亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        Lipofectamine2000降低 HeLa細(xì)胞系中DNMT1的表達(dá)

        2018-03-29 05:41:45程易塵吳曉明賈舒婷
        關(guān)鍵詞:焦慮癥室溫甲基化

        趙 丹,程易塵,吳曉明,羅 瑛,賈舒婷

        (昆明理工大學(xué) 醫(yī)學(xué)院,云南 昆明 650500)

        DNA甲基化是一種非常重要的表觀遺傳修飾,在基因的表達(dá)調(diào)控、基因組的穩(wěn)定性和發(fā)育過程中都發(fā)揮著重要的作用[1]。DNA甲基化的維持由DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶家族成員DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)催化完成。DNA甲基化水平的改變,通常與DNMT1密切相關(guān)[3- 4]。而Lipofectamine2000是一種常用的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑,廣泛地應(yīng)用于特定基因的表達(dá)和敲低對細(xì)胞影響的研究。而陽離子脂質(zhì)體對細(xì)胞有一定的毒性作用[5]。轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000會影響細(xì)胞中DNMT1的表達(dá),Lipofectamine2000對細(xì)胞的毒性作用可能是通過DNMT1實現(xiàn)的。因此本研究通對DNMT1在Lipofectamine2000處理Hela和395- 9B- 1(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)細(xì)胞不同時間后的表達(dá)情況進(jìn)行檢測,并探討Lipofectamine2000對細(xì)胞的毒性作用。

        1 材料與方法

        1.1 材料:HeLa細(xì)胞、395- 9B- 1細(xì)胞、胎牛血清和胰蛋白酶(Amresco公司);DMEM (Life Technologies公司);Lipofectamine2000(Invitrogen公司);5Aza(5-氮雜-2’-脫氧胞苷,Sigma公司);DNMT1和beta-actin抗體(Santa Cruz公司)。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理:將細(xì)胞置于10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中,37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HeLa和395- 9B- 1細(xì)胞,細(xì)胞覆蓋率為90%時傳代,達(dá)到70%~80%用Lipo2000處理。具體步驟為:將20 μL Lipofectamine2000加入3 mL OPti-DMEM培養(yǎng)基中室溫孵育25 min。吸除細(xì)胞培養(yǎng)液并用PBS清洗。將上述混合液加入培養(yǎng)皿中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。6 h后更換DMEM培養(yǎng)基終止處理,分別于處理后24、48及72 h和7 d收集細(xì)胞沉淀, -80 ℃保存?zhèn)溆谩?Aza處理細(xì)胞作為陽性對照。

        1.2.2 RT-RCR檢測DNMT1的mRNA表達(dá):收集細(xì)胞沉淀后,用Trizol提取總RNA,以O(shè)ligo-d(T)引物GoScriptTMReverse Transcription System試劑盒(Promega公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄得到CDNA。實驗方法參照產(chǎn)品說明書。引物序列,DNMT1 正向引物5′-CCGTGGCTACGAGGAGAAC-3′,反向引物5′-TTGGGTTTCCGTTTAGTGGGG-3′;beta-actin正向引物5′-AGAGGGAAATCGTGCGTGAC-3′,反向引物5′-CAATAGTG ATGACCTGGCCGT-3′。

        1.2.3 檢測DNMT1蛋白表達(dá):取適量上述細(xì)胞沉淀提取蛋白,每孔加入15 μg蛋白進(jìn)行SDS-PAGE凝膠電泳分離蛋白(電泳條件:恒壓140 V 1.5 h)。再用300 V、180 mA濕轉(zhuǎn)3.5 h至硝酸纖維素膜上,然后用5%脫脂奶粉室溫封閉1 h。再加入相應(yīng)一抗室溫反應(yīng)3 h,用TBST緩沖液洗滌3次,每次5 min,后加入相應(yīng)二抗,室溫反應(yīng)2 h,用TBST洗滌6次,每次5 min。最后用顯影液處理1 min后用全自動洗片機進(jìn)行顯影后的成像。

