片 靜

（山東省泰安市婦幼保健院產(chǎn)前診斷中心，山東 泰安 271000）

隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，超聲異常孕婦經(jīng)多學(xué)科會診后，得知胎兒以后治療效果可能較好，部分孕婦經(jīng)歷多年不孕，習(xí)慣性流產(chǎn)，急切想保留胎兒，但由于染色體病及染色體的微小變異導(dǎo)致的疾病目前缺乏有效治療手段，危害巨大，因此我們可通過染色體核型分析與單核苷酸多態(tài)性（array-CGH）進行聯(lián)合應(yīng)用，以排除染色體病和其他特定遺傳性疾病，對胎兒做進一步臨床判斷，可以給孕婦提供最佳的生育咨詢指導(dǎo)。

1 資料和方法

1.1 一般資料

2017年3月份至今，超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒發(fā)育異常，并且有保留胎兒的意向或者想查明超聲異常原因的孕婦8例，孕婦年齡24～37歲，平均年齡為33歲，孕周為18～26周，查體結(jié)果符合羊膜腔穿刺術(shù)要求。所有孕婦簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 染色體核型分析

超聲異常的孕婦在孕18～24周無菌條件下行羊膜腔穿刺，抽取三管羊水，每管10 ml。兩管離心棄上清，混勻分別接種于兩瓶分裝好的4.5 ml培養(yǎng)基250 ml的培養(yǎng)瓶中，分兩線于5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)7～8天，第二天取出觀察，視生長情況換液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h左右，當(dāng)有大量分裂期細胞時，加入秋水仙素繼續(xù)培養(yǎng)1 h后收獲-低滲-固定-制片-消化-G顯帶。鏡下20計數(shù)30個中期分裂相，兩線鏡下各分析5個核型，嵌合體加倍技術(shù)分析。染色體圖像分析系統(tǒng)兩線至少采3個圖。

1.2.2 SNP-array技術(shù)檢測

抽取的一管羊水，避免母血污染，用美國Affymetrix公司的750K SNP-array芯片，按試劑盒說明書操作。提取基因組DNA，測定核酸濃度（DNA濃度≧50 ml），取5 ul進行后續(xù)實驗（核酸總量為250 ng）；進行NspI酶切消化，獲得具有黏性末端的基因組DNA片段；在酶切產(chǎn)物兩端加上特異性識別該黏性末端的接頭；使用特異性識別該接頭的引物，進行PCR擴增，獲得高豐度的基因組DNA（片段大小為150～2000 bp）；磁珠純化，洗滌去除酶`dNPT`引物等，獲得純化的PCR擴增產(chǎn)物；對純化的PCR擴增產(chǎn)物，測定核酸濃度；使用片段化酶將基因組DNA進一步切碎成更小的片段（片段大小為25～125 bp）；利用脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶對小片段末端進行標(biāo)記；標(biāo)記產(chǎn)物加入芯片中進行雜交16～18 h，次日在洗滌工作站上進行洗滌染色，去掉未雜交的DNA，放入芯片中進行掃描，使用分析軟件計算并分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié) 果

8例超聲異常孕婦中，4例核型異常，4例芯片異常。其中，1例核型分析正常，芯片異常12.5%，芯片結(jié)果顯示16，18號染色體微重復(fù)和微缺失，并且經(jīng)過數(shù)據(jù)庫查詢，該結(jié)果可導(dǎo)致胎兒智力低下，生長發(fā)育遲緩，心臟畸形。1例核型異常，芯片正常12.5%，為染色體平衡易位，平衡易位由于是兩條染色體發(fā)生斷裂后相互交換，僅有位置的改變，沒有遺傳物質(zhì)的增減，所以，平衡易位攜帶者的臨床表型和智力均表現(xiàn)正常，孕婦選擇繼續(xù)妊娠。2例染色體核型分析和芯片均正常25%，在多學(xué)科會診和個人強烈意愿下，決定繼續(xù)妊娠，定期檢查。4例染色體和核型分析均異常50%，全部選擇引產(chǎn)。超聲指標(biāo)，核型和芯片結(jié)果及妊娠結(jié)局具體情況見表1和表2。染色體不平衡拷貝數(shù)變異（copy number variant，CNV）[1]

