鄭立鋒 鄧壽斌 詹先強(qiáng) 吳潤生 林 健 姚 堯 翁順太＊

（1.福建省人獸共患病研究重點實驗室，福建省疾病預(yù)防控制中心 福州 350001；2.福州大北農(nóng)生物技術(shù)有限公司 福州 350014）

福建省某單位為完成一項課題，于2017年3月從上海某養(yǎng)殖單位購進(jìn)38只雄性日本大耳白兔（體重1.0～1.5 kg，準(zhǔn)備作預(yù)試驗用），經(jīng)過140 d飼養(yǎng)管理，在未進(jìn)行任何實驗處置的前提下，兔子相繼出現(xiàn)發(fā)病、死亡，每天1～3只，共死亡25只。通過現(xiàn)場調(diào)查和采樣檢查，掌握了飼養(yǎng)管理過程中存在的問題，確認(rèn)為一起管理原因引發(fā)的傳染性疾病。

1 癥狀及細(xì)菌學(xué)檢查

1.1 臨床癥狀 食欲減退，消瘦，反應(yīng)遲鈍，萎靡不振，雙眼無神，不活動，打噴嚏，鼻腔有分泌物，伴出血或黃色液體[1]。緊隨鼻炎卡他癥狀后即出現(xiàn)呼吸困難，籠內(nèi)亂竄、迅速死亡，病程僅2～3 d。死亡前四肢亂蹬并發(fā)出痛苦的尖叫聲，肛門有糞便排出。

1.2 解剖癥狀 鼻腔、氣管黏膜充血，鼻腔內(nèi)有漿液性分泌物。內(nèi)臟病變主要集中在肺臟，表面光滑、水腫，解剖時有液體流出，充血發(fā)紅，有的甚至發(fā)黑呈暗紅色[2]。肝臟病變較少見，只有2只患兔肝臟表面可見黃豆大小的膿瘡。

1.3 細(xì)菌學(xué)檢查[3]

1.3.1 儀器與試劑 革蘭氏染色液、血瓊脂平皿、DHL瓊脂平皿及微量生化鑒定管，購自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司；VITEK 2 GN卡（革蘭氏陰性菌鑒定卡）購自廣州江河生物科技有限公司；梅里埃VITEK 2 Compact全自動細(xì)菌鑒定儀。

1.3.2 分離培養(yǎng) 分別采集4只死亡兔的病變肺臟各一小塊，接種于血瓊脂平皿和DHL瓊脂平皿置于培養(yǎng)箱（36±1℃）中培養(yǎng)48 h，觀察平皿上菌落生長情況。對分離菌株進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢，并進(jìn)行生化實驗，同時按照VITEK 2 Compact自動鑒定儀GN鑒定卡的說明書進(jìn)行操作，上機(jī)鑒定。

1.3.3 初步鑒定 在血瓊脂平皿上均形成1 mm左右呈灰白色的菌落；DHL瓊脂平皿上均形成半透明2 mm左右的菌落。將分離自血瓊脂平皿的可疑菌株接種于DHL瓊脂平皿中，置于培養(yǎng)箱（36±1℃）培養(yǎng)48 h，生長良好。經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，均為革蘭氏陰性小桿菌。微量管生化反應(yīng)結(jié)果為：動力、尿素為陽性，葡萄糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫均為陰性。并將菌株使用VITEK 2 GN卡經(jīng)梅里埃VITEK 2 Compact全自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)鑒定為支氣管鮑特桿菌，概率為99%。

1.4 診斷結(jié)果 綜合臨床癥狀、病理剖檢及細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果，可診斷為支氣管鮑特桿菌病。

2 臨床干預(yù)

2.1 發(fā)病初期 出現(xiàn)卡他癥狀時，用卡那霉素 0.2～0.4 g/只·次，肌肉注射，每日2次，效果不佳，仍陸續(xù)出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。后使用卡那霉素（劑量、方法同上）和口服酞酰磺胺噻唑 （按每千克體重用0.2～0.3 g）聯(lián)合干預(yù)，2次/d，連用 5～7 d[4]，病情逐漸得以控制。

