潘琳琳,史仁杰

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué) 研究生院，江蘇 南京　210001；2.江蘇省中醫(yī)院 肛腸科，江蘇 南京　210001)

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雌性，體質(zhì)量180～220 g,飼養(yǎng)在溫度(23±1) ℃、濕度(55±10)%和光暗周期為10 h(光)/14 h(暗)的動(dòng)物飼養(yǎng)室中,自由取食、飲水，江蘇省中醫(yī)院藥理實(shí)驗(yàn)室提供。

1.1.2實(shí)驗(yàn)藥材(1)芫花根水提取物浸膏：取1 000 g芫花根藥物飲片，首先加5倍體積的水浸沒(méi)藥材，浸泡24 h后，進(jìn)行減壓提取，保持85°微沸2 h，雙層紗布過(guò)濾，分離煎出液，藥渣依法煎出2次，合并各次煎出液。(2)黃芩油膏：江蘇省中醫(yī)院院內(nèi)制劑。

1.2　方法

1.2.2深Ⅱ度燙傷模型的制備將大鼠用棉線固定在木板上，在老鼠背部用剃毛器剃毛備皮。準(zhǔn)備一個(gè)直徑為2.8 cm的無(wú)底玻璃管，玻璃管下方以薄膜周?chē)潭ǎ瑢⑵浒丛诖笫蟊巢空醒?，?0 ml(95±1)℃的熱水倒進(jìn)管內(nèi)，用力按住玻璃管，使充分接觸鼠背，保持20 s 后，移開(kāi)玻璃管。大鼠燙傷后，傷口暴露，單籠飼養(yǎng)。燙傷后創(chuàng)面皮膚立即變白，輕度腫脹，未形成水泡，燙傷部位和正常皮膚之間有明顯界限，24 h后傷口部位開(kāi)始出現(xiàn)輕微硬痂般棕色，界限更為明顯，48 h后會(huì)出現(xiàn)早期硬痂，與創(chuàng)面面積相同，基本符合深Ⅱ度燙傷特征，表明模型制作成功?？瞻讓?duì)照組不做任何處理，B組燙傷處外敷芫花根水提物浸膏紗布，C組敷黃芩油紗布。

1.2.4檢測(cè)方法(1)加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1 ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37 ℃孵育1 h，(同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)；(2)洗滌，PBST洗滌五次，每次30秒；(3)加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1 ml。37 ℃孵育0.5～1 h；(4)洗滌，PBST洗滌五次，每次30 s；(5)加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1 ml，37 ℃ 10～30 min；(6)終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05 ml；(7)用酶標(biāo)儀測(cè)定每孔在450 nm處的OD值。

1.3　統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2　結(jié)　　果

2.1　用藥后對(duì)大鼠痛閾的影響

造模后大鼠痛閾較正常明顯降低，隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)，芫花根水提物及黃芩油膏組痛閾較對(duì)照組有提高，空白組痛閾仍較低，表明芫花根水提物及黃芩油膏均可提升大鼠痛閾，與空白組相比較有差異(P<0.05)，但芫花根組與黃芩油膏組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

組　別3h6h12h正常組15．22±0．9716．00±1．2215．44±0．72空白對(duì)照組7．11±0．607．55±1．016．77±0．67芫花根水提物組7．11±0．787．66±1．008．44±1．13黃芩油膏組6．88±0．787．44±1．139．00±1．32

2.2　用藥后對(duì)大鼠疼痛級(jí)別的影響

給藥后，各受試組大鼠的疼痛級(jí)別評(píng)分均降低，且這種作用隨著給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而增強(qiáng)，表明芫花根水提物及黃芩油膏均可降低大鼠疼痛級(jí)別，但兩組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而與空白組相比有差異(P<0.05)。

組　別3h6h12h空白對(duì)照組2．44±0．521．66±0．501．33±0．50芫花根水提物組2．44±0．521．55±0．520．77±0．44黃芩油膏組2．44±0．521．55±0．520．66±0．70

2.3　緩激肽含量測(cè)定

結(jié)果表明，與空白對(duì)照組相比，芫花根水提物和黃芩油膏組對(duì)緩激肽的生成均有顯著的抑制作用(P<0.001)，且這種作用隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而有所增強(qiáng)，黃芩油膏組對(duì)緩激肽的抑制作用較芫花根組更為明顯，組間差異顯著(P<0.001)。

組　別3h6h12h正常組12．95±1．8612．95±1．8612．95±1．86空白對(duì)照組37．38±1．0440．87±0．9940．87±0．99芫花根水提物組27．79±1．7922．45±3．2722．45±3．27黃芩油膏組21．26±1．2718．34±2．1818．34±2．18

組　別3h6h12h正常組113．06±6．92113．06±6．92113．06±6．92空白對(duì)照組295．57±9．79305．52±9．99318．36±7．49芫花根水提物組251．38±9．16203．79±5．40156．98±8．19黃芩油膏組201．54±7．49175．88±7．54129．34±11．1

3　討　　論

[參考文獻(xiàn)]

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[10] 陳建.芫花根水煎劑對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑殺作用的研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2016.