表1 孕婦的超聲指標(biāo)情況

表2 核型結(jié)果,芯片結(jié)果，結(jié)果判讀及妊娠結(jié)局

3 討 論

3.1 產(chǎn)前超聲結(jié)構(gòu)畸形的遺傳學(xué)分析

染色體異常包括數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常，具有遺傳性和終身性。多數(shù)是由細胞有絲分裂或減數(shù)分裂過程中出錯所致。產(chǎn)前超聲結(jié)構(gòu)畸形胎兒存在的染色體異常種類大多數(shù)是微缺失、微重復(fù)、非整倍體等，一般是新發(fā)生的染色體異常。90%胎兒畸形是由染色體異?；蚺c環(huán)境因素共同作用而發(fā)生的[2]。

3.2 染色體核型分析

是目前的常規(guī)產(chǎn)前診斷技術(shù)，通常僅可檢測大于5 Mb的遺傳物質(zhì)改變[3]，給人直觀的大的圖像信息。而SNP array不僅能檢測出染色體的非整倍體，大片段的缺失和重復(fù)，而且可以發(fā)現(xiàn)核型分析常規(guī)技術(shù)手段難以檢出的染色體微缺失和重復(fù)，單親二倍體（UPD）[4]，檢測周期短，能提供客觀數(shù)據(jù)信息，尤其對新發(fā)突變，能確定片段來源。但由于SNP array技術(shù)對于異常細胞比例》30%的嵌合體結(jié)果比較可靠，對異常細胞比例＜30%的結(jié)果不可靠【5】，另外，該技術(shù)并不適用染色體平衡易位、倒位和插入【5】。此時，染色體核型分析卻能彌補這一點。因此，兩者結(jié)合可大大增加產(chǎn)前診斷的檢出率。由于本實驗室行羊膜腔穿刺，對于極低比例嵌合還應(yīng)結(jié)合臍帶血和其他手段驗證真假嵌合。所以，對于產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)胎兒異常時，建議在常規(guī)染色體核型分析基礎(chǔ)上行染色體微陣列分析技術(shù)的檢測[5]。

結(jié)合經(jīng)濟角度，對于產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)有胎兒異常的孕婦，一般先建議行胎兒染色體核型分析，如結(jié)果異常，則可直接發(fā)放報告。如結(jié)果正常，可進一步行SNP array技術(shù)檢測，對于異常結(jié)果，通過具有資質(zhì)的遺傳學(xué)醫(yī)生對結(jié)果的正確判讀，多種技術(shù)平臺和多學(xué)科聯(lián)合會診，可以明確超聲結(jié)構(gòu)畸形的遺傳學(xué)原因，再發(fā)，預(yù)防和治療，提出各種方案，避免盲目終止妊娠，為孕婦遺傳咨詢盡可能提供最大幫助。

[1] ChinJObstethostet Gynecol August[J].《中華婦產(chǎn)科雜志》2014,49(08).

[2] 盧 丹,陳欣林,楊小紅,朱 霞,宋婕萍.超聲診斷胎兒畸形與染色體檢測結(jié)果的對比研究[J].《中華超聲影像學(xué)雜志》,2011, 3:272-273.

[3] 鄔玲仟.染色體微陣列分析在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)學(xué)會雜志社指南與進展巡講,2014.

[4] 孟金來,賈頤芳,王謝桐.《現(xiàn)代婦產(chǎn)科進展》[J].2015,24(5):390-393.

[5] 胡 婷,張 竹,王嘉敏,劉洪倩,劉之英,王 和,劉珊玲.染色體微陣列分析在染色體核型分析無法明確診斷病例中的應(yīng)用價值[M].四川大學(xué)學(xué)報2017,48(3):460-463.