耿世杰，李 媛，程賽賽，胡欒莎，岳曉敬，韓新燕

（浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,農(nóng)業(yè)部華東動(dòng)物營養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江杭州 310058）

在動(dòng)物腸道健康領(lǐng)域，腸道內(nèi)的微生物群落由于能發(fā)揮各種重要功能，已引起越來越多研究者的廣泛關(guān)注。大量研究表明，腸道菌群不僅參與腸道內(nèi)多項(xiàng)代謝進(jìn)程，還在機(jī)體腸屏障功能的構(gòu)建和黏膜免疫系統(tǒng)的成熟方面發(fā)揮重要作用[1]。外源糞菌干預(yù)是一種直接將健康外源供體的糞便菌群移植到受體胃腸道內(nèi)進(jìn)而重塑消化道菌群結(jié)構(gòu)，促進(jìn)腸道健康的微生態(tài)調(diào)節(jié)途徑[2]。在醫(yī)學(xué)上，通過糞菌移植（Fecal Microbiota Transplantation，F(xiàn)MT）的方式進(jìn)行外源糞菌干預(yù)可以有效治療一些難治性胃腸疾病，例如艱難梭菌感染和炎癥性腸病[3]，而且已有研究表明外源糞菌還能發(fā)揮調(diào)節(jié)受體黏膜免疫應(yīng)答和腸道生理功能的作用[4]。在動(dòng)物生產(chǎn)上，有關(guān)糞菌移植能否通過提升腸屏障功能促進(jìn)動(dòng)物腸道健康的研究鮮有報(bào)道。

哺乳仔豬的消化道結(jié)構(gòu)尚未發(fā)育完善、腸黏膜屏障尚不健全，其作為糞菌移植受體有利于觀察與分析外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道功能的調(diào)節(jié)作用。金華豬是我國著名的地方豬種，除肉質(zhì)好、繁殖率高外，在面對(duì)應(yīng)激時(shí)還具有更強(qiáng)的抗逆性和維持腸道功能穩(wěn)態(tài)的能力[5]。本研究選用健康成年金華豬作為糞菌移植供體，通過對(duì)杜×長×大三元雜交哺乳仔豬進(jìn)行糞菌移植，探究外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬腸道屏障功能的影響，進(jìn)而為糞菌移植技術(shù)在動(dòng)物生產(chǎn)領(lǐng)域的應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 選取未使用藥物或藥物性飼料添加劑3個(gè)月以上、無消化紊亂癥狀的80 kg左右健康金華豬作為糞菌移植供體，采集新鮮糞樣并參考Pang等[6]方法制備糞菌懸液。Trizol試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒等均購自Invitrogen公司。熒光定量試劑盒購自Applied Biosystems公司。組織總蛋白提取試劑盒及蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot，WB）一抗購自Santa Cruz Biotechnology，二抗購自Thermo Pierce公司。二喹啉甲酸（Bicinchoninic Acid，BCA）法蛋白濃度測(cè)定試劑盒購自碧云天生物公司。分泌型免疫球蛋白A陽性（SIgA+）細(xì)胞免疫組織化學(xué)分析一抗購自Bethyl Laboratories，二抗購自DAKO公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與設(shè)計(jì) 試驗(yàn)選用初生重相近、胎次相同、同日出生的杜×長×大三元雜交哺乳仔豬12窩，隨機(jī)分為2組，每組6個(gè)重復(fù)（窩），每個(gè)重復(fù)（窩）10～12頭仔豬。試驗(yàn)組1～10日齡隔天灌喂1 mL金華豬糞菌懸液進(jìn)行外源糞菌干預(yù)；對(duì)照組灌喂等量無菌0.1 mol/L無菌磷酸鹽緩沖液（PBS，pH=7.2，含10%甘油）。試驗(yàn)期至仔豬27日齡（斷奶前1 d），從10日齡開始對(duì)所有仔豬補(bǔ)充相同教槽料進(jìn)行誘食，試驗(yàn)期間仔豬自由哺乳進(jìn)食和飲水。

