蘆 波，周訓(xùn)杰，符德玉，桂明泰，姚 磊，李建華，韓亞楠，龍 敏，舒 婷

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，上海 200437)

隨著生活方式和飲食結(jié)構(gòu)的改變，中國成人超重和肥胖率已達(dá)42.6%[1]，肥胖人數(shù)高居全球第一[2]；與此同時(shí)，高血壓的流行程度也與日俱增[3]，患病率增至29.6%，患者已達(dá)3億[4]。其中60%～70%高血壓與肥胖相關(guān)[5]，肥胖高血壓是一種亟待解決的關(guān)鍵問題。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為肥胖高血壓的發(fā)生與肝脾腎有關(guān)，肝腎不足，肝陽不潛，肝臟疏泄失司，影響脾之運(yùn)化功能，痰濕停聚，久之影響脈絡(luò)運(yùn)行，形成血瘀，從而形成“陽亢-痰濁-血瘀”互結(jié)的病理狀態(tài)，導(dǎo)致肥胖高血壓的逐步發(fā)展。本研究觀察活血潛陽祛痰方對肥胖高血壓大鼠內(nèi)分泌代謝的影響，為中醫(yī)藥防治肥胖高血壓提供依據(jù)。

1 材料

1.1 動物 雄性自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertensive rat，SHR)，5周齡，63只；正常雄性京都(Wistar-Kyoto，WKY)大鼠，5周齡，9只。所有大鼠均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物有限公司[動物生產(chǎn)許可證號為SCXK(京)2012-0001]提供，飼養(yǎng)于岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心清潔級實(shí)驗(yàn)室。

作用簡介：蘆波(1987-)，女，博士研究生，住院醫(yī)師

1.2 儀器 芬蘭雷勃MK3型酶標(biāo)儀；吉爾森Pipetman型移液器；Leica HI1210型水浴鍋；美國Revco ULT2586-4-V型超低溫冰箱；美國Baker SG403TX/603TX型生物安全柜；上海譜元儀器有限公司生產(chǎn)α-1860S型生化儀。

1.3 試劑 碘胰島素放射免疫分析藥盒：北京北方生物技術(shù)研究所；血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ)ELISA檢測試劑盒(批號 201502)：上?；鶢栴D生物；生化試劑盒[低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol, HDL-C)、三酰甘油(triglyceride, TG)、總膽固醇(total cholesterol, TC)、葡萄糖試劑盒]的批號分別為201503、201503、201501、201412、201501]：南京建成生物制品研究所。

1.4 藥物 活血潛陽祛痰方(臨床又名丹蛭降壓方)：由丹參、水蛭、鉤藤(后下)、石決明(先煎)、山楂、玉米須等組成，具有活血化瘀、平肝潛陽兼祛痰濕的功效。按前期課題研究，全方有效量相當(dāng)于臨床用量同比例配制，各藥按一定比例配方后煎汁、濃縮，制備成浸膏備用。

2 方法

2.1 模型復(fù)制方法 參照文獻(xiàn)[6-7]進(jìn)行改進(jìn)。從SHR 5周齡開始，喂?fàn)I養(yǎng)飼料(普通飼料60%，熟豬油12%，全脂奶粉3%，蔗糖5%，花生5%，雞蛋10%，麻油1%，食鹽2%，膽固醇2%)。選取5周齡SHR和WKY大鼠飼養(yǎng)10周用于復(fù)制模型。WKY組(9只)給予普通飲食；SHR對照組(9只)給予普通飲食；SHR高脂飲食組(54只)給予高脂飲食。15周齡時(shí)，SHR高脂飲食組按模型判斷標(biāo)準(zhǔn)分為肥胖高血壓組和非肥胖高血壓組，各27只。肥胖高血壓的判斷標(biāo)準(zhǔn)[8]：凡體質(zhì)量超過WKY對照組平均體質(zhì)量的20%，且收縮壓(systolic blood pressure, SBP)高于115 mmHg為模型復(fù)制成功。

