畢勇志 馬 芬

(河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院急診科,河南 開(kāi)封 475000)

老年人心房顫動(dòng)(房顫)的發(fā)生率較高，冠心病、高血壓、風(fēng)濕性瓣膜病、心力衰竭等是老年房顫的危險(xiǎn)因素。房顫包括瓣膜性房顫和非瓣膜性房顫。非瓣膜性房顫是由充血性心肌病、冠心病、高血壓等并發(fā)的心房顫動(dòng)，但并不是所有的上述疾病患者都并發(fā)房顫，房顫和上述疾病的嚴(yán)重程度也沒(méi)有直接關(guān)系，因此推測(cè)非瓣膜性房顫可能存在遺傳異質(zhì)性〔1〕。房顫的發(fā)生和炎癥有一定關(guān)系，C反應(yīng)蛋白(CRP)基因C1444T基因多態(tài)性和炎癥時(shí)的CRP水平有一定關(guān)系。有研究〔2～6〕發(fā)現(xiàn)CRP基因多態(tài)性和一些心腦血管疾病有相關(guān)性；心肌梗死、糖尿病、高血壓等是非瓣膜性房顫的危險(xiǎn)因素，膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)基因TaqIB多態(tài)性和上述疾病關(guān)系密切。本研究擬探討老年非瓣膜性房顫與CRP基因C1444T和CETP基因TaqIB多態(tài)性的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院2014年5月至2016年5月漢族老年非瓣膜性房顫患者112例作為觀察組，同期漢族老年無(wú)房顫患者112例作為對(duì)照組。本研究經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者在納入研究前均簽署知情同意書(shū)，同意研究的所有測(cè)試。觀察組年齡(69.3±11.4)歲，男61例，女51例，吸煙31例，飲酒34例，體重指數(shù)(25.1±1.5)kg/m2；對(duì)照組年齡(70.1±9.8)歲，男59例，女53例，吸煙35例，飲酒42例，體重指數(shù)(24.9±1.3)kg/m2。兩組年齡、性別、吸煙、飲酒、體重指數(shù)等比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

排除標(biāo)準(zhǔn)：非漢族者，年齡<60歲，研究對(duì)象之間有血緣關(guān)系者，有炎癥反應(yīng)者，患有惡性腫瘤、風(fēng)濕性疾病、肝腎疾病者，合并瓣膜性心臟病者等。

1.2主要試劑 DNA提取試劑盒，Taq聚合酶，DNA合成緩沖液(上海生工生物有限公司)；Mix dNTP，TaqQI限制性?xún)?nèi)切酶(天根生物有限公司)等。

1.3方法 血液采集：受試者在住院第2天清晨時(shí)采集靜脈血5 ml，抽取到EDTA抗凝管中。低溫冰凍保存，并于7 d內(nèi)完成DNA提取。

制備基因組DNA：按DNA提取試劑盒步驟進(jìn)行操作，將收集的全血加入細(xì)胞裂解液進(jìn)行裂解，加入蛋白沉淀溶液沉淀，收集含有DNA的上清液，加入異丙醇，離心得到白色DNA沉淀，加入DNA裂解液進(jìn)行DNA裂解。電泳時(shí)選擇的電泳溫度不應(yīng)超過(guò)30℃，電壓80～100 V。本研究選擇 500 Ladder DNA Marker 條帶。

CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB多態(tài)性檢測(cè)：將裂解的DNA采用PCR進(jìn)行擴(kuò)增，CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB均進(jìn)行酶切，瓊脂糖凝膠電泳確定基因型，CPR基因C1444T三種基因型為CC、TT、CT；CETP基因TaqIB三種基因型為B1B1、B1B2、B2B2。CETP基因TaqIB位點(diǎn)引物序列：5′-CACTAGCCCAGAGAGAGGAGTGCC-3′；3′-CTGAGCCCAGCCGCACACTAA-5′；CETP TaqIB多態(tài)性 RS 號(hào)碼為RS708272，RS序列為ACCTGGCTCAGATCTGAACCCTAACT〔C/T〕GAACCCCAGTGATTCTGGGTCTCAG。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件，組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用χ2檢驗(yàn)，Logistic回歸分析CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型與老年非瓣膜性房顫的關(guān)系，非條件Logistic回歸用于校正其他危險(xiǎn)因素可能對(duì)結(jié)果的影響。

2 結(jié) 果

2.1CPR基因C1444T基因型電泳結(jié)果 CPR基因C1444T多態(tài)性是C點(diǎn)-T點(diǎn)的突變，T為突變位點(diǎn)時(shí)為等位基因T，C為突變位點(diǎn)時(shí)為等位基因C，由此形成三種基因型，151、313 bp兩條片段為CC型；462 bp單條片段為T(mén)T基因型；151、313、462 bp三條片段為CT基因型。見(jiàn)圖1。

2.2CETP基因TaqIB基因型電泳結(jié)果 CETP基因TaqIB多態(tài)性是C點(diǎn)-T點(diǎn)的突變，T等位基因?yàn)橥蛔兾稽c(diǎn)時(shí)為等位基因B1，C等位基因?yàn)橥蛔兾稽c(diǎn)時(shí)為等位基因B2，由此形成三種基因型，173、353 bp兩條片段為B1B1型；532 bp單條片段為B2B2基因型；173、353、532 bp三條片段為B1B2基因型。見(jiàn)圖2。