1.3 樣品采集與指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 樣品采集 分別于12日齡和27日齡每組隨機(jī)選取6頭仔豬，肌肉注射4%戊巴比妥鈉溶液（40 mg/kg BW）進(jìn)行麻醉，待麻醉完全后屠宰取樣。屠宰前將仔豬置于保溫箱內(nèi)過夜禁食12 h，宰前稱重。腸道黏膜樣品的收集與保存：截取回腸和結(jié)腸中部約10 cm，縱向剖開，在生理鹽水中將內(nèi)容物洗凈；用玻璃棒快速刮取腸道黏膜樣品，保存于-80℃冰箱中待測(cè)。腸道鏡檢樣品的收集與保存：縱向剖開十二指腸、空腸和回腸，于相同位置分別取長度約1 cm的腸段，在生理鹽水中輕輕漂洗去除腸壁附著內(nèi)容物，隨后使腸腔面朝上平鋪在濾紙上將液體吸干，浸入10%甲醛固定液并置于4℃冰箱中保存用于制作石蠟切片。

1.3.2 生長性能和腹瀉率測(cè)定 在12日齡和27日齡時(shí)，試驗(yàn)仔豬絕食12 h，自由飲水，以重復(fù)為單位對(duì)試驗(yàn)仔豬進(jìn)行空腹稱重，計(jì)算試驗(yàn)期間平均日增重（ADG）。

仔豬腹瀉率=腹瀉仔豬數(shù)×腹瀉時(shí)間/（仔豬總數(shù)×27）×100%

1.3.3 腸道光鏡切片的制作與顯微測(cè)量 固定液中組織塊修整為適當(dāng)大小，流水沖洗24 h。沖洗好的組織置于Leica TP1020脫水機(jī)脫水、透明與浸蠟，使用Leica EG1160組織包埋儀包埋。使用Leica RM2135旋轉(zhuǎn)切片機(jī)將組織塊切為厚度6 μm的切片，隨后將切片置于Leica HI1210烤片機(jī)上烤片。將烤好的載玻片置于Leica Autostain BRXL染色機(jī)中進(jìn)行蘇木精-伊紅（Hematoxylin-eosin，HE）染色，隨后使用二甲苯透明，樹膠加蓋玻片封片。使用Leica專用萬能顯微鏡數(shù)碼拍照，光鏡下使用Leica Qwin軟件進(jìn)行定量分析，每個(gè)樣品觀察6個(gè)非連續(xù)性4 μm縱切片，每張縱切片測(cè)定10個(gè)絨毛高度和隱窩深度。

1.3.4 腸黏膜杯狀細(xì)胞數(shù)測(cè)定 ①石蠟切片脫蠟至水。②0.5%高碘酸水溶液氧化10～15 min。③流水沖洗數(shù)分鐘，蒸餾水換洗2次。④雪夫試劑暗處浸染30～40 min。⑤流水沖洗10 min。⑥蘇木素復(fù)染核30 ～60 s，1%鹽酸水溶液分化3 s，氨水返藍(lán)。⑦無水乙醇脫水（兩缸各5 min）。⑧正丁醇處理30 s。⑨二甲苯透明（兩缸各5 min），中性樹膠封片。⑩糖原高碘酸-雪夫（Periodic Acid-schiff，PAS）染色后在光鏡下觀察，紅色糖原染色細(xì)胞即為杯狀細(xì)胞，高倍鏡下隨機(jī)選擇6個(gè)視野統(tǒng)計(jì)杯狀細(xì)胞數(shù)量進(jìn)行比較。

1.3.5 黏蛋白基因Muc2mRNA相對(duì)表達(dá)量測(cè)定 根據(jù)GenBank已報(bào)道的豬Muc2和GAPDH基因序列，使用Primer Premier 6.0軟件設(shè)計(jì)相應(yīng)特異性引物，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成（表1）。

