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        基于免疫組織化學(xué)法分析基質(zhì)金屬蛋白酶2在喉鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)及意義的Meta分析△

        2018-04-02 06:57:04黃強周梁
        中國眼耳鼻喉科雜志 2018年2期
        關(guān)鍵詞:差異分析研究

        黃強 周梁

        喉癌是耳鼻喉科常見的惡性腫瘤之一,且隨著生活環(huán)境以及生活方式的改變,發(fā)病率有逐年上升趨勢[1],也是唯一一個5年生存率不升反降的腫瘤類型[2]。吸煙、飲酒的人群罹患喉癌的風(fēng)險比不吸煙、不飲酒的人群高數(shù)倍[3]。喉癌早期癥狀隱匿,發(fā)現(xiàn)時60%的患者已進入進展期[1],故早期診斷和治療喉癌是臨床的重中之重。相關(guān)研究[4]表明:基質(zhì)金屬蛋白酶2(metal matrix proteinase-2, MMP-2)介導(dǎo)喉癌細(xì)胞的間質(zhì)遷移以及浸潤、轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為,在喉癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用。本研究系統(tǒng)評價MMP-2在喉癌中的表達(dá)及其臨床意義,以期能給基礎(chǔ)和臨床研究提供證據(jù)支撐。

        1 資料與方法

        1.1檢索策略通過中國知網(wǎng)(CNKI)、萬方、維普、Pubmed、Web of science等國內(nèi)外數(shù)據(jù)庫以“基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、明膠酶2(matrix metalloproteinase-2)、喉癌(laryngeal carcinoma)、喉鱗狀細(xì)胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)、喉腫瘤(laryngeal cancer)”等檢索詞進行計算機檢索,收集關(guān)于MMP-2在喉癌中表達(dá)及其意義的文獻,時間跨度為建庫后到2017年1月,輔以手工檢索參考文獻。

        1.2納入標(biāo)準(zhǔn)①國內(nèi)外公開發(fā)表的關(guān)于MMP-2在喉癌中表達(dá)情況的病例-對照研究;②腫瘤組標(biāo)本必須經(jīng)病理驗證為LSCC,對照組標(biāo)本為非腫瘤組織,包括正常黏膜、聲帶息肉以及癌旁安全緣組織;③所有喉癌患者之前未接受任何放、化療以及生物治療等措施;④檢測方法為免疫組織化學(xué)SP(streptavidin-perosidase)法;⑤原始文獻中可提取出優(yōu)勢比(odd ratio,OR)值和95%可信區(qū)間(confidence interval,CI),或者可通過推導(dǎo)得出。

        1.3排除標(biāo)準(zhǔn)①無對照組或者對照組為癌前病變樣本;②樣本含非LSCC以及喉轉(zhuǎn)移癌;③Western印跡等其他檢測方法或非免疫組織化學(xué)SP法;④無免疫組織化學(xué)結(jié)果評判標(biāo)準(zhǔn);⑤綜述、會議論文等文獻;⑥推導(dǎo)不出數(shù)據(jù)以及數(shù)據(jù)信息過少的文獻;⑦重復(fù)發(fā)表的文獻。

        1.4篩選、質(zhì)量評價、數(shù)據(jù)提取由2名研究者根據(jù)檢索策略以及納入、排除標(biāo)準(zhǔn)獨立進行文獻檢索,根據(jù)Lichtenstein質(zhì)量評價表[5]進行質(zhì)量評價。①是否明確納入標(biāo)準(zhǔn)及其基本特征;②是否科學(xué)地設(shè)計試驗;③是否正確處理相關(guān)因素及方法;④是否正確使用統(tǒng)計方法;⑤是否就存在的偏倚進行討論。以上5項指標(biāo),每項為1分,滿足總分≥3分者認(rèn)為文獻質(zhì)量可靠。進行數(shù)據(jù)提取、整理。主要指標(biāo)為MMP-2在腫瘤組織以及對照組中的表達(dá)差異,次要指標(biāo)包括MMP-2在喉癌不同臨床分期、TNM分期、病理分級、原發(fā)位置以及淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移之間的差異。有分歧時由2名研究者

