李艷斌，柴麗紅,*

1. 長(zhǎng)安大學(xué) 環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院，西安 710054 2. 旱區(qū)地下水文與生態(tài)效應(yīng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(長(zhǎng)安大學(xué))，西安 710054

氟是鹵族元素之一。由于氟的化學(xué)性質(zhì)活潑，在自然界幾乎不以氟單體的形式存在，而是與其他元素結(jié)合形成無機(jī)和有機(jī)氟化物[1]。氟作為一種動(dòng)物及人體發(fā)育必需的微量元素，適量氟攝取有益于齲齒預(yù)防和骨骼發(fā)育，然而過量氟攝取會(huì)對(duì)動(dòng)物及人體健康造成危害[2-3]。自然界地表水中氟離子的濃度通常為“0.0～0.3 mg·L-1”[4]，然而金屬冶煉、有機(jī)肥料的加工、含氟“三廢”的排放等人類活動(dòng)導(dǎo)致水環(huán)境中氟含量持續(xù)升高[5-8]。有關(guān)報(bào)道表明，我國(guó)部分地下水中氟離子(F-)濃度甚至高達(dá)45 mg·L-1[9]。因此，開展水域環(huán)境氟污染對(duì)水生生物潛在負(fù)效應(yīng)的研究具有重要的意義。

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)水域氟污染對(duì)水生動(dòng)物的毒性效應(yīng)進(jìn)行了大量研究。Alonso和Camargo[10]的研究表明，水生蝸牛(Potamopyrgusantipodarum)經(jīng)20 mg·L-1F-暴露后，其游動(dòng)速度與對(duì)照組相比顯著降低。Chen等[11]研究了F-對(duì)鯉魚(Cyprinuscarpio)的毒性效應(yīng)，結(jié)果表明，高濃度的F-慢性暴露可抑制鯉魚的生長(zhǎng)發(fā)育。此外有研究表明，F(xiàn)-脅迫可導(dǎo)致非洲爪蟾(Xenopus)胚胎發(fā)育畸形[12]，可抑制中華大蟾蜍(Bufogargarizans)蝌蚪的變態(tài)進(jìn)程[13]。

兩棲動(dòng)物幼體是研究污染物對(duì)水環(huán)境生物毒性影響的重要生物材料之一。兩棲動(dòng)物的胚胎發(fā)育和幼體發(fā)育均在水域中進(jìn)行，其幼體鰓和皮膚的滲透性強(qiáng)，對(duì)水域化學(xué)污染物極為敏感[14-16]。中國(guó)林蛙(Ranachensinensis)廣泛分布于我國(guó)華北、西北等地，是我國(guó)兩棲類最具代表性的物種之一[17]。依據(jù)Gosner[18]的分期標(biāo)準(zhǔn)，G1～G25為中國(guó)林蛙的胚胎發(fā)育期，G26～G46為中國(guó)林蛙的幼體發(fā)育期。已有的研究表明，其幼體對(duì)水域多種化學(xué)污染物如Pb2+、Cr6+等均比較敏感[19]。我們前期的研究表明中國(guó)林蛙胚胎階段的生長(zhǎng)發(fā)育或幼體的生長(zhǎng)發(fā)育、變態(tài)等均受到水體氟脅迫的影響[20]。然而，有關(guān)中國(guó)林蛙自胚胎階段起持續(xù)受到氟污染脅迫對(duì)其幼體生長(zhǎng)發(fā)育、變態(tài)及骨骼發(fā)育的影響尚未見報(bào)道。