取出-80℃保存的回腸和結(jié)腸樣品50～100 mg，按照Trizol試劑盒說明書（Invitrogen，貨號(hào)：12183-555）提取總RNA，使用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的質(zhì)量和濃度，結(jié)果顯示OD值均在1.8～2.0。反轉(zhuǎn)錄按照SuperScript? III First-Strand Synthesis SuperMix for qRTPCR試劑盒說明書進(jìn)行操作（反應(yīng)體積為20 μL）。按照Power SYBR?Green PCR Master Mix熒光定量試劑盒說明書加入相應(yīng)反應(yīng)試劑（Applied Biosystems，貨號(hào)：4367659），反應(yīng)體積為20 μL，組成為8.0 μL SDW，10 μL Power SYBR? Green Master Mix，0.5 μL 上 游引物（10 μmol/L），0.5 μL 下游引物（10 μmol/L），1 μL cDNA。擴(kuò)增條件均為95℃預(yù)變性30 s，95℃變性 5 s，60℃ 退火 34 s，95℃ 15 s，60℃ 60 s，40個(gè)循環(huán)之后檢測(cè)熒光信號(hào)。每個(gè)樣品做3個(gè)重復(fù)，每個(gè)樣品目標(biāo)基因mRNA相對(duì)表達(dá)量=2-△△Ct。

表1 PCR反應(yīng)的引物序列

1.3.6 黏蛋白Muc2和緊密連接蛋白ZO-1、Occludin相對(duì)表達(dá)量測(cè)定 使用T-PER Tissue Protein Extraction Reagent總蛋白提取試劑盒（Thermo Pierce，貨號(hào)：78510）進(jìn)行組織總蛋白提取，使用BCA定量試劑盒（碧云天，貨號(hào)：P0010）進(jìn)行總蛋白定量。配置分離膠和濃縮膠對(duì)樣品總蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis，SDS-PAGE）分析。聚偏二氟乙烯（Polyvinylidene Difluoride，PVDF）膜在甲醇中浸泡后轉(zhuǎn)移至三羥甲基氨基甲烷-甘氨酸（Tris-Glycine）轉(zhuǎn)移緩沖液中平衡，SDS-PAGE凝膠在Tris-Glycine轉(zhuǎn)移緩沖液平衡，隨后以恒壓全濕轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后放入吐溫-三羥甲基氨基甲烷緩沖鹽水緩沖液（Tween-tris Buffered Saline， T-TBS）室溫封閉，使用T-TBS漂洗。將一抗（表2）以一定比例溶于T-TBS，4℃孵育過夜，使用T-TBS漂洗。

表2 一抗信息

二抗溶于T-TBS室溫放置1 h，使用T-TBS漂洗5次。二抗為Goat anti-Mouse IgG（H+L）Secondary Antibody（Thermo Pierce，貨號(hào)：31160），Goat anti-Rabbit IgG（H+L）Secondary Antibody（Thermo Pierce，貨號(hào)：31210），稀釋度為 1:5000。使用 SuperSignal?West Dura Extended Duration Substrate，按說明書操作，制備約1 mL增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光（Enhanced Chemiluminescence，ECL）工作液，室溫孵育轉(zhuǎn)印膜1 min，然后去除多余ECL試劑，保鮮膜密封，暗盒中放上X-ray film曝光5～10 min后進(jìn)行顯影和定影。采用Image J軟件分析條帶的光密度值，每個(gè)條帶重復(fù)3次。