        通過討論解決問題,意見不一致的由第三方評定。

        1.5統(tǒng)計學(xué)處理采用從Cochrane協(xié)作網(wǎng)下載的Review manager 5.3軟件按照Meta分析的要求對結(jié)局指標(biāo)進行合并分析并繪制出森林圖,采用OR值及95%CI為分析統(tǒng)計量,檢驗水平為P=0.05。25%≤I2<50%為存在輕度異質(zhì)性,50%≤I2<75%為存在中度異質(zhì)性,I2≥75%為存在重度異質(zhì)性。各研究結(jié)果間存在異質(zhì)性差異時(P≤0.10,I2≥25%)采用隨機效應(yīng)模型,無異質(zhì)性差異時則采用固定效應(yīng)模型(P>0.10,I2<25%)。

        2 結(jié)果

        2.1文獻檢索結(jié)果聯(lián)機以及手工檢索共獲得相關(guān)文獻122篇,根據(jù)文獻的納入、排除標(biāo)準(zhǔn),閱讀摘要排除內(nèi)容不相關(guān)文獻80篇,重復(fù)發(fā)表或綜述6篇,閱讀全文排除無對照組或?qū)φ战M不符要求11篇,樣本含非LSCC及喉轉(zhuǎn)移癌3篇,非免疫組織化學(xué)SP法檢測13篇。共納入符合標(biāo)準(zhǔn)的文獻9篇[6-14],其中LSCC組樣本共473例,對照組樣本共245例(圖1)。

        圖1. 文獻篩選流程圖

        2.2入選文獻的基本特征納入研究的9篇文獻質(zhì)量都較高,包含了LSCC組與對照組MMP-2表達(dá)水平的比較以及MMP-2在LSCC淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移之間的原始數(shù)據(jù);5篇涉及MMP-2在LSCC不同臨床分期之間的差異比較;4篇涉及MMP-2在LSCC不同TNM分期中的變化;7篇涉及MMP-2在LSCC不同病理分級表達(dá)情況的比較;3篇涉及MMP-2在LSCC不同原發(fā)位置的表達(dá)差異。文獻質(zhì)量評價詳情、基本特征見表1、2。

        表1 Lichtenstein質(zhì)量評價表

        表2 納入研究的基本特征(MMP-2表達(dá)陽性率)

        注:“/”表示無此項

        2.3MMP-2表達(dá)結(jié)果分析

        2.3.1MMP-2在LSCC組與對照組中的表達(dá)有關(guān)MMP-2在LSCC組和對照組中的研究共納入9篇文獻,其中LSCC組中MMP-2表達(dá)陽性者359例(75.90%),對照組中MMP-2表達(dá)陽性者67例(27.35%)。各項研究間存在中度異質(zhì)性(P=0.03,I2=54%),因此選用隨機效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:LSCC組和對照組在MMP-2表達(dá)水平上的差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義[OR=8.88,95%CI:5.04~15.63,P<0.05](圖2)。

        圖2. MMP-2在LSCC組與對照組中的表達(dá)情況

        2.3.2MMP-2在LSCC不同臨床分期中的表達(dá)關(guān)于MMP-2在LSCC不同臨床分期中的研究共納入5篇文獻,其中Ⅰ~Ⅱ期MMP-2表達(dá)陽性者56例(68.29%),Ⅲ~Ⅳ期MMP-2表達(dá)陽性者111例(85.38%)。各項研究之間不存在異質(zhì)性(P=0.50,I2=0),據(jù)此選用固定效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:LSCC不同臨床分期中MMP-2的表達(dá)水平差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義[OR=2.76,95%CI:1.39~5.51,P<0.05](圖3)。

        圖3. MMP-2在LSCC不同臨床分期中的表達(dá)情況

        2.3.3MMP-2在LSCC不同TNM分期中的表達(dá)關(guān)于MMP-2在LSCC不同TNM分期中的研究共納入4篇文獻,其中T1~T2期MMP-2表達(dá)陽性者52例(61.90%),T3~T4期MMP-2表達(dá)陽性者95例(83.33%)。各項研究之間不存在異質(zhì)性(P=0.45,I2=0),據(jù)此選用固定效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:LSCC不同TNM分期中MMP-2的表達(dá)水平差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義[OR=3.46,95%CI:1.72~6.96,P<0.05](圖4)。

