焦大敏，常瓊潔，2，李 萍*

(1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，吉林 長(zhǎng)春130033；2.鄭州人民醫(yī)院 風(fēng)濕免疫科，河南 鄭州450053)

強(qiáng)直性脊柱炎(AS)是一種長(zhǎng)期慢性炎性刺激引起的脊柱進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎。炎癥及炎癥因子反應(yīng)可導(dǎo)致脊柱活動(dòng)受限及骨骼結(jié)構(gòu)的損傷[1]。白介素-28A(interleukin-28A，IL-28A)屬于Ⅲ型干擾素，通過(guò)激活細(xì)胞信號(hào)通路發(fā)揮抗病毒、抗增殖、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用[2-4]。近年研究表明，Ⅲ型干擾素與諸多風(fēng)濕性疾病[系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、系統(tǒng)性硬化癥(SSc)和類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)]的發(fā)病有一定的相關(guān)性[5-7]，但是IL-28A是否參與了AS的發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。本研究通過(guò)檢測(cè)AS患者血清IL-28A的表達(dá)水平及其與疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性，探討IL-28A在AS治療前后的變化及意義，為進(jìn)一步深入了解AS發(fā)病機(jī)制、開(kāi)發(fā)AS治療有效藥物提供依據(jù)。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

本研究收集了2015年9月至2016年9月期間在吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院風(fēng)濕免疫科住院的AS患者40例，年齡21-42歲，中位數(shù)為26歲，其中男性37例，女性3例，病程6個(gè)月-8年。所有入組AS患者均符合1984年修訂的AS紐約標(biāo)準(zhǔn)[8]，排除感染、糖尿病、心力衰竭、腎功能衰竭、肝炎、肝衰竭、惡性疾病以及其他活動(dòng)性炎性疾病(例如RA、克羅恩病、SLE、SSc)，入組前1個(gè)月內(nèi)未使用改善病情抗風(fēng)濕藥物(DMARDs)、糖皮質(zhì)激素等可影響免疫系統(tǒng)的藥物，并且入組前均處于疾病活動(dòng)期，即Bath AS疾病活動(dòng)指數(shù)(BASDAI)≥4[9]或使用C-反應(yīng)蛋白(CRP)的AS疾病活動(dòng)評(píng)分(ASDAS-CRP)≥2.1[10]。所有患者均給予1種DMARDs(包括傳統(tǒng)DMARDs或生物DMARDs)聯(lián)合1種非甾體類(lèi)抗炎藥物(NSAIDs)(包括塞來(lái)昔布，雙氯芬酸和依托考昔)治療，共隨訪6個(gè)月。在治療前和治療1、3和6個(gè)月后分別進(jìn)行疾病活動(dòng)指標(biāo)采集。同時(shí)選取本院同期體檢中心40例年齡和性別匹配的健康志愿者作為健康對(duì)照組(HC)，年齡22-44歲，平均(24.8±5.7)歲，其中男性37例，女性3例。此項(xiàng)研究獲得吉林大學(xué)中日聯(lián)合醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有受試者均簽署了知情同意書(shū)。

1.2實(shí)驗(yàn)室檢查

所有受試者于開(kāi)始治療前、治療后1、3和6個(gè)月4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別采集空腹血，CRP采用乳膠增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定， 紅細(xì)胞沉降率(ESR)采用魏氏法測(cè)定。低溫離心后得到的血清存于-80℃冰箱待檢，通過(guò)購(gòu)買(mǎi)的IL-28A(GenWay Biotech，Inc，GWB-SKR146)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)試劑盒按說(shuō)明進(jìn)行AS患者血清IL-28A測(cè)定。

1.3疾病活動(dòng)度評(píng)分

BASDAI：由5個(gè)項(xiàng)目的平均分組成：A疲乏、B脊柱痛、C關(guān)節(jié)痛、D肌腱端炎、E脊柱炎癥=0.5×(晨僵程度+晨僵時(shí)間)，每個(gè)項(xiàng)目得分為患者近一周疾病活動(dòng)的總體情況的自我評(píng)價(jià)的VAS(0-10)評(píng)分。BASDAI=0.2×(A+B+C+D+E)[9]。

ASDAS-CRP=0.122×腰背痛+0.061×晨僵持續(xù)時(shí)間+0.119×患者的總體評(píng)價(jià)+0.210×血沉的平方根+0.383×(C反應(yīng)蛋白+1)的自然對(duì)數(shù)[10]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1HC和AS患者治療前后疾病活動(dòng)指標(biāo)和血清IL-28A水平

如表1所示，AS患者治療前和治療后血清IL-28A水平顯著高于HC(P<0.01),且治療后血清IL-28A明顯高于治療前(P<0.01)。比較治療后1個(gè)月和3個(gè)月、1個(gè)月與6個(gè)月、3個(gè)月與6個(gè)月的結(jié)果發(fā)現(xiàn)， 血清IL-28A水平在治療后3個(gè)時(shí)間點(diǎn)間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，表明AS患者血清IL-28A水平在治療后1個(gè)月已達(dá)穩(wěn)定。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)AS患者ESR、CRP在治療1個(gè)月后顯著下降(P<0.01)，之后趨于穩(wěn)定，ASDAS-CRP在治療1、3個(gè)月時(shí)持續(xù)下降，6個(gè)月時(shí)趨于穩(wěn)定，而B(niǎo)ASDAI在6個(gè)月治療期間持續(xù)下降。

表1 HC和AS患者治療前后疾病活動(dòng)指標(biāo)和血清IL-28A水平

注：^^P<0.01，與HC比較；**P<0.01，與AS治療前比較；##P<0.01，與AS治療后1個(gè)月比較；&&P<0.01，與AS治療后3個(gè)月比較