2.2 干預(yù)期間 每天用0.2%過氧乙酸溶液對各區(qū)域設(shè)施進(jìn)行噴霧消毒。

3 分析與討論

支氣管鮑特桿菌為一種革蘭氏陰性小桿菌，有鞭毛、能運(yùn)動，不形成芽胞，主要寄居于大鼠、豚鼠和家兔的上呼吸道。該病多發(fā)生在氣候多變的春秋兩季[5]，主要通過空氣傳播經(jīng)呼吸道而感染，帶菌兔和患兔鼻腔分泌物中的病菌隨咳嗽、噴嚏飛沫污染飼料、飲水、籠舍和空氣，傳染給健康兔[6]。當(dāng)機(jī)體受到各種因素如氣候驟變、感冒、寄生蟲病等的影響而降低機(jī)體的抵抗力，或其他誘因如灰塵和強(qiáng)烈性氣味的影響，使上呼吸道黏膜的保護(hù)屏障受到破壞，易導(dǎo)致發(fā)病。

實驗兔于7月底、8月初發(fā)病，與發(fā)病季節(jié)吻合。發(fā)病時已經(jīng)成年，與大多文獻(xiàn)所報道的“幼兔發(fā)病率高，成年兔較少發(fā)病”有較大出入[7]。引發(fā)疾病的主要原因如下。

1）實驗室體積不大（3 m×4 m×2.6 m），放置 2 臺共12個籠位的兔平板架，平均每籠飼養(yǎng)3只，飼養(yǎng)密度過大。且回風(fēng)管過濾網(wǎng)上沾滿蜘蛛網(wǎng)、兔毛和黑色粉塵，室內(nèi)通風(fēng)換氣不良，氨濃度明顯超標(biāo)，是引發(fā)該病的主要原因。

2）工作人員沒有經(jīng)過操作技能的專業(yè)培訓(xùn)，對設(shè)施溫濕度的控制、通風(fēng)換氣的控制、實驗動物的生活習(xí)性了解不多，專業(yè)理論知識、操作技能和管理經(jīng)驗欠缺。當(dāng)早期個別家兔出現(xiàn)鼻炎癥狀時得不到足夠重視，任病情發(fā)展和蔓延，導(dǎo)致最終暴發(fā)流行。

3）實驗室雖取得使用許可證，但衛(wèi)生現(xiàn)狀很差，缺乏規(guī)范的衛(wèi)生清理和環(huán)境消毒。通過了解，原來是沒有經(jīng)過正規(guī)培訓(xùn)的在校學(xué)生負(fù)責(zé)日常管理。發(fā)病時正值畢業(yè)季，參與管理的兩批學(xué)生沒有做好工作交接、沒有經(jīng)過內(nèi)部專業(yè)培訓(xùn)就匆促上崗。

4）實驗兔從不具備生產(chǎn)許可證的單位購進(jìn)，也是一種違規(guī)做法。國家標(biāo)準(zhǔn)中該病雖然不列為等級家兔應(yīng)排除的病原菌，但它是以隱性感染狀態(tài)長期存在家兔體內(nèi)，一旦外界環(huán)境改變、手術(shù)實驗等因素的刺激，很可能顯性蔓延，對兔群造成毀滅性的打擊[8]。

綜上述，該病例完全是由于管理不善引發(fā)的一起人為事故。如果能按既定管理制度和操作規(guī)程來規(guī)范管理，該起事故當(dāng)可防、可控，應(yīng)引以為鑒。

4 預(yù)防措施

1）加強(qiáng)飼養(yǎng)管理。從業(yè)人員（含科研人員、管理技術(shù)人員、飼養(yǎng)人員）應(yīng)經(jīng)過必要的專業(yè)理論學(xué)習(xí)和實踐操作技能的培訓(xùn)，持證上崗。設(shè)施應(yīng)保持恒溫恒濕，日溫差變化小于4℃，每天注意觀察實驗兔精神狀態(tài)，發(fā)現(xiàn)異常立即報告主管技術(shù)人員?；纪脩?yīng)隔離、觀察、治療，查明病因，同時加強(qiáng)衛(wèi)生消毒，防止疫情蔓延擴(kuò)散。

2）加強(qiáng)設(shè)施內(nèi)部的通風(fēng)換氣，平衡進(jìn)風(fēng)、排風(fēng)時間，避免污濁空氣滯留，保證通風(fēng)良好。該單位普通級實驗用兔設(shè)施的氣流組織形式是上送側(cè)下排，提示這種氣流組織形式很可能不適合普通級兔的生物學(xué)特性和生長、生活環(huán)境。減少室內(nèi)各種有害氣體對家兔生長發(fā)育的影響，應(yīng)定期清理動物的排泄物、保持適當(dāng)?shù)膿Q氣次數(shù)，這樣才能有效降低氨濃度，有利于家兔正常的生長發(fā)育[9]。

