戴清波，鄭文明

(三亞市人民醫(yī)院，海南三亞 572000)

腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，約占原發(fā)性腦腫瘤的50%，具有早期確診率低、呈浸潤性生長、高侵襲性、高復發(fā)率及生存預后差等特性[1]。在我國，腦膠質(zhì)瘤發(fā)病率呈逐年上升趨勢，據(jù)統(tǒng)計，我國腦膠質(zhì)瘤發(fā)病率約6.2/10萬，病死率約3.2/10萬[2]。據(jù)WHO神經(jīng)系統(tǒng)分類標準，腦膠質(zhì)瘤病理分級為Ⅰ～Ⅳ級，其中Ⅰ級和Ⅱ級為低級別膠質(zhì)瘤，患者預后尚可，其中位生存時間5～8年，而高級別的Ⅲ級間變型星形細胞瘤、Ⅳ級膠質(zhì)母細胞瘤的中位生存時間分別約3年、14.4個月[3]。手術(shù)輔以放化療及靶向治療的綜合治療方案，是目前國際上治療腦膠質(zhì)瘤的常規(guī)手段，但患者的生存質(zhì)量和預后并不樂觀，目前，在基因水平尋找治療靶點是尋找針對性治療藥物的研究熱點。c-Myc基因是常見的原癌基因，c-Myc蛋白可調(diào)控核轉(zhuǎn)錄因子活性，參與DNA增殖、促進腫瘤細胞異常分化及侵襲遷移等過程[4]。鼠雙微體2(MDM2)基因是一種進化保守的原癌基因，是抑癌基因p53的關(guān)鍵負調(diào)控因子，在多數(shù)腫瘤組織中存在MDM2異常表達現(xiàn)象[5]。2012年1月～2017年12月，我們檢測了腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc、MDM2蛋白表達，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2012年1月～2017年12月我院保存的89例份腦膠質(zhì)瘤組織石蠟標本，患者男46例、女43例，年齡19～76(45±9.57)歲。根據(jù)WHO神經(jīng)系統(tǒng)分類標準，Ⅰ級6例，Ⅱ級42例，Ⅲ級34例，Ⅳ級7例，其中Ⅰ級和Ⅱ級為低病理分級，Ⅲ級和Ⅳ級為高病理分級。同期，選擇因腦外傷入院治療患者的正常腦組織石蠟標本35例份，患者男20例、女15例，年齡20～69(43±12.57)歲。兩組患者的性別比例、年齡等基礎(chǔ)資料差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。本研究經(jīng)倫理委員會審核同意，并獲得所有研究對象知情同意。

1.2 腦組織中c-Myc、MDM2蛋白表達檢測 采用免疫組化法。石蠟標本(厚度約5 μm)，60 ℃烘烤后，二甲苯脫蠟，梯度乙醇再水化；微波加熱進行抗原修復，滴加3%H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶；分別滴加c-Myc蛋白和MDM2蛋白的抗原工作液，4 ℃孵育過夜；生物素二抗工作液，室溫孵育30～60 min；DAB顯色，蘇木素復染；中性樹膠封片，顯微鏡下觀察。c-Myc、MDM2蛋白均主要定位于細胞質(zhì)，根據(jù)蛋白染色強度和陽性百分比進行半定量評分，染色強度評分：無著色為0分，淺黃色為1分，深黃色為2分，棕黃色為3分。陽性細胞百分比評分：<5%為0分，5～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。計算染色強度評分與陽性細胞百分比評分的乘積，以0～5分為陰性表達，6～12分為陽性表達。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料以例或百分比表示，兩組或多組間比較采用卡方檢驗或Fisher精確檢驗，等級資料相關(guān)性分析采用Spearman等級相關(guān)檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 c-Myc、MDM2蛋白在腦組織中表達比較 腦膠質(zhì)瘤、正常腦組織中c-Myc蛋白陽性表達率分別為55.06%(49/89)、8.57%(3/35)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=22.293，P=0.000)；腦膠質(zhì)瘤、正常腦組織中MDM2蛋白陽性表達率分別為48.31%(43/89)、2.86%(1/35)，二者比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=22.675，P=0.000)。

2.2 腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc、MDM2蛋白表達與患者病理分級的關(guān)系 c-Myc蛋白在低病理分級(Ⅰ～Ⅱ級)、高病理分級(Ⅲ～Ⅳ級)腦膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率分別為43.75%(21/48)、68.29%(28/41)，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=5.838，P=0.020)；MDM2蛋白在低病理分級(Ⅰ～Ⅱ級)、高病理分級(Ⅲ～Ⅳ級)腦膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率分別為29.17%(14/48)、70.73(29/41)，二者比較，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.298，P=0.020)。