本研究以中國(guó)林蛙(Ranachensinensis)胚胎為試驗(yàn)對(duì)象，按照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》和化學(xué)品測(cè)試方法[21-23]的要求,經(jīng)不同濃度的F-水體慢性暴露，研究了F-對(duì)蝌蚪幼體全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重、發(fā)育分期的影響以及F-對(duì)蝌蚪變態(tài)高峰期全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重、后肢長(zhǎng)、變態(tài)率、骨骼發(fā)育的影響,旨在為水域氟污染對(duì)兩棲動(dòng)物的生態(tài)毒理效應(yīng)研究提供豐富的客觀基礎(chǔ)資料，為水生生態(tài)系統(tǒng)保護(hù)和兩棲動(dòng)物水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 試驗(yàn)材料

中國(guó)林蛙卵于2016年3月采自陜西省西安市秦嶺山脈大峪水庫附近無污染的小池塘，將卵帶回實(shí)驗(yàn)室，依據(jù)Gosner[18]的分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)胚胎進(jìn)行分期，選取卵黃栓期(G12期)的中國(guó)林蛙胚胎作為試驗(yàn)材料。

氟化鈉(NaF)，分析純，購(gòu)自Sigma-Aldrich公司。試驗(yàn)前用蒸餾水配制成1 g·L-1NaF的母液，備用；試驗(yàn)開始時(shí)以室溫下曝氣3 d的自來水稀釋為試驗(yàn)所需質(zhì)量濃度的NaF暴露溶液。

1.2 慢性毒性試驗(yàn)

采用室溫下曝氣3 d的自來水作為試驗(yàn)用水，水溫(20±2) ℃，pH 6.8～7.0，明暗光周期為12 h:12 h。隨機(jī)將G12的中國(guó)林蛙胚胎放入50 cm×20 cm×20 cm(長(zhǎng)×寬×高)的玻璃缸中進(jìn)行暴露處理，每缸盛試驗(yàn)液4 L。依據(jù)地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[24]及環(huán)境中F-的賦存濃度，NaF暴露濃度設(shè)置為0、1、10、50、100 mg·L-1，各處理組均設(shè)置4個(gè)平行缸,每缸放入50尾林蛙胚胎。胚胎期間不投食，發(fā)育至蝌蚪階段開始定時(shí)投食煮熟的菜葉和蛋黃。為了保證試驗(yàn)濃度的準(zhǔn)確性，每48小時(shí)更換全部試驗(yàn)液。暴露試驗(yàn)持續(xù)至任一處理組中有半數(shù)以上的蝌蚪發(fā)育至變態(tài)高峰期(G42期，前肢伸出期)時(shí)終止。

分別于暴露后25 d和40 d時(shí)，從各處理組撈取20尾蝌蚪(每缸隨機(jī)撈取5尾蝌蚪)用多聚甲醛固定，分別測(cè)量各只蝌蚪的全長(zhǎng)(從吻端至尾端)、體長(zhǎng)(從吻端到泄殖腔)、體重、并依據(jù)Gosner分期標(biāo)準(zhǔn)對(duì)蝌蚪進(jìn)行發(fā)育分期的判斷。當(dāng)蝌蚪發(fā)育至G42期時(shí)，記錄各處理組的變態(tài)進(jìn)程，并對(duì)G42期蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和后肢長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)量。

1.3 氟離子濃度的測(cè)定

慢性暴露試驗(yàn)設(shè)置的NaF濃度為0、1、10、50、100 mg·L-1，對(duì)應(yīng)的F-濃度分別為0、0.45、4.52、22.62、45.24 mg·L-1。采用氟復(fù)合電極(STISE22, Ohaus Instrument Co. Ltd)測(cè)定暴露液中的實(shí)際F-的濃度[19]，測(cè)得0、1、10、50、100 mg·L-1NaF暴露液中的F-濃度分別為：0.4±0.05、0.7±0.14、4.2±0.24、19.4±1.17、42.8±1.36 mg·L-1(n=5)。

1.4 形態(tài)指標(biāo)的測(cè)定

采用電子游標(biāo)卡尺(桂林廣陸電子數(shù)顯游標(biāo)卡尺，測(cè)量范圍150 mm,精確度0.01 mm)測(cè)定全長(zhǎng)、體長(zhǎng)和后肢長(zhǎng)；用SsrtoriusBS124S型電子天平(精確度0.0001 g)測(cè)量蝌蚪體重；于Zeiss Discovery V12型體式顯微鏡下觀察蝌蚪的發(fā)育分期。