2.2AS患者血清IL-28A水平與疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性

如表2所示， 治療前AS患者血清IL-28A水平與疾病活動(dòng)指標(biāo)之間無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。治療后1個(gè)月和治療后6個(gè)月時(shí)IL-28A與ESR呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)；治療后3個(gè)月，IL-28A與BASDAI呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。如圖1所示，AS患者治療后明顯升高的IL-28A水平與疾病活動(dòng)度評(píng)分明顯降低的趨勢(shì)相反，提示血清IL-28A水平與AS疾病活動(dòng)指標(biāo)之間有一定的關(guān)聯(lián)。

表2 治療各階段AS患者血清IL-28A的水平與疾病活動(dòng)指標(biāo)的相關(guān)性

注：“*”表示P<0.05

**P<0.01，AS患者治療后與治療前的比較圖1 治療后血清IL-28A及BASDAI、ASDAS-CRP的變化

如表3所示，AS患者治療后的3個(gè)階段IL-28A水平變化(ΔIL-28A)和疾病活動(dòng)指標(biāo)變化(Δ疾病活動(dòng)指標(biāo))之間沒(méi)有顯著的相關(guān)性(P>0.05)。

表3 治療各階段AS患者血清IL-28A的變化與疾病活動(dòng)指標(biāo)的變化的相關(guān)性

3 討論

目前的研究發(fā)現(xiàn)IL-28A具有抗病毒、抗增殖、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)的重要作用[2-4]。然而，IL-28A在自身免疫性疾病和慢性炎癥性疾病中的作用尚不完全清楚。最近的研究發(fā)現(xiàn)，血清IL-28表達(dá)水平降低與過(guò)敏性哮喘的嚴(yán)重程度和病情惡化之間存在強(qiáng)烈的聯(lián)系，而在哮喘模型鼠的研究中發(fā)現(xiàn)IL-28A可以調(diào)節(jié)肺樹(shù)突狀細(xì)胞的功能，促進(jìn)體內(nèi)Th1細(xì)胞分化，抑制氣道中Th2細(xì)胞介導(dǎo)的反應(yīng)，抑制過(guò)敏性氣道疾病[11]。有研究表明貝赫切特病(Behcet's disease，BD)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞對(duì)IL-28A敏感性增加，促進(jìn)了Th1細(xì)胞反應(yīng)，這一過(guò)程參與BD的發(fā)生發(fā)展[12]；在SLE患者血清及活化的CD4+T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)IL-28水平較正常人明顯升高，這種表達(dá)的失調(diào)提示IL-28可能參與SLE的發(fā)病機(jī)制[13]。本研究發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期AS患者血清IL-28A水平顯著高于HC，這個(gè)結(jié)果與Diana Castillo-Marti'nez等在RA領(lǐng)域的研究結(jié)果相似，他們的研究發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期RA患者血清IL-28A的水平顯著高于HC[14]。本研究結(jié)果表明IL-28A在AS患者中的表達(dá)失調(diào)，提示其可能參與了AS的發(fā)病機(jī)制。

本研究監(jiān)測(cè)了6個(gè)月治療期間不同時(shí)間點(diǎn)的疾病活動(dòng)指標(biāo)變化，并探究他們與患者血清IL-28A水平的關(guān)系。雖然沒(méi)有發(fā)現(xiàn)治療前IL-28A與疾病活動(dòng)指標(biāo)存在相關(guān)性的直接證據(jù)，但是本研究發(fā)現(xiàn)，治療后患者疾病活動(dòng)指標(biāo)明顯降低，而治療后AS患者血清中IL-28A水平顯著高于治療前，且治療后1個(gè)月和治療后6個(gè)月IL-28A與ESR呈負(fù)相關(guān)，治療后3個(gè)月IL-28A與BASDAI呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明IL-28A與AS的疾病活動(dòng)存在有一定的關(guān)聯(lián)。AS的發(fā)病機(jī)制與RA相似，都是由于炎癥破壞了正常的骨穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致骨吸收和形成的失衡[15]。最近的研究發(fā)現(xiàn)，用IL-28A治療膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(collagen-induced arthritis，CIA)小鼠，可通過(guò)抑制中性粒細(xì)胞IL-1β產(chǎn)生和中性粒細(xì)胞遷移來(lái)逆轉(zhuǎn)CIA小鼠疾病嚴(yán)重程度和關(guān)節(jié)損傷,并且證明IL-28A治療顯著減少了關(guān)節(jié)和腹股溝淋巴結(jié)Th17和γδT細(xì)胞IL- 17的產(chǎn)生，提示IL-28A具有抗炎作用[16]。這些發(fā)現(xiàn)與本研究在AS患者治療后血清IL-28A的水平較治療前明顯上升和治療過(guò)程中始終高于健康對(duì)照的結(jié)果相一致，提示IL-28A可能在降低疾病活動(dòng)和抗炎保護(hù)機(jī)體方面發(fā)揮了重要作用。本研究結(jié)果未發(fā)現(xiàn)治療前IL-28A與疾病活動(dòng)指標(biāo)之間有任何顯著的相關(guān)性，這可能是與本研究隨訪期短、樣本量小、納入標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格以及缺乏其他對(duì)照(如非活動(dòng)性AS患者和其他藥物治療組作為對(duì)照)等因素有關(guān)，有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)去驗(yàn)證。

4 結(jié)論

本研究首次確定了活動(dòng)期AS患者血清IL-28A表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)IL-28A可能參與了AS的發(fā)病機(jī)制，可能為AS的治療提供新的靶點(diǎn)。

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