1 為CC基因型，2為T(mén)T基因型，3為CT基因型圖1 CPR基因C1444T基因型酶切電泳圖

1為B2B2基因型，2為B1B1基因型，3為B1B2基因型圖2 CETP基因TaqIB基因型酶切電泳圖

2.3CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)結(jié)果 CPR基因C1444T基因型和CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)，均P>0.05，表明本實(shí)驗(yàn)樣本群體代表性好。見(jiàn)表1，表2。

2.4兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較 兩組CPR基因C1444T基因型之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組TT基因型高于對(duì)照組。觀察組患者CPR基因C1444T T等位基因頻率高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表3。

2.5兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較 兩組CETP基因TaqIB基因型之間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，觀察組B1B1基因型高于對(duì)照組。觀察組CETP基因TaqIB B1等位基因頻率高于對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表4。

2.6Logistic回歸分析 將CPR基因C1444T基因型CC取值為0，CT基因型取值為1，TT基因型取值為2；將CETP基因TaqIB基因型B1B1取值為0，B1B2基因型取值為1，B2B2基因型取值為2；調(diào)整房顫的危險(xiǎn)因素，如高血壓、糖尿病、性別、年齡、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白等，兩組之間CPR基因C1444T和CETP基因TaqIB基因型比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明漢族人群中CPR基因C1444T(T為危險(xiǎn)因子)和CETP基因TaqIB(B1為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性可能和非瓣膜性房顫有相關(guān)性。見(jiàn)表5。

表1 CPR基因C1444T基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)〔n(%),n=112〕

表2 CETP基因TaqIB基因型Hardy-Weinberg檢驗(yàn)〔n(%),n=112〕

表3 兩組CPR基因C1444T基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表4 兩組CETP基因TaqIB基因型及等位基因頻率比較〔n(%),n=112〕

表5 各指標(biāo)Logistic回歸分析

3 討 論

人CRP基因編碼與細(xì)胞間信號(hào)傳遞及免疫系統(tǒng)關(guān)系比較密切。CRP水平是心血管事件的預(yù)測(cè)因子，房顫心肌組織中氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)增加，損傷內(nèi)皮功能。CRP水平是房顫的危險(xiǎn)因素，房顫時(shí)CRP水平升高。CRP基因C1444T多態(tài)性和CRP水平關(guān)系密切，有研究〔7～9〕，發(fā)現(xiàn)CRP基因多態(tài)性和缺血性腦卒中等心腦血管疾病有一定的相關(guān)性。劉威等〔8〕發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者的血清CRP升高，但急性腦梗死和CRP基因rs1205基因多態(tài)性沒(méi)有相關(guān)性；姜玉章等〔2〕結(jié)果發(fā)現(xiàn)，缺血性腦卒中和CRP基因變異呈負(fù)相關(guān)。但關(guān)于CRP基因C1444T多態(tài)性和老年非瓣膜性房顫相關(guān)性的研究不多?？紤]到非瓣膜性房顫患者CRP水平增高，CRP基因C1444T多態(tài)性和CRP水平關(guān)系密切，那么CRP基因C1444T多態(tài)性是否和老年非瓣膜性房顫有相關(guān)性呢？本文研究發(fā)現(xiàn)，老年非瓣膜性房顫可能和CPR基因C1444T(T為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性具有相關(guān)性。

CETP基因含有15個(gè)內(nèi)含子和16個(gè)外顯子，CETP的主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)，介導(dǎo)高密度脂蛋白膽固醇被脂肪組織攝取，參與機(jī)體對(duì)炎癥的反應(yīng)〔10，11〕。CETP基因TaqIB多態(tài)性在心血管疾病中具有保護(hù)作用，CETP基因TaqIB的B2等位基因能夠引起血液中CETP水平降低，使CETP對(duì)高密度脂蛋白中膽固醇酯的轉(zhuǎn)移作用降低，血液中低密度脂蛋白水平下降，高密度脂蛋白水平升高，減弱血管壁的炎癥反應(yīng)〔12〕。血脂和心血管疾病的發(fā)生有一定的相關(guān)性，時(shí)曉遲等〔13〕對(duì)冠心病和CETP基因TaqIB多態(tài)性的相關(guān)性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)冠心病的發(fā)病和CETP基因TaqIB多態(tài)性沒(méi)有相關(guān)性；徐曉玉等〔10〕對(duì)腦出血與CETP基因I405V、D442G多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)漢族人群腦出血和CETP基因I405V多態(tài)性可能沒(méi)有關(guān)系，CETP基因D442G多態(tài)性和腦出血患者的血脂水平有一定相關(guān)性；劉欣等〔4〕對(duì)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性和CETP基因D442G多態(tài)性的關(guān)系進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊不穩(wěn)定性和CETP基因D442G突變有一定關(guān)系。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)：老年非瓣膜性房顫可能和CETP基因TaqIB(B1為危險(xiǎn)因子)多態(tài)性具有相關(guān)性。CETP基因TaqIB B1等位基因?yàn)槲ｋU(xiǎn)因子，B2等位基因?yàn)楸Ｗo(hù)因子，B2等位基因可以降低血液中低密度脂蛋白水平，減輕血管壁的炎癥反應(yīng)，和非瓣膜性房顫的發(fā)生呈負(fù)相關(guān)；B1等位基因和B2等位基因的作用相反，B1等位基因和高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)病關(guān)系密切，而房顫的發(fā)生和高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病關(guān)系密切。因此，考慮CETP基因TaqIB B1等位基因通過(guò)升高低密度脂蛋白水平促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而和老年非瓣膜性房顫的發(fā)生相關(guān)。

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