎn)物引起肉雞發(fā)生氧化應(yīng)激，對雞肉的品質(zhì)產(chǎn)生負(fù)面影響，特別是風(fēng)味、顏色和滴水損失等方面（蔣守群等，2011）。人工合成抗氧化劑如乙氧基喹啉、沒食子酸等通常被用在飼料中防止脂質(zhì)過氧化，同時(shí)乙氧基喹啉還能促進(jìn)動物生長性能，維持肉脂穩(wěn)定性（Wang等，1997）。研究表明，復(fù)合抗氧化劑（乙氧基喹啉、沒食子酸）能提高植物油穩(wěn)定性及對肉雞生長具有

促進(jìn)作用（Tavarez等，2011）。此外，關(guān)于維生素E（VE）對油脂抗氧化作用已有大量研究（趙貴興等，2002；魯志成等，2003）。因此本試驗(yàn)在玉米—豆粕型日糧中添加氧化豆油，探討維生素E和抗氧化劑對1～42 d嶺南黃雞生長性能、肉品質(zhì)和抗氧化性能的影響，為維生素E和抗氧化劑在油脂氧化日糧中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)資料。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)材料 抗氧化劑（主要成分為乙氧基喹啉、丁基羥基茴香醚、檸檬酸和磷酸）購自建民工業(yè)（珠海）有限公司，VE購自帝斯曼中國有限公司。

1.2試驗(yàn)動物及分組 試驗(yàn)選取健康、體重一致的1 d雌性嶺南黃雞500羽，隨機(jī)分為5組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20羽。試驗(yàn)日糧參考《中國雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)2004》和NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)配制，對照組飼喂以玉米—豆粕為主的基礎(chǔ)日糧（VE含量10 IU/kg）；油脂氧化組飼喂加入3%氧化豆油的日糧，氧化豆油制作參考Lu等（2014）的試驗(yàn)方法；VE組、抗氧化劑組和VE+抗氧化劑組飼喂分別在油脂氧化日糧中添加200 IU/kg VE、100 mg/kg抗氧化劑和100 IU/kg+50 mg/kg抗氧化劑的日糧。1～21 d和22～42 d基礎(chǔ)日糧和油脂氧化日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　1～21 d和22～42 d嶺南黃雞基礎(chǔ)日糧和油脂氧化日糧組成及營養(yǎng)水平

1.3飼養(yǎng)管理 雞只采用網(wǎng)上平養(yǎng)，舍內(nèi)第一周溫度控制在33 ℃，之后每周調(diào)節(jié)溫度直至溫度控制在20 ℃左右，舍內(nèi)相對濕度控制在65%，光照采用人工光照和自然光照結(jié)合，光照強(qiáng)度控制在30 lx。試驗(yàn)雞只全期自有采食、飲水，按照常規(guī)程序進(jìn)行免疫和消毒。試驗(yàn)期42 d。

1.4測定指標(biāo)

1.4.1生長性能 肉雞試驗(yàn)期間每周按重復(fù)記錄采食量，在試驗(yàn)當(dāng)天、22 d、43 d清晨對試驗(yàn)雞只按重復(fù)進(jìn)行稱重，記錄期末體重，計(jì)算1～21 d和22～42 d各組雞只平均日采食量、平均日增重和料重比。

1.4.2血漿抗氧化指標(biāo) 在試驗(yàn)第43 d清晨飼喂前，各重復(fù)隨機(jī)選取4只雞進(jìn)行屠宰，采集肝臟和胸肌，稱重后，-80 ℃保存。分別于試驗(yàn)第22和43 d對試驗(yàn)雞只翅下靜脈采血5 mL于肝素鈉抗凝管，用于制備血漿。血漿α-1酸性糖蛋白（α-1 acid glycoprotein，AGP）、尿酸（uric acid，UA）和硫代巴比妥酸反應(yīng)物（Thiobarbituric Acid Reactive Substances，TBARS）采用試劑盒法測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所有限公司。1.4.3 肝臟抗氧化基因mRNA表達(dá)水平 肝臟過氧化氫酶（Catalase，CAT）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate Dehydrogenase，GAPDH）引物系列、cDNA合成和熒光定量PCR操作參考Lu等（2014）研究結(jié)果。

1.4.4胸肌中VE和VA含量 采用高效液相色譜法測定胸肌中VA和VE含量，具有操作方法參考GB 5009.82-2016《食品中維生素A、D、E的測定》。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS18.0單因子方差分析進(jìn)行分析，用Tukey氏多重比較對各處理組均值進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05作為差異顯著準(zhǔn)，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2　結(jié)果與分析

