陳芩 章劍 胡潔 曹丹 羅干

摘要 建立了一種蛋及蛋制品中氟苯尼考殘留量測定的高效液相色譜法（HPLC）。經(jīng)乙酸乙酯提取分離，正己烷脫脂后，采用C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以水-甲醇（60∶40）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長224 nm，進樣量20 μL，柱溫40 ℃進行定量分析。在濃度為0.01～10.00 μg/mL范圍內(nèi)，標準曲線線性關系良好（相關系數(shù)R>0.999 9），檢出限為0.01 μg/mL。該方法成本較低，操作簡便，無雜質(zhì)干擾，分析快速，結果準確，適用于蛋及蛋制品中氟苯尼考殘留量的檢測分析。

關鍵詞 氟苯尼考；高效液相色譜法；蛋及蛋制品；殘留量

中圖分類號 S859.84 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）03-0259-02

Abstract The method for florfenicol residue in the eggs and egg products by HPLC was established. The samples were extracted with ethyl-acetate and defatted with n-hexane.The chromatogram conditions were as follows：C18 chromatographic column（4.6 mm×250 mm，5 μm）was used，water and methanol（volume ratio was 60∶40）was as the mobile phase，the flow rate was 1.0 mL/min，determine wavelength was 224 nm，injection volume was 20 μL and column temperature was 40 ℃.In the concentration range of 0.01-10.00 μg/mL，the linear relationship of the standard curve was good（correlation coefficient R>0.999 9），the detection limit was 0.01 μg/mL.This method has the advantages of low cost，simple operation，no impurity interference，quick analysis and accurate result，and is suitable for the detection and analysis of florfenicol residues in eggs and egg products.

Key words florfenicol；HPLC；egg and egg product；residue

氟苯尼考（Florfenicol）為甲砜霉素的單氟衍生物，又名氟甲砜霉素，是20世紀80年代后期成功研制的一種新的獸醫(yī)專用氯霉素類廣譜抗菌藥[1-2]。因為其在體內(nèi)極易吸收，分布較為廣泛，對敏感菌所引發(fā)的動物細菌性疾病具有極佳的治療效果，對呼吸道感染以及腸道感染的防治效果顯著，所以廣泛地應用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中[3]。但是，氟苯尼考在動物性食品及動物源性食品中的殘留對人體存在潛在的危害，可能會損害人體骨髓造血機能，引起粒細胞缺乏病、再生障礙性貧血和溶血性貧血，嚴重者可致死。因此，該藥物在動物源性食品中的殘留會嚴重影響到人類的生命安全[4]。

目前，用于檢測氟苯尼考在動物源性食品中殘留的方法主要有高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法以及液質(zhì)聯(lián)用法，其中高效液相色譜法和液質(zhì)聯(lián)用法的應用最為廣泛[5]。相比之下液質(zhì)聯(lián)用法成本較高，前處理較為復雜，很難得到普及，因而建立一種方便快捷、定量準確、線性關系良好的高效液相色譜法具有重要的實際意義[6]。本試驗建立了蛋及蛋制品中氟苯尼考殘留量測定的高效液相色譜法，適用于鮮蛋及以鮮蛋為原料的皮蛋、咸蛋等制品中氟苯尼考殘留量的測定。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑：氟苯尼考標準品（純度為99.82%，德國Dr.Ehrenstorfer公司），乙酸乙酯（AR），甲醇（HPLC），正己烷（AR），氫氧化銨（25%～28%），無水硫酸鈉（AR）。

1.1.2 儀器：高效液相色譜儀（Agilent 1200，美國安捷倫科技有限公司）；電子分析天平（AUY-220，日本島津）；渦旋混合器（WH-2，金壇市新航儀器廠）；臺式高速冷凍離心機（TGL-16M，湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；超聲波清洗儀（AS10200T-10L，天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-52AA，上海生化儀器廠）。

1.2 試驗方法

1.2.1 樣品前處理。

（1）試樣提取。分別稱取均質(zhì)后試樣5 g（精確至0.000 1 g），置于50 mL離心管中，依次加入乙酸乙酯30 mL，氫氧化銨0.9 mL，無水硫酸鈉5 g，渦旋1 min，超聲提取5 min，10 000 r/min 離心5 min，將上清液移至150 mL雞心瓶中，殘渣用30 mL乙酸乙酯按上述步驟重復提取1次，合并提取液，45 ℃旋蒸近干。