目的蛋白相對(duì)表達(dá)量=（目的蛋白光密度值/內(nèi)參光密度值）×10n

1.3.7 分泌型免疫球蛋白A陽性（SIgA+）細(xì)胞數(shù)測(cè)定 ①石蠟切片脫蠟至水。②切片置于乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）抗原修復(fù)緩沖液（PH=9.0）中進(jìn)行抗原修復(fù)，冷卻后置于PBS（PH=7.4）中晃動(dòng)洗滌。③放入3%過氧化氫溶液避光孵育，隨后置于PBS（PH=7.4）中晃動(dòng)洗滌。④滴加3%牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA）或者10%正常兔血清覆蓋組織，室溫封閉30 min。⑤甩掉封閉液，切片滴加一抗（山羊抗豬SIgA抗體），4℃孵育。⑥置于PBS（PH=7.4）中晃動(dòng)洗滌，稍甩干后滴加二抗（山羊抗兔IgG抗體-HRP多聚體），室溫孵育50 min。⑦置于PBS（PH=7.4）中晃動(dòng)洗滌，稍甩干后滴加二氨基聯(lián)苯胺（Diaminobenzidine，DAB）顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，沖洗切片終止顯色。⑧Harris蘇木素復(fù)染3 min左右，1%鹽酸酒精分化數(shù)秒，氨水返藍(lán)。⑨將切片脫水透明，中性樹膠封片。⑩顯微鏡鏡檢，圖像采集并分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用Excel完成整理，使用SPSS 23.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬生長性能的影響 由表3可知，試驗(yàn)組1～27日齡仔豬的ADG與成活率顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），腹瀉率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。

表3 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬生長性能的影響

2.2 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬腸道形態(tài)的影響 由表4可知，試驗(yàn)組12日齡回腸絨毛高度/隱窩深度顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其他腸道形態(tài)指標(biāo)與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。27日齡時(shí)，試驗(yàn)組十二指腸、空腸和回腸隱窩深度均顯著低于對(duì)照組（P＜0.05），空腸和回腸絨毛高度/隱窩深度顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），其他腸道形態(tài)指標(biāo)與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

2.3 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬腸道屏障功能的影響

2.3.1 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道杯狀細(xì)胞數(shù)和黏蛋白Muc2表達(dá)的影響 由圖1可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組回腸和結(jié)腸杯狀細(xì)胞分布面積增加，且含有大量黏蛋白分泌顆粒。由表5可知，試驗(yàn)組12日齡和27日齡回腸與結(jié)腸杯狀細(xì)胞數(shù)均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

圖1 腸道杯狀細(xì)胞PAS染色圖（40×）

外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道黏蛋白基因Muc2的mRNA相對(duì)表達(dá)量及黏蛋白表達(dá)的影響結(jié)果見圖2、表6和表7。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組12日齡回腸和結(jié)腸Muc2mRNA相對(duì)表達(dá)量和黏蛋白表達(dá)水平均顯著提高（P＜0.05）；27日齡時(shí)，試驗(yàn)組結(jié)腸Muc2mRNA相對(duì)表達(dá)量和黏蛋白表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），回腸Muc2mRNA相對(duì)表達(dá)量和黏蛋白表達(dá)水平與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）。

圖2 腸道黏蛋白Muc2代表性Western blot蛋白條帶

2.3.2 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道緊密連接蛋白ZO-1和Occludin蛋白表達(dá)的影響 外源糞菌干預(yù)對(duì)12日齡腸道緊密連接蛋白ZO-1和Occludin蛋白表達(dá)的影響結(jié)果如圖3和表8所示。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組12日齡回腸和結(jié)腸ZO-1、Occludin蛋白表達(dá)水平顯著提高（P＜0.05）。

表4 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬腸道形態(tài)的影響

表5 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響

表6 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道黏蛋白基因Muc2 mRNA相對(duì)表達(dá)量的影響

圖3 腸道緊密連接蛋白ZO-1和Occludin代表性Western blot蛋白條帶

圖4 腸道SIgA+細(xì)胞免疫組織化學(xué)分析（200×）

2.3.3 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道SIgA+細(xì)胞數(shù)的影響 腸道SIgA+細(xì)胞免疫組織化學(xué)分析結(jié)果如圖4所示，對(duì)照組和試驗(yàn)組回腸、結(jié)腸均出現(xiàn)陽性染色。進(jìn)一步進(jìn)行光密度分析的結(jié)果（表9）表明，試驗(yàn)組12日齡結(jié)腸SIgA+細(xì)胞光密度值顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），而回腸SIgA+細(xì)胞光密度值與對(duì)照組相比無顯著差異（P＞0.05）；27日齡時(shí)，試驗(yàn)組回腸與結(jié)腸SIgA+細(xì)胞光密度值與對(duì)照組相比均無顯著差異（P＞0.05）。

