周勇　林云萬　張晶　陶霞　侯水平　白志軍　吳新偉

鮑曼不動桿菌（Ab）是一種重要的機會致病菌，能引起住院患者呼吸機相關性肺炎、血流感染、腹腔感染以及軟組織感染等。尤其是在重癥監(jiān)護病房（ICU），鮑曼不動桿菌常引起暴發(fā)流行，帶來極高的致病率和致死率。目前，碳青霉烯類抗生素是治療多重耐藥鮑曼不動桿菌的重要藥物，然而在全球范圍內(nèi)關于耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌的報道正在逐年增加[1-3]。因此本研究擬對ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌攜帶的blaOXA-23-like轉座子進行檢測，同時使用PFGE分析ST195菌株同源性以了解和掌握ST195菌株傳播的特征。

1　材料和方法

1.1　菌株來源

46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌由本課題組在2012年5月—2013年11月從廣州市兩家三甲醫(yī)院ICU患者中分離得到，分別是31株ST195、11株ST365、3株ST381和1株ST75耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌，所有46株菌經(jīng)PCR鑒定均攜帶blaOXA-23-like基因[4]。

1.2　攜帶blaOXA-23-like轉座子的檢測

經(jīng)復蘇的菌株接種于血平板，37℃孵育18 h后挑取1環(huán)菌苔于50 μl滅菌純水中充分研磨，菌懸液于100℃水浴10 min后12 000 r/min離心3 min，上清作為PCR檢測模板。擴增攜帶 blaOXA-23-like的 轉 座 子 Tn2006、Tn2007、Tn2008和 Tn2009的引物以及擴增體系和條件參考相關文獻進行[5-6]。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳進行分析。陽性產(chǎn)物送廣州昊天生物科技有限公司測序，測序結果上傳NCBI網(wǎng)站比對分析。

1.3　脈沖場凝膠電泳（PFGE）

使用ApaI限制內(nèi)切酶進行酶切，沙門菌H9812的基因組DNA經(jīng)XbaI酶切后作為分子量標準。PFGE圖像用BioNumeric 6.6軟件進行非加權組平均法（UPGMA）以及通過Dice相似度系數(shù)（容忍值設為1.5%）對31株ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌進行聚類分析，1株ST17非耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌作為對照。

2　結果

2.1　blaOXA-23-like轉座子的擴增結果

46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌都檢出blaOXA-23-like轉座子，其中42株菌檢出Tn2006，4株菌攜帶Tn2009，未檢出Tn2007和Tn2008。31株ST195菌株都檢出Tn2006，其余11株有Tn2006的是ST365；3株ST381攜帶Tn2009，剩下1株Tn2009菌株為ST75。

2.2　PFGE分型結果

圖1　31株ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌PFGE聚類分析結果，1株ST17敏感菌作為對照，ND：未檢出

圖1顯示來自B醫(yī)院的9株ST195之間的相似度達到91.6%，而A醫(yī)院的21株菌以及來自B醫(yī)院的編號20131430菌株互相之間的相似度高達94.3%，兩家醫(yī)院的ST195菌株PFGE相似度達90.8%，根據(jù)文獻鮑曼不動桿菌PFGE譜型達到87%相似度的菌株可聚為一簇，表明兩家醫(yī)院的ST195菌株有相同遺傳背景。

3　討論

本課題組之前報道了在廣州市兩家三甲醫(yī)院ICU患者血液中分離到46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌，其中ST195菌株有31株。研究結果推測ST195菌株有可能是本地區(qū)的優(yōu)勢菌株[4]。此后，多篇國內(nèi)發(fā)表的論文發(fā)現(xiàn)ST195菌株不僅已成為廣州市醫(yī)院的優(yōu)勢菌株，且在國內(nèi)多個地區(qū)的醫(yī)院內(nèi)廣泛傳播[7-8]。有關ST195菌株傳播速度加快的原因以及其獲得blaOXA-23-like基因的途徑尚不明確，特別是目前仍無對ST195菌株blaOXA-23-like基因周圍序列的報道。

blaOXA-23-like基因的周圍序列共有五種，包括：Tn2006、Tn2007、Tn2008、Tn2008B以及Tn2009。多個研究顯示轉座子Tn2008和Tn2009是我國多個地區(qū)碳青霉烯類耐藥分離株攜帶blaOXA-23-like的重要結構[5-6]。本研究結果顯示46株耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌中只有4株檢出Tn2009，其余42株全部攜帶Tn2006，主要是31株ST195。本研究利用PFGE對31株ST195菌進行了分析，結果顯示來自兩家醫(yī)院的31株菌可歸為一個聚類（相似度90.8%），這個結果說明這兩家醫(yī)院分離的ST195菌株很可能來自同一克隆。

綜上所述，研究結果表明ST195耐碳青霉烯鮑曼不動桿菌能在不同醫(yī)院間克隆傳播，而且之前研究結果發(fā)現(xiàn)此型菌株耐藥性很強，提示我們應加強ST195菌株的監(jiān)測特別是院內(nèi)環(huán)境中的監(jiān)測，采取必要措施防止ST195菌株在院內(nèi)和院間的傳播。

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