2.3 腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc、MDM2蛋白表達間的關(guān)系 腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc蛋白、MDM2蛋白同為陰性表達9例，同為陽性表達12例，c-Myc蛋白表達陰性、MDM2蛋白表達陽性31例，c-Myc蛋白表達陽性、MDM2蛋白表達陰性37例，Spearman等級檢驗結(jié)果顯示，腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc、MDM2蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.370,P<0.05)。

3 討論

腦膠質(zhì)瘤是一種多基因異常表達的疾病，其發(fā)生發(fā)展可能與原癌基因活化、抑癌基因失活、凋亡相關(guān)基因異常、血管活性因子高表達、相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路的激活等相關(guān)。c-Myc基因?qū)儆谠┗騇yc家族成員，定位于人染色體8q24。c-Myc蛋白是一種轉(zhuǎn)錄因子，可與MAX蛋白形成異源二聚體，結(jié)合至DNA核心序列，調(diào)控目的基因表達，如c-Myc可調(diào)節(jié)細胞周期蛋白(Cyclin)、乳酸脫氫酶(LDH-A)、轉(zhuǎn)錄因子E2F、凋亡相關(guān)蛋白Bax表達，進而影響細胞生物學行為[6]。正常生理條件下，c-Myc基因表達受到嚴格調(diào)控，據(jù)統(tǒng)計，約70%人類腫瘤組織中存在c-Myc基因過度擴增、異常表達、重排等現(xiàn)象，參與調(diào)控腫瘤細胞增殖、代謝、分化及細胞周期等過程[7]。

MDM2與p53形成負反饋環(huán)路，可抑制p53基因轉(zhuǎn)錄活性，其次，MDM2是泛素蛋白酶的重要組分，且MDM2作為一種特異性針對p53的泛素E3連接酶，可促進p53蛋白泛素化降解，在維持p53蛋白動態(tài)平衡中發(fā)揮關(guān)鍵作用[8]。MDM2-p53環(huán)路在調(diào)節(jié)DNA修復、細胞周期、細胞凋亡及衰老等生理病理過程中起關(guān)鍵作用。大量研究表明，p53具有作為腫瘤治療靶標的巨大潛能，通過調(diào)控MDM2，可間接調(diào)控p53功能，如最具代表性的MDM2抑制劑Nutlin-3a，可競爭性結(jié)合MDM2，間接激活p53，并且無細胞毒性[9]，其同系物RG7112已進入Ⅰ期臨床試驗階段[10]。有分析結(jié)果提示，膠質(zhì)瘤發(fā)生進展可能與MDM2過表達有關(guān)。本研究中，免疫組化結(jié)果顯示，c-Myc、MDM2蛋白在腦膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率均分別高于正常腦組織，Yi等[11]研究結(jié)果亦證實c-Myc可促進膠質(zhì)瘤形成，同時有研究結(jié)果表明，LncRNA ENST00462717及microRNA-610[12]均可通過靶向抑制MDM2基因表達，進而抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖，MDM2能促進膠質(zhì)瘤細胞增殖，本研究結(jié)果進一步證實c-Myc、MDM2在腦膠質(zhì)瘤形成過程中發(fā)揮原癌基因功能。此外，本研究發(fā)現(xiàn)c-Myc、MDM2蛋白在高病理分級(Ⅲ～Ⅳ級)腦膠質(zhì)瘤組織中的陽性表達率較高，提示c-Myc、MDM2蛋白高表達均促進了腦膠質(zhì)瘤的病情惡性進展。

Spearman等級相關(guān)檢驗結(jié)果表明，腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc與MDM2蛋白表達呈正相關(guān)關(guān)系，提示二者在腦膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中具有協(xié)同作用。Kim等[13]研究發(fā)現(xiàn)，p53突變可抑制c-Myc基因表達，進而誘導膠質(zhì)瘤發(fā)生；還有研究顯示c-Myc可間接調(diào)控p53基因轉(zhuǎn)錄；此外，有研究表明，CT聯(lián)合c-Myc、MDM2檢測有助于非小細胞肺癌病情判斷[14]。由此推測，在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中，c-Myc、p53及MDM2三者間可能存在間接調(diào)控機制。

綜上所述，腦膠質(zhì)瘤組織中c-Myc、MDM2蛋白表達增加，且均與較高病理級別有關(guān);聯(lián)合檢測c-Myc、MDM2可能有助于患者病情預測。