周春寧，溫長(zhǎng)康

（江蘇省疾病預(yù)防控制中心總務(wù)科，江蘇 南京 210009）

疫苗熱敏標(biāo)簽（簡(jiǎn)稱VVM）采用新型溫度監(jiān)測(cè)技術(shù)，使疫苗接種管理人員無(wú)需借助其他工具即可判斷疫苗有效性［1］，在高溫暴露等突發(fā)事件發(fā)生后直接將失效疫苗從有效疫苗中分離出去，減少有效疫苗報(bào)廢情形，節(jié)約接種成本［2，3］。目前，某國(guó)產(chǎn)公司可根據(jù)不同類型疫苗耐熱穩(wěn)定性針對(duì)性地研制對(duì)應(yīng)VVM，提高VVM冷鏈監(jiān)測(cè)的精準(zhǔn)性。本文旨在研究37℃恒溫狀態(tài)下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦等第一類疫苗與對(duì)應(yīng)VVM失效變化情況，評(píng)價(jià)上述VVM的可靠性。

1 材料與方法

1.1 樣品

VVM由蘇州華實(shí)熱敏科技有限公司生產(chǎn)提供，型號(hào)分別為QM5D37A（OPV疫苗）、QM9D37CA（滅活甲肝疫苗）、QM9D37CA（減毒乙腦疫苗），樣本份數(shù)80份，采用隨機(jī)數(shù)字表法從不同批次中抽樣得到。VVM對(duì)應(yīng)疫苗由國(guó)產(chǎn)疫苗企業(yè)生產(chǎn)提供，樣本份數(shù)80份，用隨機(jī)數(shù)字表法從不同批次中抽樣得到。

VVM主要包含參照?qǐng)A圈和活性區(qū)域。參照?qǐng)A圈顏色固定不變，為活性區(qū)域提供參照；活性區(qū)域起始為白色，顏色隨高溫暴露不可逆地逐漸加深。當(dāng)活性區(qū)域顏色加深至參照?qǐng)A圈顏色時(shí)，VVM提示疫苗失效。

1.2 熱敏標(biāo)簽顏色變化測(cè)量方法

采用隨機(jī)數(shù)字表法，將VVM置于水浴恒溫箱中，定期測(cè)量活性區(qū)域顏色。該顏色采用CIELAB色彩空間描述［4］，空間坐標(biāo)包含L*（代表亮度，L*=0生成黑色而L*=100指示白色），a*（代表色度，a*負(fù)值指示綠色而正值指示品紅）和b*（代表色度，b*負(fù)值指示藍(lán)色而正值指示黃色），把活性區(qū)域顏色與參照?qǐng)A圈顏色分別處理為L(zhǎng)*a*b*三維空間的兩個(gè)點(diǎn)，并計(jì)算在它們之間的歐幾里得距離ΔE。當(dāng)ΔE=0時(shí)，活性區(qū)域顏色與參照?qǐng)A圈顏色相同，標(biāo)簽提示失效。

1.3 疫苗有效性測(cè)量方法

1.3.1 OPV滴度變化測(cè)量方法。以人喉癌細(xì)胞（Hep-2細(xì)胞）作為病毒生長(zhǎng)的細(xì)胞基質(zhì)，將OPV作10倍系列稀釋，并接種人喉癌細(xì)胞，置二氧化碳培養(yǎng)箱35～36℃培養(yǎng)7天，觀察和記錄細(xì)胞病變，以發(fā)生50%細(xì)胞病變的最高稀釋度為滴定終點(diǎn)，按Kar?ber法計(jì)算結(jié)果。進(jìn)行分型病毒滴定時(shí)脊髓灰質(zhì)炎抗血清完全中和其中一型，用微量法滴定第二型。

1.3.2 滅活甲肝疫苗有效性測(cè)量方法。采用體外相對(duì)效力檢查法，即以酶聯(lián)免疫法測(cè)試供試品甲肝病毒抗原含量，并以參比疫苗為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算樣本疫苗的相對(duì)效力，應(yīng)不低于0.75。

1.3.3 減毒乙腦疫苗滴度變化測(cè)量方法。取樣本作10倍系列稀釋，至少取3個(gè)稀釋度的病毒液，分別接種BHK21細(xì)胞，用蝕斑法進(jìn)行滴定，疫苗病毒滴度應(yīng)不低于應(yīng)5.7 LgPFU/ml，病毒滴度下降應(yīng)不高于1.0 Lg PFU/ml。