1.5 骨骼染色

取各處理組中國(guó)林蛙G42期蝌蚪各3尾進(jìn)行骨骼染色。蝌蚪骨骼染色采用改良后的Taylor和Vandyke[25]的方法進(jìn)行骨骼雙染色，經(jīng)茜素紅(alizarin red)和阿利新蘭(alcian blue)染色后，再經(jīng)甘油透明，雙染色骨骼標(biāo)本硬骨呈紫紅色，軟骨呈藍(lán)色。用Zeiss Discovery V12型體式顯微鏡觀察，佳能7 D數(shù)碼相機(jī)進(jìn)行圖像采集。本實(shí)驗(yàn)中骨骼名稱均采用Pugener和Maglia[26]等的骨骼術(shù)語進(jìn)行描述。

1.6 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件處理。運(yùn)用單因素方差分析(One-way ANOVA)比較各處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重及后肢長(zhǎng)的差異；通過Mann-Whitney U-test比較各處理組蝌蚪的發(fā)育分期；通過Kaplan-Meier曲線描述了各處理組蝌蚪的累積變態(tài)率。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(X±SD)表示，P<0.05、P<0.01表示有顯著性差異。

2 結(jié)果(Results)

2.1 F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪生長(zhǎng)發(fā)育的影響

中國(guó)林蛙G12期胚胎經(jīng)不同濃度F-慢性暴露25 d和40 d后，各處理組蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)分別見圖1、圖2。慢性暴露25 d后，與對(duì)照組相比，4.2 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)和體重均顯著增加(P<0.01)，而發(fā)育分期并未受到顯著影響(P>0.05)。然而，42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和發(fā)育分期均顯著低于對(duì)照組(P<0.01、P<0.05)(圖1)。

慢性暴露40 d后，與對(duì)照組相比，0.7 mg·L-1F-和4.2 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和發(fā)育分期各指標(biāo)均無顯著差異；而19.4 mg·L-1F-和42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和發(fā)育分期均受到顯著抑制(P<0.05、P<0.01)(圖2)。

2.2 F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪變態(tài)率的影響

Kaplan-Meier曲線描述了不同F(xiàn)-濃度處理組林蛙蝌蚪的累積變態(tài)率(圖3)。當(dāng)慢性暴露試驗(yàn)進(jìn)行到60 d時(shí)，對(duì)照組、0.7 mg·L-1F-和4.2 mg·L-1F-處理組中開始有蝌蚪發(fā)育至G42期，而19.4 mg·L-1F-和42.8 mg·L-1F-處理組G42期蝌蚪的出現(xiàn)較對(duì)照組分別延遲了1 d和2 d(圖3A)。當(dāng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(F-慢性暴露78 d)，對(duì)照組、0.7、4.2、19.4和42.8 mg·L-1F-處理組的變態(tài)率分別是43.75%、45%、50%、31.25%、18.75%(圖3B)；即與對(duì)照組相比，0.7 mg·L-1F-處理組蝌蚪的變態(tài)率未受到顯著影響(P>0.05)，4.2 mg·L-1F-處理組蝌蚪的變態(tài)率顯著升高(P<0.05)，而19.4 mg·L-1F-和42.8 mg·L-1F-慢性暴露顯著抑制了林蛙蝌蚪的變態(tài)率(P<0.05)(圖3B)。

圖1 不同濃度F-暴露25 d時(shí)對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪生長(zhǎng)和發(fā)育的影響注：星號(hào)表示與對(duì)照組相比存在顯著差異(* P<0.05，** P<0.01)；數(shù)據(jù)表示X±SD，n=20，下同。Fig. 1 Effects of fluoride exposure on growth and development of R. chensinensis tadpoles on day 25 after fluoride treatment at various concentrationsNote: Asterisk indicate significant difference between the treatments and the control (* P<0.05, ** P<0.01). Bars represent the mean values±SD (n=20). The same below.