2.1油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對1～42 d肉雞生長性能的影響 油脂氧化日糧中添加VE和抗氧化劑對1～21 d、22～42 d和1～42 d嶺南黃雞生長性能的影響見表2。與對照組相比，油脂氧化組和各處理組顯著提高21 d肉雞體重、平均日增重和平均日采食量（P＜0.05），但22～42 d肉雞生長性能并未表現(xiàn)出同樣的生長趨勢。油脂氧化組和VE組肉雞42 d末重顯著高于其他各組（P＜0.05）。與其他各組相比，VE組肉雞生長后期（22～42 d）平均日增重和平均日采食量顯著低于其他各組（P＜0.05），料重比顯著高于其他各組（P＜0.05）。抗氧化劑組和VE+抗氧化劑組肉雞生長全期（1～42 d）料重比顯著低于其他各組（P＜0.05）。

表2　油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞生長性能的影響

2.2油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞血漿抗氧化指標(biāo)的影響 由表3可知，VE+抗氧化劑組對21 d嶺南黃雞血漿AGP水平影響顯著，較對照組提高70.11%（P＜0.05），而各組對42 d肉雞血漿AGP水平無顯著影響（P＞0.05）。對照組與各處理對21 d和42 d肉雞血漿UA水平無顯著影響（P＞0.05）。與其他各組相比，油脂氧化組21 d肉雞血漿TBARS水平表現(xiàn)為最低（P＜0.05），而VE組42 d肉雞血漿TBARS水平表現(xiàn)為最高（P＜0.05）。

表3　油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞血漿抗氧化指標(biāo)的影響

2.3油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞肝臟抗氧化基因表達(dá)的影響 由表4可知，各處理組之間肝臟CAT和GSH-Px基因mRNA表達(dá)水平并無顯著差異（P＞0.05），但對照組肝臟GSH-Px基因mRNA表達(dá)水平表現(xiàn)為最高。對照組SOD基因mRNA表達(dá)水平表現(xiàn)為最高，較油脂氧化組提高6.38%（P＜0.05）。

表4　油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞肝臟抗氧化基因表達(dá)的影響

2.4 油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞胸肌肉質(zhì)的影響 由表5可知，VE組和抗氧化劑組胸肌滴水損失顯著低于油脂氧化組，分別降低22.58%（P＜0.05）和23.39%（P＜0.05）。與油脂氧化組相比，VE+抗氧化劑組胸肌pH顯著提高了4.53%（P＜0.05），乳酸含量顯著降低了22.12%（P＜0.05）。日糧油脂氧化及添加VE或抗氧化劑對胸肌VA含量并無顯著影響（P＞0.05），但油脂氧化日糧添加VE顯著提高了胸肌VE含量（P＜ 0.05）。

表5　油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對肉雞胸肌肉質(zhì)的影響

3　討論

3.1油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對1～42 d嶺南黃雞生長性能的影響 動物日糧中的多不飽和脂肪和油脂容易氧化，大量研究表明，日糧加入氧化的油脂會對肉雞生長性能產(chǎn)生負(fù)面影響，如增重和飼料轉(zhuǎn)化率降低等（Ajum等，2004；Tavarez等，2011）。在本試驗(yàn)中，油脂氧化組及VE、抗氧化劑、VE+抗氧化劑組肉雞生長性能高于對照日糧組，這可能與添加的玉米油中富含多不飽和脂肪酸有關(guān)，因?yàn)槿怆u更容易消化利用多不飽和脂肪酸（Ferrini等，2008；陳文等，2011）。有研究發(fā)現(xiàn)，肉雞日糧中添加2%～4%的魚油可以顯著提高1～38 d肉雞日增重，說明多不飽和脂肪酸能促進(jìn)肉雞生長前期的生長性能（Lopez-Ferrer等，2001），這與本研究結(jié)果一致。本研究中抗氧化劑組提高肉雞生長性能與日糧中油脂氧化與否并無一定聯(lián)系，因?yàn)檠趸瘎┲械某煞忠已趸芴岣呱L性能（Wang等，1997；Tavarez等，2011）。本試驗(yàn)中，在油脂氧化日糧中加入200 IU/kg的VE，肉雞后期生長性能較其他組差，Englmaierova等（2011）同樣發(fā)現(xiàn)，在非應(yīng)激狀態(tài)下日糧中過量的VE水平會降低肉雞生長性能，其原因可能與過量VE作為促氧化劑影響其本身的功能有關(guān)。