1.4 VVM可靠性評(píng)價(jià)

根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)繪制VVM顏色和對(duì)應(yīng)疫苗有效性變化擬合曲線圖與統(tǒng)計(jì)表，橫坐標(biāo)為測(cè)量時(shí)間，縱坐標(biāo)為失效VVM與疫苗例數(shù)。根據(jù)擬合曲線圖計(jì)算VVM和對(duì)應(yīng)疫苗失效時(shí)間范圍，如VVM最晚失效時(shí)間早于疫苗最早失效時(shí)間，標(biāo)簽具有可靠性。兩者時(shí)間越接近，VVM可靠性越高。

2 結(jié)果

37℃下疫苗滴度變化情況及對(duì)應(yīng)樣本標(biāo)簽失效情況：（1）OPV失效時(shí)間范圍為4～5.5 d，對(duì)應(yīng)標(biāo)簽失效時(shí)間范圍為3.1～4 d（詳見表1）；（2）滅活甲肝疫苗失效的時(shí)間范圍為15～29 d，對(duì)應(yīng)標(biāo)簽失效時(shí)間范圍為10～12 d（詳見表2）；（3）減毒乙腦疫苗失效的時(shí)間范圍為14～26 d，對(duì)應(yīng)標(biāo)簽失效時(shí)間范圍為10～12 d（詳見表3）。綜上，所有標(biāo)簽最晚失效時(shí)間均早于疫苗最早失效時(shí)間，均具有可靠性。

表1 37℃下OPV樣本疫苗與QM5D37A樣本標(biāo)簽失效情況表

表2 37℃下滅活甲肝樣本疫苗與對(duì)應(yīng)樣本標(biāo)簽失效情況表

表3 37℃下減毒乙腦樣本疫苗與對(duì)應(yīng)樣本標(biāo)簽失效表

3 討 論

疫苗失效時(shí)，標(biāo)簽是否已失效是評(píng)價(jià)VVM可靠性的方法。疫苗失效而標(biāo)簽未失效，VVM不可靠。VVM與對(duì)應(yīng)疫苗失效速率不可能完全相同，VVM失效時(shí)間均須短于對(duì)應(yīng)疫苗失效時(shí)間，才能確保標(biāo)簽可靠。由于VVM之間、疫苗之間失效速率均存在一定誤差，兩者失效時(shí)間有一定范圍。因此，只有VVM最小失效速率（標(biāo)簽最晚失效時(shí)間）大于疫苗最大失效速率（疫苗最早失效時(shí)間），VVM才完全具備可靠性，兩者時(shí)間越接近，可靠性越高。

所有疫苗的效價(jià)都會(huì)隨著時(shí)間衰減，溫度升高會(huì)加速效價(jià)的衰減。不同的疫苗品種對(duì)于溫度的敏感性不同，不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品也有著不同的熱穩(wěn)定性。OPV疫苗、減毒乙腦等減毒類疫苗熱穩(wěn)定性與選育的菌毒種類型、原液與半成品病毒滴度、儲(chǔ)存溫度、制造水平等因素有關(guān)，滅活甲肝等滅活類疫苗熱穩(wěn)定性與抗原類型、純化工藝、實(shí)際抗原含量、儲(chǔ)存溫度等因素有關(guān)［5，6］。根據(jù)疫苗熱穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)得知，37℃下OPV、滅活甲肝、減毒乙腦疫苗最早失效時(shí)間分別為4、15、14天，熱穩(wěn)定性遠(yuǎn)高于國(guó)家藥典標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)VVM熱穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)得知，37℃對(duì)應(yīng)樣本標(biāo)簽最晚失效時(shí)間分別為4、12、12天，標(biāo)簽均于疫苗失效前到達(dá)終點(diǎn)，具有可靠性；OPV熱敏標(biāo)簽與疫苗失效時(shí)間最接近，可靠性最高；減毒乙腦熱敏標(biāo)簽與疫苗失效時(shí)間相差2天，可靠性較高；滅活甲肝熱敏標(biāo)簽與疫苗失效時(shí)間相差3天，可靠性最低。

目前，國(guó)家通過條例政策鼓勵(lì)疫苗產(chǎn)品使用熱敏標(biāo)簽，VVM的普及是當(dāng)前疫苗冷鏈管理工作的一大趨勢(shì)，VVM的正確應(yīng)用將有助于提高大規(guī)模疫苗接種的安全性［7-9］。

［1］方國(guó)良，馬 波，沈 峰，等.VVM標(biāo)簽在A群C群腦膜炎球菌多糖結(jié)合疫苗上的應(yīng)用［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2015，28（9）：897-901.

［2］Jain R，Sahu AK，Tewari S，et a1.Cold chain monitoring of OPV at transit levels in India：correlation of WM and potency Status［J］.Biologicals，2003，31（4）：237-44.

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