        2 結(jié)果

        2.1 Lipofectamine2000處理影響HeLa細(xì)胞的狀態(tài):Lipofectamine2000處理后24 h細(xì)胞變長,至72 h這一現(xiàn)象更加明顯,并且細(xì)胞外膜有向外延伸的狀態(tài),而7 d后細(xì)胞形狀基本恢復(fù)到原先狀態(tài)(圖1)。

        2.2 HeLa細(xì)胞中DNMT1的mRNA表達(dá)量:Lipofectamine2000處理HeLa細(xì)胞48 h后,DNMT1 mRNA降低;處理后7 d,DNMT1 mRNA明顯升高(圖2)。

        2.3 Lipofectamine2000處理影響HeLa細(xì)胞中DNMT1蛋白的表達(dá):經(jīng)Lipofectamine2000處理HeLa細(xì)胞48 h后DNMT1蛋白水平的表達(dá)顯著降低,72 h后有回升的趨勢(圖3)。

        2.4 Lipo2000處理影響395- 9B- 1細(xì)胞中DNMT1的表達(dá):用Lipo2000處理395- 9B- 1細(xì)胞后5 d,細(xì)胞中DNMT1蛋白有持續(xù)升高的趨勢(圖4)。

        圖1 HeLa細(xì)胞形態(tài)圖Fig 1 The morphology of HeLa cells

        *P<0.05 compared with control圖2 HeLa細(xì)胞中DNMT1的mRNA表達(dá)水平Fig 2 mRNA expression level of DNMT1 in HeLa

        圖4 395- 9B- 1細(xì)胞中DNMT1蛋白表達(dá)變化Fig 4 The protein expression of DNMT1 in 395- 9B- 1 cells

        A.Western blot results; B.quantitative chart of Western blot;*P<0.05 compared with control;△P<0.05 compared with 48 hours

        3 討論

        HeLa細(xì)胞是實驗中最常用的一種人源模式細(xì)胞,廣泛的應(yīng)用于各種研究。Lipofectamine2000對細(xì)胞是有一定毒性的,而其具體的原因目前還不是很清楚。本研究發(fā)現(xiàn)這一毒性在Hela細(xì)胞中可能是通過對DNMT1蛋白水平的短期抑制改變細(xì)胞的表觀遺傳修飾來實現(xiàn)。小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的實驗結(jié)果表明,Lipofectamine2000對細(xì)胞DNNT1表達(dá)的影響可能具有普遍性,為Lipofectamine2000的細(xì)胞毒性研究提供一個新的視角。

        [1] Lorincz MC, Dickerson DR, Schmitt M,etal. Intragenic DNA methylation alters chromatin structure and elongation efficiency in mammalian cells[J]. Nat Struct Mol Biol, 2004, 11: 1068- 1075.

        [2] Goll MG, Bestor TH. Eukaryotic cytosine methyltrans-ferases[J]. Annu Rev Biochem, 2005, 74:481- 514.

        [3] Rhee I, Bachman KE, Park BH,etal. DNMT1 and DNMT3b cooperate to silence genes in human cancer cells[J]. Nature, 2002, 416: 552- 556.

        [4] Zhi D, Zhang S, Cui S,etal. The headgroup evolution of cationic lipids for gene delivery[J]. Bioconjugate Chem, 2013, 24: 487- 519.

        新聞點擊

        出汗過多影響心理健康

        據(jù)美國WebMD醫(yī)學(xué)新聞網(wǎng)(2016- 12- 14)報道,一項新研究指出,多汗癥(出汗過多癥狀)伴發(fā)有焦慮癥與憂郁癥的比例似乎也比一般人高一些。

        研究發(fā)現(xiàn),多汗癥篩檢陽性的人罹患焦慮癥與憂郁癥的概率分別為21%和27%,而其他患者檢出率分別為7.5%和10%以下。

        這個研究結(jié)果并未證明多汗癥會導(dǎo)致哪些心理健康問題,因此,這個結(jié)果并不代表將多汗癥控制得較好會舒緩人們憂郁癥或焦慮癥的情況。但皮膚科醫(yī)生應(yīng)該了解,這些患者有焦慮癥或憂郁癥的概率較高。