2.2 給藥 將27只肥胖高血壓模型大鼠分成3組，每組9只，分別進(jìn)行灌胃治療8周。最終分組：WKY對照組，給予正常飲用水灌胃及普通飲食；SHR對照組，給予正常飲用水灌胃及普通飲食；SHR肥胖模型組(模型組)，給予正常飲用水灌胃及高脂飲食；SHR肥胖中藥組(中藥組)，給予中藥配液灌胃(每日42 g/kg)及高脂飲食；SHR肥胖西藥組(西藥組)，給予西藥配液灌胃(每日30 mg/kg)及高脂飲食。每日兩次灌胃，藥物灌胃劑量參照課題組既往研究用量[9]。

2.3 指標(biāo)觀察

2.3.1 一般狀態(tài)觀察 包括大鼠外觀、體質(zhì)量的變化。稱大鼠體質(zhì)量，測量身長(鼻尖至尾根長度)，計(jì)算Lee指數(shù)。Lee指數(shù)=[(體質(zhì)量(g)×103)]1/3/身長(cm)。

2.3.2 血壓測定 用BP-98A智能無創(chuàng)血壓儀(日本softron)測定大鼠清醒狀態(tài)時(shí)尾動脈SBP[10]，將大鼠置于37 ℃保溫桶內(nèi)，固定，安靜并預(yù)熱10～15 min，將加壓感應(yīng)器套入鼠尾根部，注意感應(yīng)器尖端與鼠尾尖端的方向保持一致，設(shè)置血壓儀的參數(shù)，開始測量，重復(fù)測量3次，取平均值。

2.3.3 血清Ang Ⅱ、空腹血糖(fasting plasma glucose, FPG)、血脂、空腹胰島素(fasting insulin, FIN)和穩(wěn)態(tài)模型胰島素抵抗指數(shù)(homeostatic model assessment for insulin resistance, HOMA-IR)測定 腹主動脈抽血，離心，檢測血清Ang Ⅱ、血糖、血脂、胰島素水平，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。HOMA-IR=(FPG×FIN)/22.5。

2.3.4 心肌AngⅡ測定 將心肌組織塊固定，檢測心肌Ang Ⅱ，按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

3 結(jié)果

3.1 肥胖高血壓大鼠模型評價(jià) 模型復(fù)制后10周，SHR體質(zhì)量均值為289.89 g，故體質(zhì)量超過347.87 g判斷為模型組，最終共篩選出27只肥胖高血壓大鼠，體質(zhì)量最小值為348 g，最大值為361 g，SBP最小值為151 mmHg，最大值為220 mmHg，模型復(fù)制成功率為50%。

5組Lee指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組Lee指數(shù)較WKY對照組和SHR對照組升高(P<0.05)，中藥組Lee指數(shù)明顯低于模型組和西藥組(P<0.05)，與WKY對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5組SBP比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，模型組SBP顯著高于WKY對照組(P<0.05)，中藥組和西藥組SBP顯著低于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 5組大鼠Lee指數(shù)和SBP比較

注：與WKY對照組比較，*P<0.05；與SHR對照組比較，◇P<0.05；與模型組比較，#P<0.05；與中藥組比較，△P<0.05

3.2 5組大鼠糖代謝指標(biāo)比較 5組FPG比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SHR對照組FPG高于WKY對照組(P<0.05)，模型組FPG高于WKY對照組、中藥組和西藥組(P<0.05)。5組FIN比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。5組HOME-IR比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SHR對照組HOME-IR高于WKY對照組(P<0.05)，模型組HOME-IR高于WKY對照組和中藥組(P<0.05)。見表2。

表2 5組大鼠糖代謝指標(biāo)比較

注：與WKY對照組比較，*P<0.05；與SHR對照組比較，◇P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

3.3 5組大鼠脂代謝指標(biāo)比較 與WKY對照組比較，SHR對照組LDL-C顯著升高(P<0.05)，TG和HDL-C顯著降低(P<0.05)；與SHR對照組比較，模型組LDL-C、TG顯著升高(P<0.05)，HDL-C顯著降低(P<0.05)；與模型組比較，中藥組、西藥組TC、LDL-C顯著降低(P<0.05)；中藥組與西藥組TC、LDL-C、HDL-C、TG比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 5組大鼠血脂水平比較