        圖4. MMP-2在LSCC不同TNM分期中的表達(dá)情況

        2.3.4MMP-2在LSCC有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)關(guān)于MMP-2在LSCC有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的研究共納入9篇文獻,其中淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組MMP-2表達(dá)陽性者190例(87.16%),淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組MMP-2表達(dá)陽性者169例(66.27%)。各項研究之間存在中度異質(zhì)性(P=0.007,I2=62%),因此選用隨機效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:MMP-2在LSCC淋巴結(jié)有無轉(zhuǎn)移的表達(dá)水平上差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義[OR=4.07,95%CI:1.60~10.32,P<0.05](圖5)。

        圖5. MMP-2在LSCC有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)情況

        2.3.5MMP-2在LSCC不同病理分級中的表達(dá)關(guān)于MMP-2在LSCC不同病理分級中的研究共納入7篇文獻,其中中低分化組MMP-2表達(dá)陽性者189例(83.26%),高分化組MMP-2表達(dá)陽性者87例(64.93%)。各項研究之間存在輕度異質(zhì)性(P=0.08,I2=46%),因此選用隨機效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:MMP-2在LSCC不同病理分級的表達(dá)水平上的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義[OR=3.04,95%CI:1.35~6.85,P<0.05](圖6)。

        圖6. MMP-2在LSCC不同病理分級中的表達(dá)情況

        2.3.6MMP-2在LSCC不同原發(fā)位置中的表達(dá)關(guān)于MMP-2在LSCC不同原發(fā)位置中的研究共納入3篇文獻,其中聲門型組MMP-2表達(dá)陽性者68例(74.73%),非聲門型組MMP-2表達(dá)陽性者54例(72.97%)。各項研究之間存在中度異質(zhì)性(P=0.14,I2=50%),因此選用隨機效應(yīng)模型進行分析。結(jié)果顯示:MMP-2在LSCC不同原發(fā)位置的表達(dá)水平上的差異并不具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義[OR=1.10,95%CI:0.38~3.13,P=0.86](圖7)。

        圖7. MMP-2在LSCC不同原發(fā)位置中的表達(dá)情況

        2.4發(fā)表偏倚通過繪制倒漏斗圖(圖8)發(fā)現(xiàn)所有研究呈倒漏斗狀排列,但并不完全對稱分布。不能排除存在發(fā)表偏倚的可能,需進一步做敏感度分析以驗證結(jié)論是否穩(wěn)健。

        圖8. LSCC組和對照組MMP-2表達(dá)差異的倒漏斗圖

        2.5敏感度分析本文研究的主要指標(biāo)是MMP-2在LSCC組和對照組的表達(dá)情況,次要指標(biāo)是MMP-2在LSCC淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及不同病理分級中的表達(dá)情況,均有不同程度的異質(zhì)性差異,因此有必要進行敏感度分析以檢驗這3項指標(biāo)的結(jié)論是否受異質(zhì)性差異的影響。通過逐篇剔除納入的文獻,發(fā)現(xiàn)這3項指標(biāo)的結(jié)論并沒有發(fā)生改變,差異仍然具有統(tǒng)計學(xué)意義[OR=8.88,95%CI:5.04~15.63,P<0.05;OR=4.07,95%CI:1.60~10.32,P<0.05;OR=3.04,95%CI:1.35~6.85,P<0.05]。同時通過Stata 13.1軟件進行敏感度分析驗證,結(jié)果顯示:納入的效應(yīng)值基本上在總效應(yīng)值的可信區(qū)間之內(nèi)(圖9~11),提示異質(zhì)性差異的存在并沒有影響這3項指標(biāo)結(jié)論的穩(wěn)定性,結(jié)果較穩(wěn)健。

        圖9. MMP-2在LSCC組和對照組表達(dá)差異的敏感度分析

        圖10. MMP-2在LSCC淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移中表達(dá)差異的敏感度分析

        圖11. MMP-2在不同病理分級中表達(dá)差異的敏感度分析

        3 討論

        Meta分析是整合分析眾多具有特定條件研究的一種方法,通過Meta分析可以將眾多小樣本研究整合在一起,達(dá)到擴大樣本含量增強檢驗效能的目的,因此在臨床研究和醫(yī)療決策中扮演重要的角色。本研究利用Meta分析研究MMP-2在LSCC中的表達(dá)及其臨床意義,為了驗證結(jié)論是否穩(wěn)健以及是否受到發(fā)表偏倚等影響,通過倒漏斗圖繪制驗證,逐篇剔除納入文獻以及利用Stata 13.1軟件進行敏感度驗證,均提示即使納入的相關(guān)文獻存在一定的異質(zhì)性以及發(fā)表偏倚,但結(jié)論仍然具有統(tǒng)計學(xué)意義,結(jié)果可靠。但是受到陰性結(jié)果不發(fā)表、文獻語種限制、樣本量、實驗方法和納入文獻條件限制等問題,不可避免地存在各種偏倚,在一定程度上也會影響Meta分析的結(jié)果,因此尚需增加樣本量及優(yōu)化方案以進一步驗證。