3 討 論

3.1 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬生長性能及腸道形態(tài)的影響多項(xiàng)研究表明腸道微生物與動(dòng)物機(jī)體的體重、生長具有顯著相關(guān)性，如Ramayo-Caldas等[7]對(duì)豬腸道微生物相互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，首次發(fā)現(xiàn)腸道菌群與豬生長性狀密切相關(guān)；Han等[8]通過16S rDNA高通量測(cè)序也發(fā)現(xiàn)，高體重豬的腸道菌群多樣性顯著高于低體重豬，同時(shí)高體重豬具有更高水平的厚壁菌門以及厚壁菌門∶擬桿菌門，該研究通過對(duì)2種豬的腸道菌群進(jìn)行PICRUSt功能預(yù)測(cè)分析進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，高體重豬的腸道菌群具有與物質(zhì)降解相關(guān)通路更高水平的富集。本試驗(yàn)表明，外源糞菌干預(yù)在一定程度上提高了受體豬的生長性能。筆者認(rèn)為，外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬生長性能的影響可能由2個(gè)方面決定：一方面，外源糞菌干預(yù)能提高移植受體腸道菌群的多樣性，促進(jìn)菌群將機(jī)體自身無法利用的多種營養(yǎng)物質(zhì)（例如未消化的多糖和蛋白質(zhì)等）作為底物進(jìn)行發(fā)酵，并最終生成可被腸道和菌群直接吸收利用的物質(zhì)，進(jìn)而提高機(jī)體對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化與利用效率[9]；另一方面，外源糞菌干預(yù)促進(jìn)了受體豬腸道結(jié)構(gòu)的發(fā)育并增強(qiáng)了消化吸收功能。O'loughlin等[10]研究發(fā)現(xiàn)，由于腸道絨毛萎縮和隱窩肥大而導(dǎo)致對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)、水分和電解質(zhì)消化與吸收作用減弱是誘發(fā)腹瀉的重要因素。而幼齡哺乳動(dòng)物腹瀉會(huì)嚴(yán)重影響機(jī)體正常的生長發(fā)育，進(jìn)而導(dǎo)致生長性能降低和死亡率升高。本研究結(jié)果表明，外源糞菌干預(yù)能顯著促進(jìn)受體豬腸道形態(tài)發(fā)育，提高其對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化與吸收效率，進(jìn)而減少腹瀉的產(chǎn)生。

表7 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道黏蛋白Muc2蛋白表達(dá)的影響

表8 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道緊密連接蛋白ZO-1和Occludin蛋白表達(dá)的影響

表9 外源糞菌干預(yù)對(duì)腸道SIgA+細(xì)胞數(shù)量的影響

3.2 外源糞菌干預(yù)對(duì)受體豬腸道屏障功能的影響 黏蛋白、緊密連接蛋白和分泌型免疫球蛋白A（SIgA）是機(jī)體腸道屏障功能的3個(gè)重要組成部分。Muc2是腸道黏液層中最主要的黏蛋白，由杯狀細(xì)胞分泌，能高效抑制有毒有害物質(zhì)對(duì)腸上皮細(xì)胞的損傷并參與腸道化學(xué)屏障功能的構(gòu)建。腸道緊密連接蛋白ZO-1和Occludin是腸道上皮屏障的重要組成成分，其能有效阻止腸腔內(nèi)毒素、炎性介質(zhì)及細(xì)菌等物質(zhì)的旁細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，維持腸道上皮屏障的完整性。SIgA+細(xì)胞是由腸道固有層內(nèi)的B細(xì)胞經(jīng)增殖、分化形成的成熟漿細(xì)胞，其合成和分泌的SIgA是機(jī)體腸道免疫屏障中的主要抗體，能使腸道免受病原體和毒素的危害。