圖2 不同濃度F-暴露40 d時(shí)對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪生長(zhǎng)和發(fā)育的影響Fig. 2 Effects of fluoride exposure on growth and development of R. chensinensis tadpoles on day 40 after fluoride treatment at various concentrations

2.3 F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙G42期蝌蚪形態(tài)指標(biāo)的影響

各處理組G42期蝌蚪形態(tài)指標(biāo)的測(cè)量結(jié)果見圖4。如圖4所示，經(jīng)F-慢性暴露后，僅42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)較對(duì)照組顯著降低(P<0.01)，而其他各處理組蝌蚪的全長(zhǎng)與對(duì)照組相比均無顯著變化(P>0.05)；各處理組蝌蚪的體長(zhǎng)和后肢長(zhǎng)均受到顯著抑制(P<0.05)；此外，4.2 mg·L-1F-和19.4 mg·L-1F-處理組蝌蚪的體重較對(duì)照組顯著降低(P<0.05)。

圖3 不同濃度F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪變態(tài)率的影響Fig. 3 (A) Time course of cumulative metamorphosis percent (-ln scale) by the Kaplan-Meier analysis in R. chensinensis tadpoles exposed to control and different concentrations of F-(B) Percent metamorphosis of R. chensinensis tadpoles exposed to control and different concentrations of F- at the end of the experiment (on the 78 day)

圖4 不同濃度F-暴露對(duì)中國(guó)林蛙G42期蝌蚪生長(zhǎng)和發(fā)育的影響Fig. 4 Effects of fluoride exposure on size of R. chensinensis tadpoles at stage G42 after fluoride treatment at various concentrations

圖5所示為各處理組G42期蝌蚪形態(tài)指標(biāo)比。結(jié)果表明，經(jīng)F-慢性暴露后，與對(duì)照相比，0.7 mg·L-1F-和4.2 mg·L-1F-處理組全長(zhǎng)/體長(zhǎng)顯著增加(P<0.05)，體重/體長(zhǎng)則顯著降低(P<0.01)；此外，4.2、19.4、42.8 mg·L-1F-各處理組后肢長(zhǎng)/體長(zhǎng)均顯著降低(P<0.01)，42.8 mg·L-1F-處理組的體重/后肢長(zhǎng)較對(duì)照組顯著升高(P<0.05)。

中國(guó)林蛙蝌蚪幼體經(jīng)過78 d的氟離子慢性暴露以后，依據(jù)G42期中國(guó)林蛙蝌蚪的體長(zhǎng)、體重和后肢長(zhǎng)等生長(zhǎng)指標(biāo)和變態(tài)率為觀察指標(biāo)。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，與對(duì)照組相比，0.7 mg·L-1F-處理組的體長(zhǎng)和后肢長(zhǎng)均受到顯著抑制(P<0.05)。因此，中國(guó)林蛙蝌蚪幼體的78 d生長(zhǎng)毒性最低可觀察效應(yīng)濃度(LOEC)為0.7 mg·L-1。

2.4 F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙G42期蝌蚪骨骼發(fā)育的影響。

采用改良后的骨骼雙染色方法對(duì)中國(guó)林蛙G42期蝌蚪進(jìn)行骨骼染色，經(jīng)雙染色后的骨骼標(biāo)本硬骨呈紫紅色，軟骨呈藍(lán)色，結(jié)果見圖6。如圖6所示：與對(duì)照組相比，19.4 mg·L-1F-處理組蝌蚪的副碟骨、喙上骨和額頂骨的骨化程度更好(圖6-4b)，而0.7、4.2和42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的喙上骨和額頂骨的骨化程度均受到不同程度的抑制(圖6-2b,圖6-3b,圖6-5b)。此外，42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的脊柱骨化程度受到明顯抑制(圖6-5c)，而其他處理組蝌蚪的脊柱骨化并未發(fā)生明顯變化(圖6-2c,圖6-3c,圖6-4c)。