注：與WKY對照組比較，*P<0.05；與SHR對照組比較，◇P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

3.4 5組大鼠血清和心肌Ang Ⅱ比較 與WKY對照組比較，SHR對照組血清、心肌Ang Ⅱ水平顯著升高(P<0.05)；與SHR對照組比較，模型組血清Ang Ⅱ水平無明顯變化(P>0.05)；與模型組比較，中藥組和西藥組血清、心肌Ang Ⅱ水平顯著降低(P<0.05)；中藥組和西藥組血清、心肌Ang Ⅱ水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 5組大鼠血清和心肌Ang Ⅱ水平比較

注：與WKY對照組比較，*P<0.05；與SHR對照組比較，◇P<0.05；與模型組比較，#P<0.05

4 討論

“肥胖高血壓”多歸于中醫(yī)學(xué)“眩暈”等病范疇，屬本虛標(biāo)實(shí)之證。肥胖高血壓者多恣食肥甘厚味，肝氣易動，致脾失健運(yùn)，痰濁內(nèi)蘊(yùn)，阻塞脈道，血運(yùn)失暢，瘀血漸生，最終形成陽亢、痰濁、血瘀的病理基礎(chǔ)。課題組既往應(yīng)用針對陽亢、血瘀、痰濁的組方活血潛陽祛痰方，進(jìn)行了防治高血壓及其靶器官損害的研究。臨床研究顯示，活血潛陽祛痰方可改善高血壓患者(兼有痰瘀)的糖代謝紊亂、胰島素抵抗和中醫(yī)證候積分[6]。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，活血潛陽祛痰方可控制SHR、陽亢血瘀痰濁SHR的血壓持續(xù)升高，并能改善心肌胰島素抵抗介導(dǎo)的糖代謝紊亂，可降低血液和心肌組織內(nèi)Ang Ⅱ水平及心肌Ang Ⅱ受體及MMP-3表達(dá)水平，以改善高血壓心肌間質(zhì)重構(gòu)[7，9，11]。針對肥胖高血壓的陽亢、痰濁、血瘀病機(jī)，結(jié)合既往研究，推測活血潛陽祛痰方可能是干預(yù)肥胖高血壓的有效中藥復(fù)方。

多項(xiàng)前瞻性研究證實(shí)，肥胖與高血壓并存時(shí)，互相影響，進(jìn)一步加重心血管系統(tǒng)損害，增加難治性動脈高壓的風(fēng)險(xiǎn)[12]，防治肥胖高血壓的核心是預(yù)防靶器官損害的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)活血潛陽祛痰方既能降壓，又可降低Lee指數(shù)(P<0.05)，且改善肥胖的作用優(yōu)于西藥，為減少肥胖高血壓相關(guān)的靶器官損害奠定了重要基礎(chǔ)。

本研究發(fā)現(xiàn)，SHR組大鼠FPG、HOME-IR、LDL-C和TG顯著高于WKY對照組(P<0.05)，HDL-C低于WKY對照組(P<0.05)，可見SHR已存在一定程度的糖脂代謝紊亂；模型組FPG、HOME-IR、TC、LDL-C、TG顯著高于SHR對照組(P<0.05)，且HDL-C顯著低于SHR對照組(P<0.05)，肥胖高血壓大鼠的糖脂代謝紊亂較SHR組更為嚴(yán)重。

研究表明，血TC水平和血壓之間以及內(nèi)皮細(xì)胞受損程度與高血壓的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)。高血壓長期作用導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，LDL-C等脂質(zhì)侵入、沉積，而巨噬細(xì)胞吞噬這些脂質(zhì)，形成泡沫細(xì)胞，最終和增生的血管平滑肌細(xì)胞共同形成粥樣硬化斑塊[13]。高脂血癥是動脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素，能通過損傷血管的舒張功能而加劇高血壓，增加心臟的后負(fù)荷，增加心血管風(fēng)險(xiǎn)?；钛獫撽栰钐捣侥芨纳浦x紊亂，降低TC和LDL-C的水平，這可能對減輕肥胖高血壓相關(guān)的心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)有輔助作用。