3.2油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對1～42 d嶺南黃雞血漿抗氧化指標(biāo)的影響 在應(yīng)激條件下，急性蛋白反應(yīng)可以通過動物自身的抗體達(dá)到生理平衡狀態(tài)，同時(shí)限制有害微生物的繁殖（Murata等，2004）。AGP是存在于鳥類中的一種急性蛋白，能參與應(yīng)激狀態(tài)下的炎癥反應(yīng)和免疫促進(jìn)作用（Hochepied等，2003）。本試驗(yàn)中，所有含油脂氧化的日糧組AGP含量均高于對照組，說明肉雞在生長早期是處于應(yīng)激狀態(tài)。氧化應(yīng)激誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化，脂質(zhì)雙擊破裂后形成過氧化物（高晶，2008）。血液中TBARS含量常作為評判氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化水平的生理指標(biāo)，本試驗(yàn)中VE組42 d肉雞血漿TBARS含量表現(xiàn)為最高，說明在本試驗(yàn)條件下，高水平的VE提高了脂質(zhì)氧化水平。UA是大多數(shù)動物的排泄產(chǎn)物，是人和鳥類的非酶性抗氧化物質(zhì)，能降低氧化應(yīng)激造成的組織損傷和活性氧的生成（Carro等，2010；陳強(qiáng)等，2012）。本研究發(fā)現(xiàn)，各組血漿UA含量并無顯著差異，但對照組和VE+抗氧化劑組血漿UA含量表現(xiàn)為最高，說明在生長后期，油脂氧化日糧中添加VE和抗氧化劑復(fù)合物能加強(qiáng)機(jī)體非酶性抗氧化系統(tǒng)的激活。

3.3油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對1～42 d嶺南黃雞肝臟抗氧化基因表達(dá)的影響

本試驗(yàn)中通過熒光定量PCR來檢測肉雞肝臟中SOD、CAT和GSH-Px的mRNA表達(dá)水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各處理對CAT和GSH-Px基因mRNA表達(dá)水平并無顯著影響。但對照組肝臟SOD基因mRNA表達(dá)水平顯著高于油脂氧化日糧組，這與對照組肉雞后期生長性能高于油脂氧化組結(jié)果一致。

3.4油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑對1～42 d嶺南黃雞胸肌肉質(zhì)的影響 肌肉細(xì)胞膜受到自由基攻擊，細(xì)胞破裂，細(xì)胞中水分流失，從而造成肌肉滴水損失（Mahan，2001）。與油脂氧化組相比，本研究發(fā)現(xiàn)，油脂氧化日糧添加VE和抗氧化劑能降低胸肌滴水損失，說明VE和抗氧化劑能維持肌肉細(xì)胞膜的完整性，避免氧化物造成的損傷。在肉形成的過程中，肌肉收縮產(chǎn)生乳酸，從而使肉的pH降低（安榮榮等，2017）。油脂氧化組肌肉乳酸含量顯著高于VE+抗氧化劑組，同時(shí)pH也表現(xiàn)為最低。當(dāng)pH下降至蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（5.4）時(shí)，肌肉系水力變?nèi)酰S持肌纖維空間的靜電也減弱（Huff-Lonergan等，2007），這也是油脂氧化組肉雞胸肌乳酸含量最高、pH最低、滴水損失最高的原因。本研究發(fā)現(xiàn)，VE組肉雞胸肌中VE含量顯著高于其他各組，而與對照組相比，油脂氧化日糧中添加抗氧化劑或VE+抗氧化劑對肉雞胸肌VE含量影響不顯著，這與Tavarez等（2011）研究結(jié)果一致。Bartov等（1972）報(bào)道，日糧添加抗氧化劑可以降低機(jī)體對VA的利用，從而使組織中VA含量增加。然而本試驗(yàn)中各處理組胸肌VA的含量并無顯著影響，這可能與試驗(yàn)雞只品種、日糧和抗氧化劑成分不同有關(guān)，具體差異還有待進(jìn)一步研究。

4　結(jié)論

油脂氧化日糧中添加VE、抗氧化劑或VE和抗氧化復(fù)合物一定程度提高肉雞抗氧化性能，單獨(dú)添加抗氧化劑和VE能降低胸肌滴水損失，但高水平的VE會降低1～42 d嶺南黃雞生長后期的生長性能。

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