梁 宇

神經(jīng)母細胞瘤( neuroblastoma，NB) 是1種兒童常見的惡性腫瘤，主要是由沒有分化的交感神經(jīng)細胞構成，其腫瘤轉移時間早、療效及預后較差，因此，探討神經(jīng)母細胞瘤組織蛋白表達，對臨床治療方法的研究具有重要作用[1-2]。有文獻報道，VEGF在多種腫瘤中表達水平高，其可有效調(diào)控血管形成和浸潤過程，而有研究報道MMP-9/TIMP-1表達水平與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展關系密切[3-4]。為此，本研究探討VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其臨床意義，取得滿意效果，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

選取我院2015年1月至2017年1月收治的小兒神經(jīng)母細胞瘤患者30例作為研究對象。所有患兒均經(jīng)病理學檢查確診為神經(jīng)母細胞瘤，且行手術治療前未曾行化療、放療等輔助治療措施。根據(jù)國際神經(jīng)母細胞瘤分期可將患兒分為：Ⅰ期8例，Ⅱ期10例，Ⅲ期7例，Ⅳ期5例。使用甲醛將所取患兒組織進行常規(guī)固定及石蠟包埋，連續(xù)切片，4 μm厚度，并分別進行HE染色及免疫組織化學染色。

1.2 方法

采用購自武漢博士德公司的抗人MMP-9多克隆抗體、抗人TIMP-1多克隆抗體、兔抗人VEGF 多克隆抗體進行免疫組化染色，使用常州市郝思琳醫(yī)用儀器有限公司提供的CM3800 切片機，使用上海光密儀器有限公司的顯微鏡，采用北京福意聯(lián)公司提供的fyl-ys-150恒溫箱對標本進行脫蠟，嚴格按照試劑盒說明書操作步驟進行免疫組化S-P法的相關規(guī)范操作。用子宮內(nèi)膜癌陽性切片作為陽性對照，PBS替代一抗進行陰性對照。

1.3 結果判斷

VEGF免疫組化染色結果判斷[5]。①陽性反應：以腫瘤細胞與其附近血管內(nèi)皮細胞胞質(zhì)內(nèi)呈黃色或棕黃色顆粒為VEGF陽性反應。②陰性反應：與背景染色一致淡黃色或無棕色反應顆粒為VEGF陰性。

MMP -9蛋白和TIMP -1蛋白抗[6]。①陽性反應：均以細胞呈清晰棕黃色顆粒為組織陽性反應。并采用雙人雙盲法對結果進行觀察，隨機選擇10個400×高倍鏡視野觀察1000個細胞。陽性表達細胞百分率≥5%為(+)，<5%為(-)。

1.4 統(tǒng)計學方法

應用SPSS 19.0軟件分析本研究的所有數(shù)據(jù)，采用χ2檢驗計數(shù)資料。

2 結果

2.1 VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細胞瘤中的表達情況

MMP-9在組織中的陽性表達率為73.33%(22/30)、TIMP-1的陽性表達率為46.67%(14/30)，VEGF在組織中的陽性表達率為70.00%(21/30)(P<0.05);而22例MMP-9陽性表達組織標本中TIMP-1陽性表達率為40.90%(9/22)，8例MMP-9陰性表達組織標本中TIMP-1陽性表達率為75.00%(6/8)，21例VEGF陽性表達組織標本中TIMP-1陽性表達率為38.09%(8/21),9例VEGF陰性表達組織標本中TIMP-1陽性表達率為77.78%(7/9)(P<0.05)。

2.2 小兒神經(jīng)母細胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表達與腫瘤分期相關性

12例Ⅲ、Ⅳ期患者中MMP-9陽性表達為83.33%(10/12)、VEGF陽性表達為83.33%(10/12)，明顯高于18例Ⅰ、Ⅱ期患者的55.55%(10/18)、50.00%(9/18)(P<0.05)，而TIMP-1在Ⅲ、Ⅳ期患者中陽性表達為25.00%(3/12)，明顯低于Ⅰ、Ⅱ期患者的61.11%(11/18)(P<0.05)。

2.3 小兒神經(jīng)母細胞瘤中VEGF、MMP-9和TIMP-1表達的相關性

TIMP-1表達與VEGF表達呈負相關關系(γ1=-0.434,P<0.05)。MMP-9表達與TIMP-1表達呈負相關關系(γ2=-0.532,P<0.05)。

3 討論

神經(jīng)母細胞瘤( NB)具有生長快、惡性度高、病程短的生物特性，腫瘤的浸潤、轉移以及生長是1個復雜過程，同時又是腫瘤復發(fā)的1個重要原因[7]。

本研究探討VEGF、MMP-9和TIMP-1在小兒神經(jīng)母細胞瘤中的表達及其臨床意義，結果發(fā)現(xiàn)，MMP-9在組織中的陽性表達率為73.33%、TIMP-1的陽性表達率為46.67%，VEGF在組織中的陽性表達率為70.00%，TIMP-1與VEGF的表達呈負相關關系，MMP-9與TIMP-1的表達呈負相關關系。這是由于在腫瘤細胞介導的降解細胞外基質(zhì)過程中基質(zhì)金屬蛋白酶家族( MMPs) 可起到重要作用，而MMP-9作為發(fā)揮主要功能的基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的明膠酶，可對細胞外基質(zhì)中Ⅳ、Ⅴ型膠原以及明膠等主要成分進行降解，將基底膜打破，并使腫瘤細胞浸潤轉移的首要障礙清除，而近年來，國內(nèi)外發(fā)現(xiàn)MMP-9與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，但在國內(nèi)NB組織中的MMP-9的表達研究報道較少見[8]。

近年來發(fā)現(xiàn)，TIMPs是1種可對MMPs進行功能抑制的物質(zhì)，往往由與分泌MMPs的同樣細胞合成，它可以1∶1非共價健結合活化的間質(zhì)膠原酶、間質(zhì)溶解素以及 MMP-9形成復合物從而對其活性進行抑制，使細胞外基質(zhì)的降解降低[9]。因MMP-9 與 TIMP-1在神經(jīng)母細胞瘤侵襲轉移過程中具有拮抗作用，因此，聯(lián)合檢測可準確地將腫瘤細胞侵襲轉移的方向顯示出，并為神經(jīng)母細胞瘤的針對性治療方案提供參考[10]。而腫瘤能否生存于轉移部位，并向遠處播散，腫瘤內(nèi)血管生成在其中扮演重要角色，也是腫瘤復發(fā)的重要因素，而腫瘤的血管形成與VEGF等多種相關因子的誘導和調(diào)節(jié)密切相關，有大量研究顯示VEGF于人的正常組織以及多種動物和腫瘤細胞株中均存在，VEGF可促使腫瘤新血管形成，在其生長和轉移中起重要作用[11-12]。

綜上所述，VEGF、MMP-9和TIMP-1與小兒神經(jīng)母細胞瘤的惡性程度、浸潤轉移及預后密切相關,可作為預后的判斷指標，為小兒神經(jīng)母細胞瘤臨床靶向治療提供理論依據(jù)。