        然而,有多汗癥的人通常會有自我意識避免社交活動,甚至像在課堂上舉手這些平凡的事情。

        研究人員建議,多汗癥患者應(yīng)該與醫(yī)生討論心理健康的問題。

        該研究結(jié)果刊登在2016年12月《美國皮膚科學(xué)會雜志》。

        低糖飲食對代謝有益

        據(jù)美國WebMD醫(yī)學(xué)新聞網(wǎng)(2016- 12- 09)報道,有篇小型研究指出,吃低糖餐會對女性的代謝健康有益,若吃高糖餐則不會有這種改變。

        研究人員發(fā)現(xiàn),運動時間對代謝的益處起了很大的作用。

        這篇研究顯示,當(dāng)人們24 h內(nèi)的三餐只含有30%的碳水化合物時,他們的餐后胰島素抵抗以及胰島素含量會降低30%。

        當(dāng)人們在24 h內(nèi)的三餐含有60%碳水化合物,胰島素抵抗或胰島素含量就沒有降低這么多。

        正常來說,運動被認(rèn)為有助于降低胰島素抵抗,降低血糖值;但這篇研究結(jié)果顯示,在吃東西以前運動確實增加女性夜間血糖值。

        Borer解釋,運動時需要能量,誘發(fā)激素作用,讓肝糖元釋放出來。身體大部分出現(xiàn)組織胰島素抵抗,允許大腦以及肌肉使用多余的糖類。如果組織沒有使用完所有的糖類,血糖就會維持在很高的狀態(tài)。

        然而,吃飯后運動消耗的熱量就是餐點所提供的能量,而不是由肝臟提供;建議在吃完飯后40 min內(nèi)運動。

        Borer指出,這篇研究的對象只是健康的女性,而且研究是短期的,不能評價低糖飲食以及運動是如何影響某些糖尿病前期或2型糖尿病患者。

        猜你喜歡
        焦慮癥室溫甲基化
        超導(dǎo)追求
        躲進(jìn)“焦慮癥”的劉太太
        中老年保健(2021年4期)2021-08-22 07:09:30
        室溫采集裝置及供熱二級管網(wǎng)智能化改造
        煤氣與熱力(2021年2期)2021-03-19 08:55:50
        老年焦慮癥應(yīng)用生物反饋治療的效果觀察
        一種在室溫合成具有寬帶隙CdS的簡單方法
        甲氧基MQ樹脂補強縮合型室溫硫化硅橡膠的研究
        鼻咽癌組織中SYK基因啟動子區(qū)的甲基化分析
        胃癌DNA甲基化研究進(jìn)展
        慢性疲勞綜合征與抑郁癥焦慮癥相關(guān)性研究進(jìn)展
        基因組DNA甲基化及組蛋白甲基化
        遺傳(2014年3期)2014-02-28 20:58:49
        青草国产精品久久久久久| 在线观看国产视频你懂得| 人妻少妇-嫩草影院| 国内精品人妻无码久久久影院导航| 色婷婷七月| 色老汉亚洲av影院天天精品| 狼狼色丁香久久女婷婷综合| 久久99国产精品久久| 丰满人妻被中出中文字幕| 亚洲精品中文字幕观看| 麻豆国产精品久久天堂| 国产精品一区二区av麻豆| 国产肉丝袜在线观看| 亚洲成a人片在线观看中文!!! | 亚洲中文字幕第一页在线| 久久久2019精品视频中文字幕| 国产极品大奶在线视频| 熟女少妇精品一区二区| 久久久窝窝午夜精品| 久久综合激激的五月天| 后入丝袜美腿在线观看| 国产真人性做爰久久网站| 免费无码中文字幕A级毛片| 精品女人一区二区三区| 无码人妻一区二区三区免费看| 精品成人乱色一区二区| 国产AV秘 无码一区二区三区 | 国产成人精品日本亚洲11| 久久亚洲午夜牛牛影视| 精品嫩模福利一区二区蜜臀| 丰满少妇高潮惨叫久久久一| 国产高中生在线| 亚洲一区二区三区av无| 女人张开腿让男人桶爽| 国产亚洲av手机在线观看| 亚洲免费无毛av一区二区三区 | 精品国产亚洲av麻豆尤物| 亚洲97成人在线视频| 欧美xxxx色视频在线观看| 国产清品夜色一区二区三区不卡| 一区二区亚洲精品国产精|