羅丹，陳勇，陳清，萬十千

臨床常用的治療CHB患者的抗病毒藥物為α-干擾素和核苷（酸）類[1]。很多指南已將α-干擾素作為治療CHB患者的一線藥物推薦[2，3]，停藥后持續(xù)性病毒學(xué)應(yīng)答率（SVR）較高[4]。近年來，隨著免疫學(xué)的不斷發(fā)展，不斷豐富了對CHB患者整體免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)失衡理論的認(rèn)識[5]。本研究應(yīng)用聚乙二醇干擾素α-2b治療184例CHB患者，觀察了療效及其外周血T淋巴細(xì)胞亞群和血清細(xì)胞因子水平的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月～2016年1月我科收治的CHB患者184例，男性101例，女性83例；年齡18～68歲，平均年齡（45.31±9.24）歲。病程 2～32年，平均病程（18.64±5.34）年。符合2010年發(fā)布的《慢性乙型肝炎防治指南》[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)，血清HBeAg陽性91例，患者在半年內(nèi)未接受過免疫調(diào)節(jié)劑治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肝硬化或肝癌；②嚴(yán)重的腎功能不全；③孕產(chǎn)婦或哺乳期孕婦；④伴有原發(fā)性精神障礙或癡呆。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)同意?；颊呓o出知情同意書。

1.2 治療方法 將患者分成兩組，分別給予恩替卡韋（中美上海施貴寶制藥有限公司）0.5mg口服，1次/d或者在恩替卡韋治療的基礎(chǔ)上加用聚乙二醇干擾素α-2b（佩樂能，默沙東公司，批準(zhǔn)文號：S20140 016）80 μg皮下注射，1次/w。干擾素治療48 w，在停藥后隨訪24 w。

1.3 相關(guān)指標(biāo)檢測 使用美國 Coulter公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群；采用放射免疫法檢測血清IL-6、INF-ɑ、IL-4（北京福瑞潤康生物技術(shù)有限公司）；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清IL-17、TGF-β1和HBV標(biāo)記物（上海恒遠(yuǎn)生物有限公司）；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA、核轉(zhuǎn)錄因子 RORγt、Foxp3、IL-17mRNA；使用DIRUI-CS400b全自動生化分析儀檢測肝功能指標(biāo)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清HBeAg和HBV DNA變化比較 在停藥隨訪 24 w，聯(lián)合組與恩替卡韋組血清HBV DNA陰轉(zhuǎn)率分別為86.96%（80/92）和84.78%（78/92）（P＞0.05）；聯(lián)合組血清 HBeAg陰轉(zhuǎn)率為 28.89%（13/45），與恩替卡韋組的15.22%（7/46）比，無顯著性差異（P＞0.05）。

2.2 兩組血生化指標(biāo)比較 治療前，兩組患者血清肝功能指標(biāo)比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組患者血清TBIL、ALB、PTA水平與恩替卡韋組比較無顯著性差異，ALT水平顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05，表1）。

2.3 兩組治療前后外周血T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞變化比較 治療前，兩組患者外周血CD3+、CD4+、CD8+、NK細(xì)胞和CD4+/CD8+比值比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組患者 CD3+、CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值顯著高于恩替卡韋組（P＜0.05），CD8+細(xì)胞百分比顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05），兩組患者NK細(xì)胞百分比無顯著性差異（P＞0.05，表2）。

表1 兩組血生化指標(biāo)（±s）比較

表1 兩組血生化指標(biāo)（±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數(shù) TBIL（μmol/L） ALT（U/L） ALB（g/L） PTA（%）聯(lián)合組 治療前 92 22.6±11.1 145.4±23.6 117.5±18.4 55.9±11.7治療后 92 21.61±7.9 34.6±11.6① 40.7±8.4 79.4±15.8恩替卡韋 治療前 92 21.6±10.8 143.61±24.3 115.9±16.6 54.8±10.5治療后 92 19.1±12.6 64.6±20.5 41.5±11.2 81.7±12.4

表2 兩組T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞(±s）比較

表2 兩組T細(xì)胞亞群和NK細(xì)胞(±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數(shù)CD3+（%）CD4+（%）CD8+（%）聯(lián)合組 治療前 92 64.2±12.7 32.1±5.6 36.5±9.7治療后 92 75.6±14.5① 42.7±10.3① 29.3±7.3①恩替卡韋 治療前 92 63.6±11.4 31.6±5.0 37.8±10.2治療后 92 66.8±14.4 36.7±8.5 34.8±8.5 NK（%）17.6±5.7 18.6±6.3 17.5±5.1 18.1±6.2 CD4+/CD8+比值1.9±0.5 1.4±0.6①1.1±0.4 1.0±0.5

2.4 兩組血清細(xì)胞因子水平比較 治療前，兩組血清IL-6、IL-17、IL-4、INF-ɑ 和 TGF-β1 水平比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組血清 IL-6和INF-ɑ水平顯著高于恩替卡韋組（P＜0.05），IL-17和IL-4水平顯著低于恩替卡韋（P＜0.05），兩組血清TGF-β1水平比較無顯著性差異（P＞0.05，表3）。

2.5 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比較 治療前，兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平比較無顯著性差異（P＞0.05）；治療后，聯(lián)合組血清RORγt水平顯著低于恩替卡韋組（P＜0.05），而Foxp3和IL-17 mRNA水平與恩替卡韋組比，無顯著性差異（P＞0.05，表4）。