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對(duì)受體仔豬進(jìn)行外源糞菌干預(yù)可增加腸道杯狀細(xì)胞和SIgA+細(xì)胞數(shù)，提高黏蛋白和緊密連接蛋白表達(dá)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)受體仔豬腸道屏障功能的調(diào)節(jié)。大量研究表明，腸道菌群經(jīng)自身合成和分解所生成的代謝產(chǎn)物不僅能作為營養(yǎng)物質(zhì)被腸道上皮細(xì)胞吸收和利用，還能作為調(diào)節(jié)機(jī)體腸屏障功能的信號(hào)分子發(fā)揮生理調(diào)控作用。例如，無法被動(dòng)物機(jī)體自身消化酶所降解的植物性多糖能夠在結(jié)腸厭氧共生菌丁酸弧菌屬和梭菌屬等細(xì)菌的發(fā)酵作用下生成短鏈脂肪酸乙酸、丙酸和丁酸。Gaudier等[11]研究表明，丁酸除了作為結(jié)腸上皮細(xì)胞的主要能源物質(zhì)之外，還能促進(jìn)杯狀細(xì)胞分化和黏蛋白表達(dá)進(jìn)而增強(qiáng)腸道黏膜免疫能力。除此之外，腸道雙歧桿菌生成的乙酸能阻止腸出血性大腸桿菌誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)進(jìn)而維持上皮細(xì)胞完整性和保護(hù)腸道免受感染[12]。腸道菌群代謝色氨酸生成的吲哚及其衍生物同樣能在腸屏障功能的維持方面發(fā)揮重要作用。Escherichia coli是吲哚的經(jīng)典合成菌，且吲哚能作為一種“群體感應(yīng)信號(hào)”調(diào)節(jié)E.coli和其他細(xì)菌的毒性和生物膜形成過程，并且對(duì)腸道具有有益作用[13]。有研究表明，腸道共生菌生成的吲哚能通過促進(jìn)結(jié)腸上皮細(xì)胞緊密連接和黏附連接表達(dá)增強(qiáng)腸道上皮屏障功能[14]。Wlodarska等[15]在最近的一項(xiàng)研究中也發(fā)現(xiàn)，機(jī)體腸道內(nèi)消化鏈球菌屬的代謝產(chǎn)物吲哚丙烯酸能對(duì)腸上皮屏障功能發(fā)揮有益作用并幫助緩解腸道炎癥反應(yīng)。除外源性物質(zhì)之外，腸道菌群對(duì)內(nèi)源性物質(zhì)膽汁酸的代謝同樣能影響腸屏障功能。在進(jìn)入腸道之后，膽汁酸除了發(fā)揮幫助機(jī)體吸收和運(yùn)輸飲食中脂肪的作用之外，還能激活腸道內(nèi)的特異性受體例如法尼酯X受體（Farnesoid X Receptor，F(xiàn)XR）或G蛋白偶聯(lián)受體（G Proteincoupled Receptor，GPCR）及其下游相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)而影響腸道免疫功能[16-17]。由于具有膽汁酸鹽水解酶（Bile Salt Hydrolase，BSH）和脫羥基酶活性的特定細(xì)菌群落能夠影響機(jī)體內(nèi)的膽汁酸組成，并且膽汁酸受體結(jié)合不同種類膽汁酸的親和度也各不相同，當(dāng)腸道微生態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變時(shí)，菌群能通過影響機(jī)體內(nèi)膽汁酸的組成進(jìn)而對(duì)膽汁酸受體相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行調(diào)節(jié)并影響腸道屏障功能和免疫應(yīng)答[18]。外源糞菌干預(yù)可能通過改變腸道菌群物質(zhì)代謝途徑，促進(jìn)腸道屏障功能相關(guān)代謝產(chǎn)物的合成及下游信號(hào)通路的激活[2]，進(jìn)而調(diào)節(jié)受體豬腸道屏障功能，然而其具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。

4 小 結(jié)

外源糞菌干預(yù)能通過增加腸道杯狀細(xì)胞和SIgA+細(xì)胞數(shù)、提高黏蛋白和緊密連接蛋白表達(dá)的方式調(diào)節(jié)受體豬腸道屏障功能，具有維持豬腸道功能穩(wěn)態(tài)和促進(jìn)腸道健康的作用。

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