3）定期進(jìn)行衛(wèi)生消毒。制定實驗室各部位、籠架具、室內(nèi)空氣等定期衛(wèi)生消毒制度并嚴(yán)格執(zhí)行。及時清除糞便、尿垢等污物，保持實驗室、籠架具整潔，增強(qiáng)動物抵抗力。及時更換、清洗、消毒進(jìn)風(fēng)、回風(fēng)管過濾網(wǎng)。

做好衛(wèi)生消毒工作，強(qiáng)化無菌觀念是開展標(biāo)準(zhǔn)化實驗動物工作的根本保證。工作人員須更衣、戴帽、戴口罩、戴手套、更鞋方能進(jìn)入實驗室，每天工作完畢，要對實驗室的地面、工作臺面等部位進(jìn)行全面消毒，還要定期對設(shè)施內(nèi)的空氣進(jìn)行噴霧消毒。最好采用獨立的飲水方式。

4）嚴(yán)格按國家《實驗動物許可證管理辦法（試行）》[10]的規(guī)定開展實驗動物工作。其中第六條第一款明確規(guī)定 “使用的實驗動物必須來自持有生產(chǎn)許可證的單位或個人，質(zhì)量合格”，這將直接影響科研工作的成敗，是先決條件。否則隨意從無生產(chǎn)許可證的單位或個人去購買，實驗動物的質(zhì)量將無法保證。同時要索取實驗動物的生產(chǎn)許可證、質(zhì)量合格證等相關(guān)證明材料。

5）對于中等以上實驗動物，剛引進(jìn)時應(yīng)當(dāng)做好隔離檢疫工作，且檢疫期不少于14 d，經(jīng)細(xì)菌檢查為陰性方可繼續(xù)使用。這樣可有效排除某些潛在隱性疾病對動物的影響。將所有患病動物進(jìn)行隔離、觀察，禁止與健康動物混居一籠或混居一室[11]，以免造成交叉感染、疫情蔓延。及時找明原因、對癥治療。

6）該病例中經(jīng)藥物治療而好轉(zhuǎn)的兔，雖幸存下來，但已失去應(yīng)有的利用價值。用它們來繼續(xù)進(jìn)行科研實驗，很可能會產(chǎn)生藥物的拮抗作用，導(dǎo)致實驗失敗。

[1]王偉,朱瑞良,李新蒼,等.兔支氣管敗血波氏桿菌的分離鑒定及其免疫原性檢測[J].中國獸醫(yī)學(xué)報,2008(8):897-900.

[2]余樹民,鄧俊良.獺兔金黃色葡萄球菌和波氏桿菌混合感染的診治[J].四川畜牧獸醫(yī),2002,29(B05):9-10.

[3]國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB/T14926.6-2001實驗動物 支氣管鮑特桿菌檢測方法[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2002.

[4]黃引賢,李乃津.兔波氏桿菌病的防治試驗初報[J].北京實驗動物科學(xué)與管理,1994(1):21.

[5]范志宇,惲?xí)r鋒,王芳,等.兔支氣管敗血波氏桿菌不同感染途徑研究[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2008(18):235-237.

[6]方喜業(yè).醫(yī)學(xué)實驗動物學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1995:48-49.

[7]蔣金書.兔病學(xué)[M].北京:北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1991:46-48.

[8]鄭立鋒,高昔英,姚堯,等.剖腹凈化建立清潔級獺兔核心種子群研究[J].醫(yī)學(xué)動物防制,2017,33(5):518-520.

[9]翁順太,高昔英,徐海濱,等.雙致病菌混合感染引起家兔發(fā)病的調(diào)查分析[J].福建畜牧獸醫(yī),2017,39(3):41-43.

[10]科學(xué)技術(shù)部,衛(wèi)生部,教育部,農(nóng)業(yè)部,國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫局,國家中醫(yī)藥管理局,中國人民解放軍總后勤部衛(wèi)生部.實驗動物許可證管理辦法 （試行）國科發(fā)財字［2001］545 號[EB/OL].(2001-12-05)[2017-09-13].http://www.lascn.net/Item/12630.aspx.

[11]汪洋,趙德明.一起兔支氣管敗血波氏桿菌病的診治[J].中國畜牧獸醫(yī),2008,35(8):93-94.