（2）試樣凈化。向雞心瓶中的殘渣加入5 mL水溶解，渦旋1 min，超聲提取5 min，加入3 mL正己烷渦旋1 min，靜置分層，棄掉上層有機相，再加入3 mL正己烷重復凈化1次，靜置分層后，取下層水相至5 mL離心管中，于11 000 r/min 條件下離心10 min，將離心后的清液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾，待檢測。

1.2.2 儀器條件。檢測器為紫外檢測器；色譜柱為Topsil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為水∶甲醇（60∶40）；柱溫為40 ℃；進樣量為20 μL；流速為1.0 mL/min；檢測波長為224 nm。

2 結果與分析

2.1 標準曲線

采用上述方法進行檢測，建立標準曲線，曲線類型為線性回歸，橫坐標為氟苯尼考標準使用液濃度，縱坐標為氟苯尼考標準使用液峰面積，相關系數(shù)R2=0.999 9，線性回歸方程為y=4 097.3x-29.686圖1。由此可見，本方法分離效果明顯，且線性關系良好。同時測得氟苯尼考殘留量在本方法中的檢出限為0.01 μg/mL。

2.2 氟苯尼考標準使用液試驗結果

由圖2、3可以看出，本試驗方法得出的色譜圖基線穩(wěn)定、峰型理想，且光譜圖具有明顯的代表性，可以在保留時間的基礎上進一步對目標樣品進行定性分析，對氟苯尼考檢測方法的進一步研究有著深遠的意義。

2.3 加標試驗結果

在本試驗色譜條件下，選取雞蛋、鴨蛋、皮蛋以及咸蛋4種樣品，采用樣品加標的方法對本方法的穩(wěn)定性和準確性進行驗證，得到4種樣品與各自加標樣品的色譜圖對比結果（圖4～7）。

由對比色譜圖結果可以看出，各樣品按本試驗方法處理后，目標物出峰時間穩(wěn)定且在該時間范圍內(nèi)均無雜質(zhì)干擾，4種加標樣品峰型依然保持良好，無分叉、無拖尾現(xiàn)象，響應效果顯著。

3 結論

本試驗采用高效液相色譜法對蛋雞蛋制品中氟苯尼考殘留量進行了測定，通過試驗確定了該試驗條件下氟苯尼考的出峰時間、線性范圍、檢出限以及光譜圖。從試驗結果可以看出，本方法不僅靈敏度高、精確度好，且快速經(jīng)濟，是一種方便、快捷、準確、有效的蛋及蛋制品中氟苯尼考殘留量測定方法，對動物源性食品的研究具有重要的意義。

4 參考文獻

[1] 陳進.氟苯尼考在豬體內(nèi)混飼給藥藥動學研究[J].畜禽業(yè)，2011（7）：32-35.

[2] 魏海濤，方秋華，曾振靈，等.高效液相色譜法測定豬血漿中氟苯尼考的含量[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2010，35（3）：31-33.

[3] 殷平，陳舜勝，鄧曉軍，等.液質(zhì)聯(lián)用檢測水產(chǎn)品中氯霉素、氟苯尼考和甲砜氯霉素的殘留量[J].現(xiàn)代食品科技，2007，23（10）：83-87.

[4] 劉智宏，黃耀凌，汪霞，等.水產(chǎn)品中甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺酶聯(lián)免疫多殘留測定[J].中國獸藥雜志，2010，44（12）：1-5.

[5] 劉永濤，艾曉輝，李榮，等.水產(chǎn)品中氟苯尼考和氟苯尼考胺的高效液相色譜熒光法同時測定[J].分析測試學報，2008，27（3）：316-318.

[6] ORLANDO E A，COSTA ROQUE A G，LOSEKANN M E，et al.UPLC-MS/MS determination of florfenicol and florfenicol amine antimicrobial residues in tilapia muscle.[J].Journal of Chromatography B，2016，1035：8-15.