        浸潤、轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤區(qū)別于良性病變的最顯著特征,亦是造成臨床治療失敗的主要原因之一。MMPs超家族是一組高度同源的蛋白酶類,主要包括MMP-2和MMP-9,參與降解、破壞構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的Ⅳ型膠原,而Ⅳ型膠原則是構(gòu)成基底膜的重要組成成分[15]。MMPs超家族(包括MMP-2和MMP-9)以酶原形式分泌,在生理條件下參與胚胎發(fā)育、組織重塑等過程,但在某些病理條件下被金屬蛋白酶組織抑制因子2(TIMP-2)招募到細(xì)胞表面激活而參與炎癥以及腫瘤轉(zhuǎn)移的過程[16]?;啄な翘峁┘?xì)胞結(jié)構(gòu)支撐、營養(yǎng)等的重要結(jié)構(gòu),也是阻止腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的重要屏障,其病理性的降解可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞沿著基底膜缺口向間質(zhì)遷移、促進腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位脫落向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[17],因此與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。最近有研究[18]發(fā)現(xiàn):膽管癌細(xì)胞可通過下調(diào)miR-138的表達(dá)水平增強MMP-2和MMP-9的表達(dá),從而使其增殖遷移以及侵襲能力得到加強。而在人骨肉瘤細(xì)胞中,腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor, CTGF)通過下調(diào)miR-519d的表達(dá)水平增強了MMP的表達(dá),從而促進了腫瘤的轉(zhuǎn)移[19]。Xu等[20]采用葡萄糖轉(zhuǎn)運體-1(glucose transporter protein-1, Glut-1)反義核酸技術(shù)轉(zhuǎn)染LSCC細(xì)胞系Hep-2,發(fā)現(xiàn)與腫瘤惡性行為密切相關(guān)的Glut-1與MMP-2共表達(dá),且Glut-1參與調(diào)控MMP-2的表達(dá)。這提示在腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移過程中,調(diào)控MMP表達(dá)水平的基因及機制極為復(fù)雜,共同參與了對細(xì)胞外基質(zhì)的降解,從而促進了腫瘤細(xì)胞的生長和侵襲能力。

        本研究通過Meta分析發(fā)現(xiàn)MMP-2的表達(dá)在LSCC組織中增加。林雁等[10]分析了MMP-2在54例腫瘤組織、23例聲帶息肉組織和15例喉部正常組織的表達(dá)水平,發(fā)現(xiàn)MMP-2的表達(dá)在腫瘤組織的表達(dá)水平(72.2%)高于息肉組織(47.8%)和喉部正常組織(40%),推測MMP-2的表達(dá)與臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和浸潤深度存在相關(guān)性。這與Gou等[21]發(fā)現(xiàn)MMP-2在LSCC組織中高表達(dá),且MMP-2的高表達(dá)水平是導(dǎo)致LSCC患者預(yù)后較差的因素結(jié)果一致。另外本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)MMP-2表達(dá)水平在臨床分期、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分化等方面具有緊密的相關(guān)性,均提示MMP-2在LSCC的發(fā)生、發(fā)展、演化中具有重要意義。而MMP-2在LSCC不同原發(fā)部位差異并不顯著的原因,推測可能是由于不同原發(fā)部位的腫瘤產(chǎn)生MMP-2的量無顯著差別所致

        總之,本研究采用Meta分析發(fā)現(xiàn)MMP-2在LSCC組織中的表達(dá)增高,且與腫瘤進展、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分化存在相關(guān)性。MMP-2的表達(dá)水平改變可能在LSCC的早期診斷和治療等方面具有重要意義。隨著MMP-2的致癌機制以及在LSCC浸潤、轉(zhuǎn)移、預(yù)后中具體作用的深入研究,特異性地抑制MMP-2也可能成為一種潛在的LSCC靶向治療策略。

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