中國(guó)林蛙蝌蚪肩帶和前肢主要由肩胛骨、肱骨和橈骨組成。與對(duì)照組相比，42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的肩胛骨、肱骨和橈骨骨化程度受到明顯抑制(圖6-5d)，其他處理組蝌蚪的肩胛骨、肱骨和橈骨骨化程度并未發(fā)生明顯變化(圖6-2d,圖6-3d,圖6-4d)。中國(guó)林蛙蝌蚪腰帶和后肢主要由髂骨、股骨和脛腓骨組成。0.7、4.2和19.4 mg·L-1F-處理組蝌蚪的髂骨、股骨和脛腓骨的骨化程度并未發(fā)生明顯變化(圖6-2e,圖6-3e,圖6-4e)，而42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的髂骨、股骨和脛腓骨的骨化程度受到一定抑制(圖6-5e)。

圖5 不同濃度F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪G42期形態(tài)指標(biāo)比的影響Fig. 5 Effects of fluoride exposure on body index ratios of R. chensinensis tadpoles at stage G42 after fluoride treatment at various concentrationsNote: (A) The ratio of total length to body length (TL/BL), (B) the ratio of body weight to body length (BW/BL), (C) the ratio of hind-limb length to body length (HLL/BL) and (D) the ratio of body weight to hind-limb length (BW/HLL).

3 討論(Discussion)

動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的變化是表征污染物毒性效應(yīng)的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)中，當(dāng)中國(guó)林蛙G12期胚胎經(jīng)F-慢性暴露25 d時(shí)，4.2 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)和體重均較對(duì)照組顯著升高，但當(dāng)暴露時(shí)間延長(zhǎng)到40 d時(shí)，這種促進(jìn)效應(yīng)并未延續(xù)。我們之前的研究表明，中國(guó)林蛙G26期蝌蚪經(jīng)4.1 mg·L-1F-慢性暴露15 d和30 d時(shí)，蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育均未受到顯著影響[20]。分析認(rèn)為，這種差異可能是由于蝌蚪所處發(fā)育階段不同，不同生理特性導(dǎo)致了其對(duì)化學(xué)污染物敏感性的差異[27-28]。此外，本研究中，F(xiàn)-慢性暴露25 d時(shí)，僅42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和發(fā)育分期受到顯著抑制，而暴露至40 d時(shí)，19.4 mg·L-1F-和42.8 mg·L-1F-處理組蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)、體重和發(fā)育分期均受到顯著抑制。我國(guó)制定的地表水氟離子環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為1.5 mg·L-1。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見，在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)F-暴露濃度對(duì)林蛙蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育并未造成不利的影響，然而，高于該標(biāo)準(zhǔn)的F-暴露對(duì)林蛙蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育具有一定的抑制作用。以往的大量研究都表明，氟化物暴露可抑制水生動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育[29-30]，氟暴露導(dǎo)致的生長(zhǎng)抑制可能與機(jī)體的代謝功能受到抑制有關(guān)[31-32]。