肥胖是胰島素抵抗的危險(xiǎn)因素[14]。對SHR的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓發(fā)生之前血管對胰島素的反應(yīng)性已經(jīng)受損，這表明胰島素抵抗是高血壓發(fā)生的早期事件[15]，高胰島素血癥可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)，通過增加血管緊張素原、Ang Ⅱ的1型和2型受體，參與胰島素抵抗患者高血壓的發(fā)生、發(fā)展[16]。因而，胰島素抵抗是肥胖高血壓發(fā)生發(fā)展的重要因素。RAAS激活也與肥胖高血壓的發(fā)生密切相關(guān)，在肥胖高血壓的脂肪組織中能發(fā)現(xiàn)幾乎所有被過度激活的RAAS成分[17-19]。本研究中，模型組血清和心肌Ang Ⅱ水平顯著高于WKY對照組(P<0.05)，且心肌Ang Ⅱ水平較SHR對照組有進(jìn)一步提高，提示肥胖高血壓模型大鼠伴有顯著的RAAS激活?；钛獫撽栰钐捣礁深A(yù)后，既可有效降低血清和心肌組織中升高的Ang Ⅱ水平，還能有效降低HOME-IR，且作用優(yōu)于西藥。課題組既往研究也發(fā)現(xiàn)，活血潛陽祛痰方可通過改善心肌Ang Ⅱ和胰島素抵抗改善血瘀、陽亢、痰濁證SHR的心肌重構(gòu)。綜上，調(diào)節(jié)RAAS激活、改善胰島素抵抗是活血潛陽祛痰方改善肥胖、降低血壓以及進(jìn)一步改善心肌重構(gòu)的可能機(jī)制之一。

本方重用丹參、石決明活血潛陽為君藥，輔以水蛭、鉤藤加強(qiáng)君藥的作用，佐以桑寄生滋水涵木、山楂健脾祛痰、玉米須利水消腫，共奏活血化瘀、平肝潛陽、祛痰濕之效?，F(xiàn)代藥理研究也發(fā)現(xiàn)，活血潛陽祛痰方的主要成分具有降壓、改善代謝紊亂和防治靶器官損害的作用。據(jù)統(tǒng)計(jì)，丹參位居治療高血壓左室肥厚的單味中藥的榜首，使用頻率高達(dá)52.63%，能通過抑制RAAS[20]、影響氧自由基代謝[21]等，發(fā)揮抑制心肌成纖維細(xì)胞的增殖和膠原合成，逆轉(zhuǎn)高血壓相關(guān)左心室肥厚的作用。石決明可通過降低血清中鈣離子水平，影響鈣離子通道和鈣-ATP酶的傳導(dǎo)，抑制血管緊張素原活性的作用[22]，而發(fā)揮降低血壓的作用[23]。水蛭有效成分的降壓作用可能與其改善脂代謝紊亂、降低血黏度、改善外周阻力有關(guān)[24]。鉤藤的有效成分主要通過降低外周阻力，保護(hù)血管內(nèi)皮功能發(fā)揮降壓、改善心肌重構(gòu)的作用[25]。玉米須水提物或水煎劑能夠顯著降低實(shí)驗(yàn)狗的血壓，并對抗腎上腺素的升壓作用，還能降低小鼠血中膽固醇含量[26-27]，這可能是玉米須降低血壓的機(jī)制。山楂能改善高脂飲食引起的脂代謝紊亂[28]。

結(jié)合本課題結(jié)果和現(xiàn)代藥理研究成果發(fā)現(xiàn)，活血潛陽祛痰方可能是治療肥胖高血壓的有效方劑，可改善其內(nèi)分泌及代謝紊亂，為后期探索活血潛陽祛痰方干預(yù)肥胖高血壓相關(guān)的靶器官損害奠定了基礎(chǔ)。

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