表3 兩組血清細(xì)胞因子水平（pg/ml，±s）比較

表3 兩組血清細(xì)胞因子水平（pg/ml，±s）比較

與恩替卡韋組比，①P＜0.05

例數(shù) IL-6 IL-17 IL-4聯(lián)合組 治療前 92 2.1±0.3 4.2±1.2 5.6±1.5治療后 92 6.8±1.2① 0.7±0.3① 1.4±0.5①恩替卡韋 治療前 92 2.1±0.2 4.3±1.3 5.7±1.6治療后 92 3.5±0.8 2.8±0.9 3.8±1.5 INF-ɑ 0.8±0.3 4.0±1.3①0.9±0.3 2.6±0.9 TGF-β1 25.1±4.3 25.6±5.0 25.2±4.2 25.4±4.8

表4 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比較

表4 兩組血清Foxp3、IL-17和RORγt mRNA水平（±s）比較

例數(shù) Foxp3 IL-17mRNA RORγt聯(lián)合組 治療前 92 4.32±1.02 0.12±0.10 1.76±0.54治療后 92 4.52±1.85 0.10±0.01 0.86±0.31①恩替卡韋 治療前 92 4.31±0.98 0.10±0.09 1.79±0.51治療后 92 4.43±1.65 0.09±0.01 1.56±0.43

3 討論

目前，全球CHB發(fā)病率高達(dá)3.5億以上，并且據(jù)相關(guān)資料統(tǒng)計，在一些地區(qū)CHB發(fā)病率高居不下，嚴(yán)重威脅患者的生命健康。CHB治療的關(guān)鍵是通過長期以及有效地抑制HBV DNA復(fù)制，從而達(dá)到治療疾病的目的。臨床上主要使用的抗病毒藥物為核苷/核苷酸類藥物和α-干擾素，而不少文獻(xiàn)結(jié)果證明在合適的患者，干擾素治療的臨床療效更佳[8]，而本文研究結(jié)果也證實了這一觀點。

干擾素是上個世紀(jì)90年代初被批準(zhǔn)開始在臨床上使用的一種藥物，其能在治療病毒性肝炎時發(fā)揮抗病毒以及提高對免疫調(diào)控的作用。干擾素具有抗病毒作用的主要機(jī)制是其能與細(xì)胞膜上的干擾素受體相結(jié)合，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生多種抗病毒蛋白，起到抑制病毒核酸表達(dá)，抑制病毒蛋白合成的作用，達(dá)到控制病毒復(fù)制的目的[9，10]。除此之外，研究發(fā)現(xiàn)干擾素還能增強(qiáng)細(xì)胞膜上人類白細(xì)胞抗原的表達(dá)，使細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞易于識別和殺傷HBV感染的靶細(xì)胞，增強(qiáng)免疫細(xì)胞活性[11，12]。聚乙二醇干擾素α-2b由單聚乙二醇化的重組人干擾素α-2b組成，能抑制病毒的復(fù)制、抑制細(xì)胞增殖以及增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活動、增強(qiáng)淋巴細(xì)胞對靶細(xì)胞的特異性細(xì)胞毒性等一系列免疫調(diào)控活動[13]。

近些年，隨著免疫學(xué)的發(fā)展，整體免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)在CHB疾病進(jìn)展中的作用逐步得到肯定，并逐漸得到完善[14]。有文獻(xiàn)研究表明，在CHB患者外周血Th1/Th2細(xì)胞明顯處于失衡狀態(tài)，并且隨著Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)和對其進(jìn)行深入研究，發(fā)現(xiàn)其與各個T細(xì)胞亞群相互之間有些精細(xì)而復(fù)雜的平衡關(guān)系，并且構(gòu)成了一個免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)[15]。也有相關(guān)研究表明，在CHB患者，外周血Th17細(xì)胞和血清細(xì)胞因子水平明顯高于正常水平，并且Th17細(xì)胞百分比與肝臟炎癥程度或肝纖維化程度存在著密切的相關(guān)性[16，17]。為此，本研究分析了聚乙二醇干擾素α-2b對CHB患者外周血CD4+T淋巴細(xì)胞整體免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的影響。

諸多文獻(xiàn)表明聚乙二醇干擾素對CHB患者具有較高的臨床療效，對病毒抑制的時間長，且安全性高[18，19]。在本研究結(jié)果中，治療后聯(lián)合組外周血CD3+、CD4+細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+細(xì)胞比值明顯高于恩替卡韋組（P＜0.05），CD8+細(xì)胞百分比明顯低于恩替卡韋組（P＜0.05），證明聚乙二醇干擾素α-2b能提高CHB患者的免疫力，同時調(diào)節(jié)了患者免疫失調(diào)狀態(tài)。并且，經(jīng)過治療后患者血清細(xì)胞因子水平明顯下降，RORγt降低，從而改善了Th1和Th17細(xì)胞紊亂狀況，從多個方面控制了整體免疫調(diào)控。

綜上所述，聚乙二醇干擾素α-2b能通過調(diào)控細(xì)胞因子表達(dá)水平，從多個環(huán)節(jié)對CHB患者的免疫狀態(tài)實現(xiàn)良好的調(diào)控，因而對CHB患者具有良好的臨床運用價值。

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