變態(tài)是無尾兩棲動(dòng)物生活史的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，變態(tài)率的高低直接影響著陸生成體蛙的數(shù)量[33]。本研究結(jié)果表明，經(jīng)4.2 mg·L-1F-慢性暴露后，中國(guó)林蛙蝌蚪的變態(tài)率顯著升高，而19.4 mg·L-1F-和42.8 mg·L-1F-慢性暴露導(dǎo)致中國(guó)林蛙蝌蚪變態(tài)率的顯著降低。該結(jié)果表明，適量的F-暴露能促進(jìn)兩棲類動(dòng)物的變態(tài)，而過量的F-則抑制兩棲類動(dòng)物的變態(tài)，這與我們之前的報(bào)道相一致[19]。但不同兩棲類物種或不同發(fā)育階段幼體經(jīng)F-暴露后，其變態(tài)率對(duì)F-的響應(yīng)濃度不同[34]。目前，關(guān)于氟離子對(duì)兩棲動(dòng)物變態(tài)率的影響機(jī)制尚不明確。推測(cè)可能由于適量F-有益于動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，進(jìn)而促進(jìn)了蝌蚪的變態(tài)[35]。另外，兩棲動(dòng)物變態(tài)過程是由甲狀腺激素所嚴(yán)密調(diào)控的[36]，高濃度F-暴露導(dǎo)致蝌蚪變態(tài)率的下降可能是由于機(jī)體甲狀腺激素的動(dòng)態(tài)平衡受到了干擾[13]。

此外，本研究結(jié)果顯示，42.8 mg·L-1F-慢性暴露導(dǎo)致了中國(guó)林蛙變態(tài)高峰期蝌蚪的全長(zhǎng)、體長(zhǎng)和后肢長(zhǎng)的顯著降低。大量的研究表明，變態(tài)個(gè)體小的幼體死亡率較高[37-39]，而且個(gè)體小的幼體脂肪存量不足，可導(dǎo)致過冬存活率降低及其發(fā)育成熟和初次繁殖時(shí)間的推遲[40]。另外，42.8 mg·L-1F-處理組變態(tài)高峰期蝌蚪的體重與后肢長(zhǎng)比值較對(duì)照組相比顯著升高，顯然，這將不利于中國(guó)林蛙蝌蚪登陸后的跳躍，可能會(huì)導(dǎo)致其在自然環(huán)境中被捕食風(fēng)險(xiǎn)的增加[41]。這些不利因素都將最終導(dǎo)致兩棲動(dòng)物種群數(shù)量的下降[42]。因而，高濃度F-慢性暴露對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪變態(tài)登陸后的健康具有潛在的不利影響。

兩棲類變態(tài)過程中骨骼的骨化是兩棲動(dòng)物骨骼重構(gòu)的重要一環(huán)，目的是通過增加骨密度來增強(qiáng)支撐能力，從而適應(yīng)從水生到陸生生活方式的轉(zhuǎn)變[43]。本研究中，42.8 mg·L-1F-處理組中國(guó)林蛙變態(tài)高峰期蝌蚪的后肢髂骨、股骨和脛腓骨的骨化程度受到一定的抑制，加之其后肢長(zhǎng)也顯著降低，這可能會(huì)對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪的游動(dòng)能力和登陸之后的跳躍能力造成不利影響[44]。一般認(rèn)為，骨骼骨化受甲狀腺激素調(diào)控[45-46]。Zhao等[13]的研究表明，50 mg·L-1NaF慢性暴露可導(dǎo)致中華大蟾蜍蝌蚪的骨化受到明顯抑制，并指出氟離子可以通過影響脫碘酶基因的表達(dá)和甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞高度等干擾甲狀腺激素的動(dòng)態(tài)平衡，最終導(dǎo)致蝌蚪骨化不完全。

總之，水域氟污染長(zhǎng)期脅迫可對(duì)中國(guó)林蛙蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育指標(biāo)、變態(tài)和骨骼骨化造成不利影響，主要表現(xiàn)為高濃度F-水體暴露會(huì)顯著抑制蝌蚪的生長(zhǎng)發(fā)育，并導(dǎo)致變態(tài)率下降、變態(tài)高峰期個(gè)體小、以及蝌蚪骨骼骨化程度的下降。氟離子暴露對(duì)這些指標(biāo)的不利影響可能會(huì)造成中國(guó)林蛙蝌蚪變態(tài)后登陸個(gè)體死亡率的增加，最終導(dǎo)致中國(guó)林蛙種群數(shù)量的下降。